首都科技條件平臺生物醫(yī)藥專業(yè)孵化器

1、首都科技條件平臺生物醫(yī)藥專業(yè)孵化器中關(guān)村生物醫(yī)藥園農(nóng)業(yè)生物技術(shù)開放實驗室服務(wù)手冊北京中關(guān)村上地生物科技發(fā)展有限公司2004年9月一、簡 介中關(guān)村生物醫(yī)藥園生物工程實驗室主要從事農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)研究和植物基因工程技術(shù)研究工作，面向以農(nóng)業(yè)生物技術(shù)為研發(fā)對象的企業(yè)和科研院所。實驗室配有多名博士、碩士和專業(yè)技術(shù)人員，為項目的服務(wù)提供了可靠的技術(shù)保障。農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)研究室擁有微生物培養(yǎng)與純化系統(tǒng)、細(xì)菌鑒定系統(tǒng)、實時熒光定量PCR系統(tǒng)、凝膠成像等完備的儀器設(shè)備。在獸醫(yī)微生物方面，可完成病原學(xué)、疾病診斷技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和免疫增強(qiáng)技術(shù)、疫苗開發(fā)等研究工作；在飼用微生物方面，可完成菌種篩選、發(fā)酵工藝和穩(wěn)定化技術(shù)

2、的研究工作；在生物農(nóng)藥方面，可完成菌種篩選、發(fā)酵工藝和新型制劑技術(shù)的研究工作。植物基因工程技術(shù)研究室擁有組織培養(yǎng)系統(tǒng)、實時熒光定量PCR系統(tǒng)、基因槍、超速離心機(jī)等完備的儀器設(shè)備，可完成功能基因的分離、克隆和優(yōu)化；高效植物表達(dá)載體的構(gòu)建技術(shù)；功能基因的高效轉(zhuǎn)化技術(shù)；分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)；轉(zhuǎn)基因生物和產(chǎn)品的分子檢測；農(nóng)作物種子純度與真?zhèn)涡缘姆肿予b別等工作。二、服務(wù)流程 （1）客戶根據(jù)服務(wù)項目內(nèi)容，選擇填寫生物工程實驗室病原微生物檢測單、生物工程實驗室cDNA文庫訂購單、生物工程實驗室研發(fā)服務(wù)項目申請單、生物工程實驗室分析測試申請單； （2）與客戶就服務(wù)內(nèi)容的可行性、進(jìn)度、實施方案及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)等內(nèi)容進(jìn)

3、行洽談，必要時簽訂服務(wù)合同；（3）雙方恪守各自職責(zé)，協(xié)調(diào)完成服務(wù)項目；（4）對于實驗過程中出現(xiàn)的問題，應(yīng)與客戶及時溝通，協(xié)商解決，以客戶滿意為目的； （5）項目成果移交客戶，記錄服務(wù)效果。三 服務(wù)內(nèi)容（一）農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)研究室1 菌種篩選 本實驗室提供獸醫(yī)微生物、飼用微生物和生物農(nóng)藥菌種篩選的服務(wù)。根據(jù)客戶提出的要求，選用合理的方案。2 原核蛋白的表達(dá)與純化將克隆化基因?qū)氪竽c桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法在蛋白質(zhì)純化、定位、功能分析方面都是很有價值的。 提供的服務(wù)如下：l 目的基因的克?。何覀冇卸喾N原核表達(dá)載體（如：pET System、QIAexpress System）供客戶選擇，完全能滿

4、足不同的實驗要求。我們會提供克隆好的質(zhì)粒、菌株及測序報告，時間為23周。l 蛋白質(zhì)的原核表達(dá)及純化：我們將這一過程分為前期發(fā)酵條件的初步實驗，純化工藝的確定，后期的蛋白質(zhì)的大量制備以及蛋白質(zhì)鑒定三個部分，時間為13個月，最終我們提供給您 初步的發(fā)酵條件；比較合理的、可以放大的純化工藝；純化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白電泳結(jié)果和詳細(xì)的實驗記錄；l 交付的蛋白將通過Western檢驗以確定表達(dá)的蛋白的正確性，Western所用的抗體由客戶提供。3 真核與原核表達(dá)載體的構(gòu)建由客戶提供基因和表達(dá)載體，構(gòu)建流程由客戶或本室確定。預(yù)計完成時間：13個月。根據(jù)構(gòu)建步驟的多少和難易程度而定。4

