單工序落料模具設(shè)計(jì)說明書

1、分子生物學(xué)復(fù)習(xí)一、名詞解釋1、減色效應(yīng)：若變性DNA復(fù)性形成雙螺旋結(jié)構(gòu)后，其260nm紫外吸收降低的現(xiàn)象。（單鏈雙鏈）2、增色效應(yīng)：核酸分子解鏈變性成斷鏈，其紫外吸收值（260nm）增加的現(xiàn)象。（雙鏈單鏈）3、DNA變性：指核酸雙螺旋堿基對的氫鍵斷裂，雙鏈變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。4、復(fù)制子：以單一單位復(fù)制的任何一段DNA。5、半不連續(xù)復(fù)制：DNA復(fù)制時，每個復(fù)制叉中的前導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)復(fù)制的，而后隨鏈?zhǔn)且苑捶较蚝铣刹贿B續(xù)的短片段的復(fù)制方式。6、半保留復(fù)制：通過親本DNA雙螺旋兩鏈分開，每一條鏈作為模板合成新的互補(bǔ)鏈的復(fù)制方式。7、岡崎片段：相對比較短的DNA鏈（大約1000核苷

2、酸殘基），是在DNA的后隨鏈的不連續(xù)合成期間生成的片段。8、DNA載體：9、無義突變：在基因的正常終止密碼子之前產(chǎn)生一個終止密碼子的點(diǎn)突變。10、同義突變：即沉默突變，在密碼子中改變了一個堿基但沒有改變密碼子所編碼的氨基酸的點(diǎn)突變。11、移碼突變：在正常的DNA分子中，某位點(diǎn)插入或者缺失的堿基數(shù)目為非3的倍數(shù)，造成該位點(diǎn)之后的蛋白質(zhì)三聯(lián)體密碼子閱讀框發(fā)生改變，從而使一系列基因編碼序列產(chǎn)生移位錯誤的突變。12、分子克?。涸隗w外對DNA分子按照既定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入合適寄主，使其在寄主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。13、基因工程：在分子水平上對基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技

3、術(shù)，是將外源基因通過體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作。14、PCR：聚合酶鏈反應(yīng)，利用與DNA模板序列的兩端互補(bǔ)的一對寡聚核苷酸引物來擴(kuò)增一段DNA序列的反應(yīng)。一個PCR循環(huán)包括變性、退火（復(fù)性）和延伸三步。15、啟動子：是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合，并導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄開始的DNA序列。16、10序列：是幾乎所有啟動子都含有一個的6bp序列。該六聚體通常位于轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游10bp處，共有的10序列是TATAAT。17、35序列：在大多數(shù)啟動子中都可以找到的6bp序列。該六聚體一般位于轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游35bp處，共有的35序列是TTGACA。18、操縱子：是基因表

4、達(dá)的協(xié)調(diào)單位，由啟動子、操縱基因及其所控制的一組功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因所組成。19、操縱序列：是操縱子中的控制元件，在操縱子上調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。20、CAP：分解代謝激活蛋白同二聚體。21、增強(qiáng)子：位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)，能明顯增強(qiáng)啟動子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列。22、弱化子：一段位于結(jié)構(gòu)基因上游前導(dǎo)區(qū)，具有終止子結(jié)構(gòu)的短序列，RNA合成終止時，起終止轉(zhuǎn)錄信號作用的DNA序列。23、外顯子：真核細(xì)胞基因DNA中的編碼序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA并進(jìn)而翻譯為蛋白質(zhì)。24、內(nèi)含子：真核細(xì)胞基因DNA中的間插序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA，但隨即被剪除而不翻譯。25、順式作用元件：是

5、指對基因表達(dá)有調(diào)節(jié)活性的DNA序列，其活性只影響與其自身同處在一個DNA分子上的基因。26、反式作用因子：能直接或間接地識別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。27、RNA編輯：RNA加工的一種形式，是通過改變、插入或者刪除初生轉(zhuǎn)錄物特定部位的殘基而改變其中的核苷酸序列的現(xiàn)象。28、可變mRNA加工：將一種mRNA前體轉(zhuǎn)化為一種以上成熟 mRNA的加工過程?？勺僲RNA加工包括：可變 (或差異 剪接和可變 (或差異 poly(A 加工。二、簡答題1、簡述紫外分光光度法檢測DNA純度的原理。DNA和RNA的最大紫外光吸收波長在260nm，而蛋白質(zhì)的為280nm。純

