枸杞多糖對(duì)地塞米松誘導(dǎo)的小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響

1、枸杞多糖對(duì)地塞米松誘導(dǎo)的小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響                        【摘要】  目的 探討枸杞多糖（LBP）對(duì)地塞米松（DEX）誘導(dǎo)的小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響。方法 以水提取-乙醇沉淀法制備LBP，分別給予實(shí)驗(yàn)小鼠每天口服LBP 25、50、100 mg,10 d后體外實(shí)驗(yàn)取小鼠脾臟細(xì)胞與10-5、10-6、10-7 mol

2、L的DEX共同孵育，6 h后檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)給予小鼠腹腔注射DEX（25 mg/kg），10 h后取脾臟細(xì)胞直接檢測(cè)凋亡率。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物預(yù)先口服LPB 10 d后，可使DEX誘導(dǎo)的小鼠脾臟細(xì)胞凋亡率顯著降低，并呈現(xiàn)量效關(guān)系。結(jié)論 LPB的免疫調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用與其對(duì)免疫細(xì)胞的保護(hù)、降低免疫細(xì)胞凋亡有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  枸杞多糖; 脾臟細(xì)胞; 凋亡; 小鼠Abstract:Objective To study the effect of polysaccharide from lycium barbarum (LBP) on spleen cell apoptosis induc

3、ed with dexamethasone in mice. Methods The Kunming mice were orally administrated with 25, 50, and 100 mg LPB everyday respectively for 10 days. Then the mice were divided into two groups (A groups for in vivo experiment and B groups for in vitro experiment). Spleen cells which was separated from mi

4、ce in group A was incubated with dexamethasone at the doses of 10-5, 10-6, and 10-7molL for 6 hours, then the rates of apoptosis were detected. 10 hours after intraperitoneal injection of dexamethasone at the dose of 25 mg/kg in mice in group B, spleen cells were separated and the rates of apoptosis

5、 were detected immediately. Results Oral administration with LBP for 10 days could significantly lower the apoptosis rates of spleen cells of mice induced with dexamethasone with dosedependent effects. Conclusion The upregulation of LBP on immunofunction is related to its effects of low cell apoptos

6、is.Key words:lycium barbarum; polysaccharide;spleen cell;  apoptosis細(xì)胞凋亡(apoptosis)又稱程序性細(xì)胞死亡，是細(xì)胞生理性死亡的主要形式，在控制細(xì)胞增殖和分化、腫瘤的發(fā)生和生長(zhǎng)等方面都起著重要的作用，也是機(jī)體免疫衰老過程中重要的分子機(jī)制之一?？梢哉T發(fā)細(xì)胞發(fā)生凋亡的因素很多，本研究以地塞米松與小鼠脾臟細(xì)胞共同孵育，誘發(fā)脾臟細(xì)胞凋亡為模型，探討枸杞多糖（lycium  barbarium palysacharides, LBP）在體外和體內(nèi)對(duì)大鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。  &

7、#160; 1材料與方法1.1材料與主要試劑      枸杞多糖（LBP）：寧夏枸杞，購(gòu)自廣州市藥材公司，乙醇回流提取，LBP含量為48.6%,冷凍干燥備用。    24孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板：德國(guó)Greiner公司。    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康成年昆明種小鼠,體質(zhì)量1822 g，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄兼用,合格證號(hào)99A057。1.2方法              &

8、#160;              2結(jié) 果2.1地塞米松對(duì)離體小鼠脾臟細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用      體外實(shí)驗(yàn)中，與小鼠脾臟細(xì)胞共同孵育6 h后，10-5、10-6、10-7molL 的地塞米松均有誘發(fā)小鼠脾臟細(xì)胞脾臟細(xì)胞凋亡的作用，促進(jìn)其DNA片段化，表現(xiàn)出明顯的凋亡細(xì)胞特征。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，小鼠腹腔注射地塞米松（25 mg/kg）10 h后,表現(xiàn)出明顯地誘發(fā)小鼠脾臟細(xì)胞脾臟細(xì)胞凋亡的作用，差異具有極顯著性(P0.0