5、 真核蛋白的表達(dá)與純化將克隆的基因?qū)氘叧嘟湍讣?xì)胞用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法在蛋白質(zhì)純化、功能分析及臨床應(yīng)用方面都是很有價值的。用該系統(tǒng)成功表達(dá)的外源基因有三十多種，其中大部分為醫(yī)藥制品，如人白介素2、人血清白蛋白、腫瘤壞死因子、乙肝表面抗原、人巨細(xì)胞病毒抗原、抗凝血銀子水蛭素衍生物等，有些即將進(jìn)入市場。也可在畢赤酵母細(xì)胞中生產(chǎn)完整的天然蛋白質(zhì)分子，以研究其功能。我們提供的表達(dá)與純化的工藝見第4條。5 抗體的制備l 抗體委托生產(chǎn)內(nèi)容: 雞、兔或羊的多克隆抗體生產(chǎn) l 客戶需要提供以下物品中的一種：（1） 目的cDNA或EST克隆 （2） 目的抗原（蛋白或多肽）l 服務(wù)成果：（1） 至少20mg

6、高效價特異性抗體。（2） 提供ELISA檢測及相應(yīng)報告；（3） 根據(jù)客戶需要，可提供Western Blot及免疫組化檢測服務(wù)，包括提供全部實驗數(shù)據(jù)及照片； （4） 如果客戶需要，可提供親和純化的多克隆抗體。 6 分析檢測（1） ELISA檢測實驗室備有美國BIO-RAD公司生產(chǎn)的Model 550型酶標(biāo)儀，可方便地進(jìn)行蛋白樣品的ELISA檢測。（2） 病原微生物檢測本實驗室具有動物疫病診斷檢測工作平臺、分子生物學(xué)技術(shù)研究平臺和酶標(biāo)診斷技術(shù)研究平臺，擁有先進(jìn)的儀器設(shè)備和高級專業(yè)技術(shù)人才，可對豬、雞等動物病原菌進(jìn)行檢測。（二）植物基因工程研究室1 植物基因組文庫的構(gòu)建本實驗室可以為客戶提供從總D

7、NA提取、隨機(jī)剪切、載體連接、轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增到保存的基因組文庫構(gòu)建的全程服務(wù)。2 cDNA文庫的構(gòu)建l 技術(shù)路線：提取總RNA、純化mRNA、合成cDNA雙鏈、去除小片段、將雙鏈cDNA連接到載體、轉(zhuǎn)化或包裝、擴(kuò)增及保存。l 參數(shù)：庫容大于106克隆/5g mRNA，插入片斷大于300bp, 平均插入片斷長度可達(dá)1.3Kb。l EST測序。3 農(nóng)業(yè)重要功能基因的分離、克隆、優(yōu)化2.1 克隆、亞克隆客戶提供基因序列和材料,由本實驗室設(shè)計并合成引物,通過PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增的基因片斷回收,將其克隆到通用的載體上。2.2 Rapid amplification of cDNA Ends （RACE）通過對

8、文庫的篩選或使用簡并引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，常常只能獲得不完整的cDNA序列，為了得到cDNA全長，還需克隆出其余部分。RACE便是為此而設(shè)計，它使采用傳統(tǒng)篩庫的方法尋找全長基因的過程從幾個月，縮短為幾天。尤其對于低豐度基因的克隆優(yōu)勢更為顯著。4 單子葉與雙子葉植物表達(dá)載體的構(gòu)建由客戶提供基因和表達(dá)載體（也可由本實驗室提供），構(gòu)建流程由客戶或本室確定。預(yù)計完成時間：13個月。根據(jù)構(gòu)建步驟的多少和難易程度而定。5功能基因的高效轉(zhuǎn)化技術(shù)本實驗室具有水稻、玉米、棉花等各種農(nóng)作物的轉(zhuǎn)化體系，并能夠承擔(dān)相關(guān)功能基因的高效轉(zhuǎn)化。6 分子標(biāo)記輔助育種DNA分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)，是通過利用與目標(biāo)性狀緊密連鎖的DN

9、A分子標(biāo)記對目標(biāo)性狀進(jìn)行間接選擇的現(xiàn)代育種技術(shù)。該技術(shù)對目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)移，不僅可在早代進(jìn)行準(zhǔn)確、穩(wěn)定的選擇，而且可克服再度利用隱性基因時識別難的問題，從而加速育種進(jìn)程，提高育種效率。本實驗室負(fù)責(zé)設(shè)計引物、定位群體的構(gòu)建、目標(biāo)基因的精細(xì)定位以及分子鑒定。7 原核蛋白的表達(dá)與純化將克隆化基因?qū)氪竽c桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法在蛋白質(zhì)純化、定位、功能分析方面都是很有價值的。提供的服務(wù)如下：l 目的基因的克隆： 我們有多種原核表達(dá)載體（如：pET System、QIAexpress System）供客戶選擇，完全能滿足不同的實驗要求。我們會提供克隆好的質(zhì)粒、菌株及測序報告，時間為23周。l 蛋白質(zhì)的原