6、的雙鏈DNA的A260/A280為1.8，純的RNA的A260/A280為2.0，而蛋白質(zhì)的A260/A280必定小于1.0（實(shí)際上為0.5左右）。因此，如果DNA樣品的A260/A280小于1.8，則說明樣品中含有蛋白質(zhì)；如果A260/A280大于1.8，則說明有RNA污染。2、DNA的損傷原因是什么？有哪些修復(fù)途徑？（1）損傷原因：外源化學(xué)試劑或射線對DNA的化學(xué)作用會導(dǎo)致其化學(xué)或物理結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。這些變化也許會阻斷復(fù)制或轉(zhuǎn)錄，結(jié)果是致死性的；也許會通過直接或間接誘變發(fā)生突變。DNA的化學(xué)不穩(wěn)定性可產(chǎn)生自發(fā)性損傷，如脫氨和脫嘌呤。（2）修復(fù)途徑：光復(fù)活，切除修復(fù)，錯配修復(fù)，烷基轉(zhuǎn)移酶。3、

7、簡述DNA測序的方法類型及雙脫氧終止法DNA測序的基本原理。（1）測序方法：Maxam和Gilbert的化學(xué)法：DNA末端標(biāo)記，堿基修飾，氨基轉(zhuǎn)移，鏈的切割。Sanger酶學(xué)法：即雙脫氧終止法，是用雙脫氧核苷酸作為鏈終止試劑，通過聚合酶的引物延伸產(chǎn)生一系列大小不同的 DNA片段后再進(jìn)行分離的方法。（2）基本原理：測序引物與單鏈DNA模板分子結(jié)合后，DNA聚合酶用dNTP延伸引物。延伸反應(yīng)分4組進(jìn)行，每一組分別用4種ddNTP中的一種來進(jìn)行終止，再用PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分析4組樣品（通常具放射性）。雙脫氧核苷酸在脫氧核糖上沒有聚合酶延伸鏈所需的3'-OH基團(tuán)，所以可被用作鏈終止

8、試劑?？稍诤铣刹襟E通過摻入同位素標(biāo)標(biāo)記物，或者也可先將引物末端用具有的放射性的標(biāo)記物或熒光染料進(jìn)行標(biāo)記后再放入合成步驟。4、簡述質(zhì)粒載體必須具備的基本特征。（1）能自主復(fù)制；（2）具有復(fù)制起點(diǎn)；（3）攜帶易于篩選的選擇標(biāo)記；（4）具有多種限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)；（5）具有較小的相對分子質(zhì)量和較高的拷貝數(shù)。5、簡述藍(lán)-白顏色（斑點(diǎn)）篩選的基本原理。利用一種藍(lán)色化合物的形成作為指示劑，通過插入目的片段使質(zhì)粒載體上編碼-半乳糖苷酶的LacZ基因失活，而LacZ基因在IPTG誘導(dǎo)下可表達(dá)，表達(dá)形成的酶可以利用底物X-gal形成一種藍(lán)色化合物，LacZ基因的插入失活導(dǎo)致不能形成藍(lán)色菌落。（藍(lán)色未插入片段

9、，白色含插入片段）6、簡述原核生物基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特點(diǎn)和類型。（1）特點(diǎn)：原核生物只有一種RNA聚合酶；原核生物的表達(dá)是以操縱子為單位的；原核基因一般不含內(nèi)含子；原核生物控制水平主要在轉(zhuǎn)錄水平，這種控制臂基因產(chǎn)物直接控制慢；在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上含有SD序列。（2）類型：負(fù)控制的誘導(dǎo)模型，正控制的誘導(dǎo)模型，負(fù)控制的阻遏模型和正控制的阻遏模型。7、比較真核生物的三種RNA聚合酶的性質(zhì)及功能上的差異。一、課程設(shè)計(jì)目的 存在核仁中，轉(zhuǎn)錄大部分rRNA的基因，對-鵝膏蕈堿不敏感；（2）RNA聚合物存在于核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄所有的編碼基因和一些snRNA基因，對-鵝膏蕈敏感；（3）RNA聚合物存在于

10、核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄tRNA、5SrRNA和U6snRNA的基因以及其他一些小分子RNA，對-鵝膏蕈堿中度敏感。三、工藝分析 8、2( 或差異 剪接和可變 ( 或差異 3.1 生產(chǎn)方案的制定 2三、論述題1、PCR擴(kuò)增的基本原理、引物設(shè)計(jì)、所需要的試劑和具體擴(kuò)增程序。3.2材料分析（1）基本原理：依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以相互轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退火，然后耐熱DNA聚合酶以dNTP3（2）引物設(shè)計(jì)：一對引物，與3端互補(bǔ)；3.3精度分析 堿基分布隨機(jī)；引物內(nèi)、引物間不應(yīng)有互補(bǔ)序列