9、1)。見表1。表1DEX對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用 略2.2枸杞多糖對(duì)地塞米松誘導(dǎo)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響      將胃飼不同含量枸杞多糖10 d的小鼠脾臟細(xì)胞懸液，加入10-6molL地塞米松孵育6 h后，觀察枸杞多糖對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果表明，25 mgd枸杞多糖即可去除地塞米松在體外對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異具有極顯著性。 隨著LPB濃度的增加，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脾臟細(xì)胞的凋亡率進(jìn)一步下降；對(duì)胃飼不同含量枸杞多糖10 d的小鼠腹腔注射地塞米松（25 mg/kg）,10 h后觀察枸杞多糖對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果如

10、表2所示，胃飼100 mgd枸杞多糖10 d后,能顯著降低地塞米松對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用（P0.05）。表2LPB對(duì)DEX誘導(dǎo)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡的影響略3討 論    細(xì)胞凋亡是體內(nèi)細(xì)胞的一種生理性調(diào)節(jié)機(jī)制，它與有絲分裂功能相反，是調(diào)節(jié)細(xì)胞群體減少。細(xì)胞凋亡不僅在胚胎發(fā)生、器官發(fā)育及保持機(jī)體自穩(wěn)狀等過程中至關(guān)重要，而且在控制細(xì)胞增殖和分化、腫瘤的發(fā)生和生長(zhǎng)以及在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)中有重要作用，因此對(duì)細(xì)胞凋亡的研究引起了人們極大的興趣，并不斷向基因水平深入1，2。 迄今已證實(shí)許多因素都可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，無論是腹腔注射或在體外與細(xì)胞共同孵育，地

11、塞米松都可以誘導(dǎo)小鼠脾臟細(xì)胞出現(xiàn)顯著的凋亡現(xiàn)象，提示糖皮質(zhì)激素對(duì)機(jī)體免疫細(xì)胞具有明顯的抑制作用。    枸杞為傳統(tǒng)中藥之一，研究表明枸杞中含有多種營(yíng)養(yǎng)成分和微量元素，其主要有效成分為枸杞多糖。枸杞多糖具有廣泛的生物學(xué)作用，包括促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗輻射3，4等。文獻(xiàn)表明，枸杞多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、腎臟細(xì)胞和心肌細(xì)胞等多種細(xì)胞有保護(hù)作用5。枸杞提取物在體外與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)胞共同孵育時(shí)，能解除糖皮質(zhì)激素對(duì)免疫細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用6。本研究采用地塞米松誘導(dǎo)小鼠脾臟細(xì)胞凋亡為模型，證明了在預(yù)先給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口服枸杞多糖25、50、100 mg 10 d后

12、，其脾臟細(xì)胞對(duì)體外與地塞米松共同孵育時(shí)所誘導(dǎo)產(chǎn)生的凋亡率明顯降低（P0.01）；將地塞米松給藥方式改為腹腔注射（25 mg/kg）時(shí)，預(yù)先口服枸杞多糖100 mg 10 d后，能解除地塞米松對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脾臟細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，使細(xì)胞凋亡率明顯降低（P0.05）。枸杞多糖在體內(nèi)和體外對(duì)地塞米松誘導(dǎo)脾臟細(xì)胞的凋亡，均有明顯的解除作用，提示枸杞多糖對(duì)脾臟細(xì)胞具有強(qiáng)大的保護(hù)作用。枸杞多糖對(duì)機(jī)體免疫細(xì)胞的保護(hù)作用，與其免疫促進(jìn)和免疫調(diào)節(jié)作用有密切關(guān)系，但其機(jī)理目前尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。  【參考文獻(xiàn)】  1 蔡宇，余紹蕾，張榮華. 枸杞多糖對(duì)染鉛小鼠行為功能保護(hù)及腦細(xì)胞Fas抗原表達(dá)的影響J.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué),2005,22(6):533.2 李德遠(yuǎn),湯堅(jiān),徐現(xiàn)波,等.枸杞多糖對(duì)慢性輻射小鼠細(xì)胞凋亡及Bcl-2基因表達(dá)的影響 J.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2005,27(3)：235.3 劉彥平，李積東. 枸杞多糖對(duì)小鼠NK細(xì)胞和白細(xì)胞活性的免疫調(diào)節(jié)作用J.青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,22(1):1.4 徐曼艷,王煜飛,張紅峰,等.枸杞多糖對(duì)四氧嘧啶損傷離體大