產(chǎn)黃青霉生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

1、產(chǎn)黃青霉生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握測(cè)定生長(zhǎng)繁殖的基本原理與幾種方法。2、掌握微生物的典型生長(zhǎng)曲線。二、實(shí)驗(yàn)原理測(cè)定微生物生長(zhǎng)繁殖的方法主要可分為兩大類。 （一）測(cè)生長(zhǎng)量法，適用于一切微生物。1、直接法：包括測(cè)體積法、稱干重法等。2、間接法：包括比濁法、生理指標(biāo)法。（二）計(jì)量繁殖數(shù)法，只適用于單細(xì)胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子。1、直接法：比例記數(shù)法、血球計(jì)數(shù)板法。2、間接法：液體稀釋法、平板菌落計(jì)數(shù)法等。產(chǎn)黃青霉是工業(yè)上用于發(fā)酵生產(chǎn)青霉素的重要絲狀真菌，其發(fā)酵產(chǎn)物在臨床應(yīng)用和醫(yī)藥工業(yè)中占有極其重要的地位。菌絲量是菌體細(xì)胞內(nèi)部生長(zhǎng)信息最直接的反映，是微生物發(fā)酵過(guò)程中重要的生化參

2、數(shù)。青霉素發(fā)酵過(guò)程中菌體量的測(cè)定，對(duì)于其動(dòng)力學(xué)研究和建?？刂贫季哂泻苤匾囊饬x。根據(jù)菌絲量可以確定合適的補(bǔ)料量、供氧量和合適的生長(zhǎng)環(huán)境，以及合適的提取時(shí)機(jī)，從而有利于大量生產(chǎn)抗生素。當(dāng)少量純種單細(xì)胞微生物接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中后，在適宜的溫度、通氣等條件下，它們的群體就會(huì)有規(guī)律的生長(zhǎng)起來(lái)。如果以細(xì)胞數(shù)目的對(duì)數(shù)值作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，就可以畫出一條有規(guī)律的曲線，這就是微生物的典型生長(zhǎng)曲線根據(jù)微生物的生長(zhǎng)速率常數(shù)，即每小時(shí)的分裂代數(shù)的不同哦，一般可把典型生長(zhǎng)曲線粗分為延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期等四個(gè)時(shí)期。三、實(shí)驗(yàn)材料1、菌種產(chǎn)黃青霉（Pencillium chrysogenum）。

3、 2、培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基各組分：乳糖22.5g，葡萄糖7.5g，醋酸銨3.0g，乳酸銨5.0g，Na2SO4 0.5g，MgSO47H2O 0.25g，F(xiàn)eSO47H2O 0.1g，CuSO45H2O 0.005g，MnSO47H2O 0.02g，CaCl22H2O 0.05g，ZnSO47H2O 0.02g，苯乙酸1.0g，蒸餾水1000ml，pH 6.5，121滅菌20min。注意：微量元素配成母液，按需要加入，苯乙酸用乙醇溶解后再加入。3、器材超凈臺(tái)，培養(yǎng)箱，天平，干燥箱玻璃漏斗，定量濾紙等。 四實(shí)驗(yàn)方法與步驟1.離心法將待測(cè)培養(yǎng)液放入離心管中，用清水離心洗滌1-5次后（3000rpm,

4、10min）,進(jìn)行干燥。干燥溫度可采用100度，105度或紅外線烘干，也可在較低溫度下（80或40 度）真空干燥。然后稱重。2.過(guò)濾法絲狀真菌可采用濾紙過(guò)濾，而細(xì)菌可采用醋酸纖維素膜等濾膜過(guò)濾。過(guò)濾后，細(xì)胞可用少量水洗滌，然后在40度下真空干燥，稱量干重。五實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.每個(gè)大組接種三個(gè)培養(yǎng)基，并設(shè)一個(gè)空白對(duì)照瓶。2.按照不同的培養(yǎng)時(shí)間，6h,12h,36h,72h,144h,168h從三角瓶中取樣，稱量發(fā)酵液菌絲量，并測(cè)量發(fā)酵液的PH值。六實(shí)驗(yàn)結(jié)果60.04655120.05915360.1077720.08251440.10591680.1284七思考題次生代謝產(chǎn)物的大量積累發(fā)生在那個(gè)時(shí)期？根據(jù)微生物生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？答：穩(wěn)定期1. 補(bǔ)加前體類似物2. 加誘導(dǎo)物3. 防止碳代謝阻遏或抑制的發(fā)生4. 防