豬血中超氧化物歧化酶(SOD)的分離純化及活力測定、同工酶電

1、 所以，樣 1、樣 2 和樣 3 的比活力分別為： 304.873 U/ml e1= b1/d1= =161.2048 U/mg 1.8903 mg /ml 173.103 U/ml e2= b2/d2= =800.6213 U/mg 0.2162 mg /ml 112.414 U/ml e3= b3/d3= =1503.7058 U/mg 0.0748 mg /ml 以除去變性蛋白沉淀物后的上清液（即樣 1）得到的 SOD 純化倍數(shù)為 n1=1，以各樣的 比活力計算純化倍數(shù)，樣 2 和樣 3 的純化倍數(shù)分別為： n2= e2/ e1=800.6213 U· mg-1/161.204

2、8 U· mg-1=4.96 n3= e3/ e1=1503.7058 U· mg-1/161.2048 U· mg-1=9.32 酶活力測定的結果匯總于下表： 提純步驟 除血蛋白上清 熱變性后上清 丙酮沉淀后的 酶液總 體積 ml 10 9.5 8.5 蛋白質(zhì) mg/ml 1.8903 0.2162 0.0748 酶活性 U/ml 304.873 173.103 112.414 總活性 U 3048.276 1644.483 955.517 比活性 U/mg 161.2048 800.6213 1503.706 回收率 (% 100 53.95 31.35 純化

3、倍 數(shù) 1 4.96 9.32 3. SOD 同工酶鑒定 同工酶電泳凝膠中出現(xiàn)兩條透明酶帶，模式圖繪制如下： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 兩條透明的酶帶說明豬血中含有 SOD 同工酶，同工酶將核黃素經(jīng)光照后產(chǎn)生的活性氧 O 2 （氧自由基）清除，使得凝膠呈無色透明。 四、 分析 超氧化物歧化酶（SOD）廣泛存在于真核細胞核和原核細胞的細胞質(zhì)、線粒體和葉綠體 中，可清除生物體內(nèi)超氧陰離子自由基，有效抵抗氧自由基對機體的傷害1。通過對 SOD 的提取、分離和純化，發(fā)現(xiàn)豬血中含有豐富的 SOD，且 SOD 的活性較高。此外，通過對提 取樣液的聚丙烯酰胺凝膠，可以看出豬血中還含有 SO

4、D 的同工酶。 本實驗中分離純化的 SOD 在丙酮沉淀后的比活力為 1503.7058 U/mg，與李敏康2等研 究顯示的豬血 SOD 比活力較為一致。但前人對豬血中 SOD 活力研究表明，在 60下處理 15 min，SOD 活力最大，比活力可達 4 000 U/mg 以上3-4，更有研究表明豬血中 SOD 比活 力可以達到 6 000 U/mg 以上5-6，影響豬血中 SOD 活性的因素很多，從豬血中提取 SOD 的 過程中，若要分離出純度很高的 SOD，熱變性時的溫度是至關重要的因素3,7-8。實驗結果 顯示豬血中 SOD 回收率僅為 31.35%，純化倍數(shù)僅有 9.32。而前人在丙酮沉

5、淀后 SOD 的回 收率可以達到近 60%甚至更高4,6，晏本菊4等從豬血中制備 SOD 時純化倍數(shù)達 26.00。 SOD 同工酶電泳結果表明，豬血中含有 SOD 的同工酶，且活性較高，但是種類數(shù)量很 少。 對于 SOD 的同工酶， 在水生生物 （魚類等） 和植物中研究較多9-12， 而關于豬血中 SOD 同工酶鮮見報道。對其他動物和植物的研究顯示，SOD 的同工酶種類較多，分子量分布也 較為廣泛9-12。 本實驗中提取的豬血中的 SOD 的比活力相對較低，回收率和純化倍數(shù)也非常低，鑒定 出的 SOD 同工酶數(shù)量極少， 可能的原因有供試用豬血新鮮程度不夠， 導致其中 SOD 已有部 分失活，

6、而提取設備和條件的不足也是導致實驗結果不夠理想的重要原因，此外，操作人員 對提取過程的熟練程度也是影響結果的因素之一。 參考文獻 1 陳鴻鵬,譚曉鳳.超氧化物歧化酶（SOD）研究綜述J.經(jīng)濟林研究,2007,25(1:5965. 2 李敏康,錢冬明,宋宏新.豬血 SOD 提取條件的研究J.陜西科技大學學報,2007,25(3:50 52. 3 周存六 , 程元珍 , 方紅美 , 等 . 豬血中 SOD 的制備工藝及其應用研究 J. 肉類工業(yè) ,2010, (1:3335,39. 4 晏本菊 , 茍琳 , 楊婉身 , 等 . 豬血生產(chǎn) SOD 及復合氨基酸研究初報 J. 四川農(nóng)業(yè)大學學 報,19

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