11、；引物與非特異擴(kuò)增區(qū)無同源性3.4操作與定位方式 35端可游離四、工藝計(jì)算 4種dNTP混合物，4.14Taq DNA聚合酶，MgCl料寬設(shè)計(jì)雙蒸水。（4）擴(kuò)增程序：94預(yù)變性5分鐘【94變性30秒55退火30秒72延伸1分鐘】共25-30個循環(huán)，最后72延伸5分鐘，最后將PCR產(chǎn)物于4冰箱保存。4.3畫排樣圖 5類型4.4基因的轉(zhuǎn)錄5DNA復(fù)制目的4.5材料的利用率 5合成DNA原料4.6沖裁工藝力計(jì)算 54種脫氧核糖核苷酸4.7刃口尺寸計(jì)算所需要的酶RNA聚合酶解旋酶、RNA聚合酶、DNA聚合酶、DNA連接酶4.8凹模高度不對稱，只以DNA一條鏈為模板，只在雙鏈DNA上的一條鏈上進(jìn)行半保留

12、復(fù)制4.9凸模長度確定 7產(chǎn)物一個單鏈RNA（mRNA、rRNA、tRNA）72個雙鏈DNA五.設(shè)備選擇 8六、 裝配圖及零件圖繪制 8有七、 參考文獻(xiàn)9不要加工堿基配對方式一、課程設(shè)計(jì)目的A-T，G-C設(shè)計(jì)有著重要的意義，能鞏固課本中學(xué)的知識，熟悉相關(guān)資料，理清設(shè)計(jì)思路，練習(xí)繪圖及文獻(xiàn)檢索的能力，培養(yǎng)和提高分析，解決問題的能力，學(xué)習(xí)沖壓工藝與模具設(shè)計(jì)的具體方法和步驟，為畢業(yè)設(shè)計(jì)打下基礎(chǔ)。（13、試比較原核生物和真核生物轉(zhuǎn)錄的差異。（2）經(jīng)行一次冷沖壓模具設(shè)計(jì)的實(shí)際訓(xùn)練。通過設(shè)計(jì)鞏固相關(guān)理論知識，為以后的工作做好準(zhǔn)備。（3）通過計(jì)算和繪圖，學(xué)會運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范、手冊、圖冊和查閱有關(guān)技術(shù)資料等培養(yǎng)

13、模具設(shè)計(jì)的基本技能。（4）如何選取合適的排樣，需要通過材料利用率、搭邊值、步距的計(jì)算，從而選擇最合理、最有經(jīng)濟(jì)效益的排樣方案。真核生物發(fā)生場所二、工件簡圖類核材料為Q235，板厚為t=3mm，生產(chǎn)批量：大批量RNA聚合酶三、工藝分析3種3.1 的結(jié)合沖裁組合方式的確定應(yīng)根據(jù)下列因素決定。1生產(chǎn)批量：一般來說，小批量與試制采用單工序沖裁，中批量和大批量生產(chǎn)采用復(fù)合沖裁或級進(jìn)沖裁。2通過轉(zhuǎn)錄因子相互作用進(jìn)行結(jié)合3對工件尺寸、形狀的適應(yīng)性工件的尺寸較小時，常采用復(fù)合沖裁或級進(jìn)沖裁。對于尺寸中等的工件，由于制造多副單工序模的費(fèi)用比復(fù)合模具昂貴，也常采用復(fù)合沖裁，但工件上孔與孔之間或孔與邊緣之間的距離過

14、小時，啟動子4通常位于基因的上游5操作方便與安全：復(fù)合沖裁出件或清除廢料比較困難，工作安全性較差。級進(jìn)沖裁較安全。不同啟動子方案一：先沖圓孔，后落料，最后彎曲具有相當(dāng)大的同源性具有較大的差異材料分析Q235為碳素結(jié)構(gòu)鋼，抗拉強(qiáng)度為432-461MPa,抗剪強(qiáng)度為304-373MPa,屈服強(qiáng)度為253MPa,具有很好的沖裁成形性能，符合沖裁工藝。有3.3精度分析零件圖未標(biāo)注公差，按精度要求為IT14計(jì)算，普通沖裁即可滿足圖樣要求。只含有一個基因?yàn)榻档统杀荆刹捎檬止に土戏绞健?轉(zhuǎn)錄終止四、工藝計(jì)算在幾個多聚U前面形成頸4.1排樣設(shè)計(jì)與計(jì)算1.尺寸計(jì)算將(工件按中性層展開（1）直邊段為a，b 需要