10、核表達(dá)及純化：我們將這一過程分為前期發(fā)酵條件的初步實驗，純化工藝的確定，后期的蛋白質(zhì)的大量制備以及及蛋白質(zhì)鑒定三個部分，時間為13個月，最終我們提供給您 初步的發(fā)酵條件；比較合理的、可以放大的純化工藝；純化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白電泳結(jié)果和詳細(xì)的實驗記錄；l 交付的蛋白將通過Western檢驗以確定表達(dá)的蛋白的正確性，Western所用的抗體由客戶提供。8 DNA、RNA的提取、純化植物基因工程實驗室備有超速離心機(jī)和不同規(guī)格的高速冷凍離心機(jī)，能夠提取人類、動物、植物和微生物不同組織和器官的DNA、G-DNA、RNA。9 質(zhì)粒DNA的提取、純化、酶切、連接實驗室備有的各種離心

11、機(jī)，恒溫孵育器和核酸電泳系統(tǒng)，能夠方便地對質(zhì)粒DNA進(jìn)行各種操作，以便構(gòu)建各種真核和原核載體。10 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備、轉(zhuǎn)化美國BIO-RAD公司的Gene PulserII型電轉(zhuǎn)化儀能夠制備高效的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，便于進(jìn)行基因克隆。11分析檢測（1）轉(zhuǎn)基因生物與產(chǎn)品的PCR檢測客戶僅需提供樣品和基因的序列。本室負(fù)責(zé)引物的設(shè)計、合成，樣品DNA的提取，PCR反應(yīng)程序的確定以及PCR結(jié)果的電泳分析等等。（2） 農(nóng)作物種子純度與真?zhèn)涡缘姆肿訖z測采用SSR分子標(biāo)記來檢測。微衛(wèi)星（ SSR ）是廣泛分布于真核生物基因組中的短串聯(lián)重復(fù)序列（17bp）， SSR 實驗一般檢測到的是一個單一的多等位

12、基因位點(diǎn)；是共顯性遺傳，可鑒別雜合子和純合子；結(jié)果重復(fù)性很高。通常使用聚丙烯酰胺凝膠電泳，分辨率高，可檢測出單拷貝差異。SSR 引物需由用戶提供，也可由用戶提供引物序列，委托本公司合成。參考收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：￥1500/課題；樣品量：30個樣品/課題。詳情面談。（3） 核酸、蛋白質(zhì)含量的測定瑞典生產(chǎn)的GeneQuan Pro型蛋白質(zhì)核酸定量測定儀可提供單、雙鏈DNA、寡聚核苷酸、蛋白質(zhì)的定量測定、Lowry法和BCA的測定服務(wù)。（4） DNA、RNA電泳分析植物基因工程實驗室備有不同電壓、功率的雙穩(wěn)和三穩(wěn)核酸電泳儀，以及不同規(guī)格的最新電泳槽，可對DNA和RNA分子量進(jìn)行分析，結(jié)合凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行分析，

13、還可判斷核酸的相對含量。（5） 常規(guī)PCR、Real-time PCR分析實驗室備有多臺普通型PCR、梯度PCR以及實時定量PCR儀，可方便地進(jìn)行基因擴(kuò)增，并提供高通量的PCR檢測分析。（6） 蛋白電泳分析實驗室備有美國BIO-RAD公司生產(chǎn)的不同型號和規(guī)格的電泳儀和電泳槽，可提供判斷各種蛋白分子量大小分析服務(wù)，確定目的物及其它雜蛋白的含量。（7） 蛋白質(zhì)純度分析實驗室備有日本島津公司生產(chǎn)的LC-2010型高效液相色譜儀，可提供蛋白質(zhì)等樣品的純度分析服務(wù)。 四、主要儀器設(shè)備清單 設(shè)備名稱規(guī)格型號生產(chǎn)單位熒光定量PCR儀MJ Research OPTION2美國MJ Research公司小容量低

14、溫離心機(jī)Eppendorf5417R德國Eppendorf公司凝膠成像系統(tǒng)Gel Doc EQ System,Pc White Light Transitluminator (slinversion)for Gel Doc 200 白光屏(含操作軟件)美國BIO-RAD公司蛋白電泳儀Power Pac Universal美國BIO-RAD公司蛋白電泳槽MP3多功能微型垂直板電泳槽(帶轉(zhuǎn)膜)美國BIO-RAD公司蛋白電泳槽BIO-RAD垂直電泳槽Sequi-Gen GT System (38*30cm)美國BIO-RAD公司超純水系統(tǒng)賽多利斯611DI德國賽多利斯公司基因?qū)雰x（電轉(zhuǎn)化儀）Gen

15、e Pulser Xcell美國BIO-RAD公司基因槍Bio-radPDS1000/HE系統(tǒng)美國BIO-RAD公司超聲波細(xì)胞破碎儀美國COLE-PARNER公司細(xì)菌鑒定系統(tǒng)半自動ATB法國梅里埃公司蛋白純化系統(tǒng)AKTA prime美國AMERSHAM Biosciences普通PCR儀MYCYCLER帶梯度美國BIO-RAD公司低溫濃縮離心干燥機(jī)（凍干機(jī)）CHRIST ALPHA1-4德國CHRIST公司CO2培養(yǎng)箱MCO-15AC日本三洋連續(xù)進(jìn)料玻璃反應(yīng)釜Normak-NSCR德國Normak公司氣譜島津GC-14CPTF日本島津濕性砂磨機(jī)DYNO-MILL-LAB瑞士粘度測定儀BROOK

16、FILD DV-II+PRO美國博力飛激光粒度分布儀MASTERSIZERS2000英國生物安全柜Forma A/B3 、6Ft臺式美國熱電超凈工作臺江蘇SW-CJ-2F 蘇州凈化設(shè)備公司中型臺式高速冷凍離心機(jī)Eppendorf5810R德國Eppendorf公司連續(xù)紫外分光光度計756PC上海光譜儀器廠水份測定儀DL38 51107551梅特勒-托利儀器（上海）有限公司萬能顯微鏡B241-32J02奧林帕斯五、附件生物工程實驗室病原微生物檢測單檢驗類別：報告編號：送樣單位聯(lián)系電話通訊地址臨床發(fā)病情況：病理剖檢情況：免疫情況：送檢樣品備注樣品數(shù)量檢測項目及依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：要求診斷結(jié)果時間雙方確認(rèn)以上

17、事項，按以上標(biāo)準(zhǔn)（方法）進(jìn)行相應(yīng)項目的檢測。收樣人（簽字）送樣人（簽字） 檢測結(jié)果： 年 月 日備注生物工程實驗室cDNA文庫訂購單公司收單編號： 收單日期-l 客戶信息 報告編號：l 樣品信息樣品名稱樣品種類（請選擇）Total RNA mRNA 細(xì)胞 組織 樣品描述組織來源RNA質(zhì)量要求實際濃度：g/l 濃度要求1ug/ul實際純度： 純度要求A260/A280>1.8RNA總量Total RNA _ul _ugmRNA _ul _ug請多預(yù)備 l, 供預(yù)實驗使用請確保樣品-70保存客戶要求載體類型 質(zhì)粒 噬菌體 產(chǎn)物形式連接液 cDNA文庫 轉(zhuǎn)化質(zhì)粒 cDNA平均長度1kb交貨內(nèi)容

18、Eppendorf管（-70保存）A4紙的實驗報告電泳圖譜 其他要求（請注明）備注注：l 若提供total RNA，需經(jīng)mRNA抽提后才能建庫，相應(yīng)費(fèi)用會有所提高。如直接提供新鮮組織，則計為RNA抽提和建庫兩項服務(wù)。l 若提供total RNA, 請附電泳圖譜照片?？蛻艉灻?日期： / / 生物工程實驗室研發(fā)服務(wù)項目申請單 報告編號：客戶姓名單位 （單位公章）職稱、職務(wù)固定電話手 機(jī)電子郵箱通訊地址郵 編研發(fā)項目 項目類別自然科學(xué)基金 863 國家科技攻關(guān)計劃 地方政府基金 企業(yè)創(chuàng)新基金 其它 自擬項目目的意義項目主要內(nèi)容使用主要儀器名稱大致時間實驗費(fèi)用金額（元）擬以何種方式付費(fèi)： 現(xiàn)金、支票、轉(zhuǎn)帳預(yù) 交 費(fèi)擬完成實驗時間實驗人員填 表 日 期生物工程實驗室分析測試申請單報告編號: 年 月 日申 請 單 位樣 品 名 稱批 號數(shù)量樣品狀態(tài)描述熔 點(diǎn)沸點(diǎn) 樣 品 性 質(zhì)（）有腐蝕 易燃 易揮發(fā)有 毒 易爆 易吸潮 無溶劑（）甲醇 乙醇 乙醚 丙酮 氯仿DMSO 水 吡啶 其它 樣 品 保 存（）室溫 干燥器 避光4 -20 -80用戶提供有關(guān)資料檢 測 項 目檢測標(biāo)準(zhǔn)及其它技術(shù)要求試樣提示（性質(zhì)