15、加工，與翻譯相分離b=80-3-3=74mm（2）圓角邊段為c由于R/t=3/3=1>0.5,則該圓角屬于有圓角彎曲，根據(jù)中性層長度不變原理計(jì)算。查資料（1）乳糖操縱子的基因結(jié)構(gòu)：由啟動子Placc=（r+kt）、調(diào)節(jié)基因lacI和三個結(jié)構(gòu)基因（(3+0.42、lacY、lacA）組成。LacZ，編碼-半乳糖苷酶，它可以將乳糖水解為半乳糖和葡萄糖；LacY，編碼半乳糖苷透性酶，它能將乳糖運(yùn)送透過細(xì)菌的細(xì)胞壁；LacA，編碼硫代半乳糖(3彎曲毛坯展開總長度：L=a+c+b=24+74+6.69=104.6mm正調(diào)控：為了實(shí)現(xiàn)高水平的轉(zhuǎn)錄，需要cAMP受體蛋白活化，當(dāng)葡萄糖缺乏時，大腸桿菌內(nèi)

16、cAMP水平上升，CAP與c工件展開長度為104.6mm，所以原料料寬為B=104.6+2x2.5=109.6mm，查冷沖壓模具課程設(shè)計(jì)與畢業(yè)設(shè)計(jì)指導(dǎo)表3-9得：=（0.15-0.20）t，可取t=0.6，所以料寬公差為109.60 -0.6mm.4.3畫排樣圖4.4送料步距h=30+2.2=32.2mm4.5材料的利用率排樣時，在保證工件質(zhì)量的前提下，要盡量提高材料的利用率。4.6沖裁工藝力計(jì)算沖裁模設(shè)計(jì)時，為了合理地設(shè)計(jì)模具及選用設(shè)備，必須計(jì)算沖裁工藝力。壓力機(jī)的噸位必須大于所計(jì)算的沖裁工藝力，以適應(yīng)沖裁間隙的要求。沖裁工藝力包括沖裁力F、卸料力F卸、推件力F推和頂件力F頂。該落料工藝不需

17、要計(jì)算頂件力。沖裁件周長L=2（L1+L2）=269.2mm材料厚度t=3mm取Q235鋼的抗剪強(qiáng)度=350MPa.查冷沖壓模具課程設(shè)計(jì)與畢業(yè)設(shè)計(jì)指導(dǎo)表3-17得：Kx=0.035 Kt=0.045 Kd=0.05總工藝力F=F+Fx+Ft =132.3KN4.7刃口尺寸計(jì)算凹模由Dd=(Dmax-x0+1/4得：D1=（104.6-0.5×0.6）+0.15 0=104.3+0.15 0mmD2=(30-0.5×0.6+0.15 0=29.7+0.15 0mm凸模由dd=（Dd-Zmin）0-1/4得：d1=(104.3-0.460 -0.15=103.840 -0.15

18、mmd2=(29.7-0.460 -0.15=29.240 -0.15mm4.8凹模高度式中，b凹?？椎淖畲髮挾龋╩m）K因數(shù)，查冷沖壓模具課程設(shè)計(jì)與畢業(yè)設(shè)計(jì)指導(dǎo)表3-22，取K=0.24。凹模壁厚c=（1.5-2）H.取c=47.85mm.4.9凸模長度確定凸模長度H=H1+H2+H3+H4+a=15+15+10+1+20=51mm式中 H1凸模固定板厚度15mmH2固定卸料版高度10mmH3導(dǎo)料板高度10mmH4凸模進(jìn)凹模深度1mma 附加長度，無特殊要求取20mm4.10選擇標(biāo)準(zhǔn)模架該工序采用后側(cè)導(dǎo)柱模架，查沖壓模具設(shè)計(jì)師速查手冊：上模座：200×160×45mm下模座：200×160×55mm導(dǎo) 柱： 28×180mm導(dǎo) 套：28×110×43mm模具閉合高度190-235,取210mm五.設(shè)備選擇壓力機(jī)設(shè)備選擇考慮到壓力機(jī)的使用安全，選擇壓力機(jī)的噸位時，總工藝力F一般不應(yīng)超過壓力機(jī)額定噸位的80%。查沖壓模具設(shè)計(jì)師速查手冊，選擇壓力機(jī)為J23-16F。工稱力：160KN滑塊行程：20mm最大裝模高度：205mm工作臺尺寸（前后×左右）