WATERS2695-2487HPLC儀器操縱簡(jiǎn)明步驟

1、WATERS 2695-2487 HPLC儀器操作簡(jiǎn)明流程WATERS 2695-2487 HPLC 儀器操作簡(jiǎn)明流程1、2487 檢測(cè)器開(kāi)、關(guān)機(jī)及使用：實(shí)驗(yàn)完畢關(guān)掉電源開(kāi)關(guān)即退出。打開(kāi)電源 儀器自檢 1-2min 預(yù)熱 5min 穩(wěn)定約 30min 設(shè)定通道、 波長(zhǎng)模式、 波長(zhǎng)（也可在工作站上設(shè)置） 回零（ Auto Zero ） 分析檢測(cè)2、2695 分離單元使用操作：4-5min ），待屏幕上方出現(xiàn)“ Idle ”字樣表示自檢成功。”鍵進(jìn)入“ Status （ 1）”界面，移動(dòng)光標(biāo) 至“ Degasser Mode ”，按 Enter1）開(kāi)機(jī)自檢 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，儀器開(kāi)始自檢（2）脫氣（

2、Degas ） 按面板右下方“ Menu/Status選擇“ On ”，打開(kāi)在線脫氣。3）設(shè)定柱溫（可選項(xiàng)）在“ Status （1 ）”界面，移動(dòng)光標(biāo)至“ Col Htr Set ”，輸入目標(biāo)溫按 Enter 即可。（可在工作站方法中設(shè)置）4）Prime Seal Wash （清洗柱塞桿）按“Menu/Status ”鍵回到“Menu ”界面，按下排功能鍵“Diag ”，然后再按下排功能鍵 “Prime Seal Wsh ”, “Start ”，沖洗 12min 后， “ HALT ” ， “ CLOSE ” 。5）Wet Prime在“ Status （1）"界面中“ Com p

3、osition ”下，選擇將用到的溶劑通道為 “100% ”，按液晶屏幕右下角“ Direct Function ”鍵，移動(dòng)光標(biāo)選擇“ 2 Wet Prime ”，“OK ”，流速及時(shí)間可使用默認(rèn)值，也可自行設(shè)定（如： 5ml/min ，3min），“OK” 即可。將每一個(gè)會(huì)用到的溶劑通道按照上述操作一次。6）Purge Injector （注射器排氣泡及清洗）進(jìn)入“ Direct Function ”界面后，選擇“ 3 Purge Injector ”，“OK”，默認(rèn)數(shù)值為 6， “OK”。7）Prime Needle Wash （清洗注射針）進(jìn)入“ Diagnostics ”界面，按下排功

4、能鍵之“ Prime Ndl Wsh ”，“Start ”，默認(rèn)30秒鐘，“Close ”，即 可返回“ Diagnostics ”界面。4）。注：以上 4） -7）為溶劑系統(tǒng)前處理過(guò)程， 建議每天開(kāi)機(jī)后依次進(jìn)行。 若發(fā)現(xiàn)注射器中有氣泡， 則可重復(fù) 6） 直至排除。如果流動(dòng)相中含有鹽類，則實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須用水清洗柱塞桿（即操作8）平衡柱子在“ Status（ 1） ”界面上，按流動(dòng)相比例設(shè)定各通道溶劑比例后，再Wet Prime操作一次，然后設(shè)置流速，平衡色譜柱 30-60min 。9）放置樣品 拉開(kāi)樣品轉(zhuǎn)盤艙門，將盛有待測(cè)樣品溶液的樣品瓶放入轉(zhuǎn)盤中，記下樣品瓶號(hào)，關(guān)上艙門。10）檢測(cè)樣品 打開(kāi)

5、工作站，設(shè)置儀器方法、方法組、自動(dòng)進(jìn)樣序列等，監(jiān)視基線、檢測(cè)樣品。11）分析處理數(shù)據(jù)、打印報(bào)告12）清洗注射器、針、柱塞桿 參見(jiàn)上述 4）、 7）。13）清洗色譜柱用水沖洗柱子 40-60min （視柱子規(guī)格不同， 流速通常 1ml/min ）；然后用甲醇或乙腈沖洗柱子 40min （流 速 1ml/min ）。14）關(guān)機(jī) 關(guān)掉電源開(kāi)關(guān)。 另外有相關(guān)注意資料1、檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍： 190-700nm2、3、4、5、可以進(jìn)行紫外掃描（ scan ），參考媒體播放 清洗柱塞桿的溶劑可以用水，或 5%-10% 甲醇（抑菌） 清洗針的溶劑可以根據(jù)樣品溶解性選擇，如甲醇，或異丙醇-水（ 1：1）清洗柱塞桿

6、操作“ prime seal wash ”“ start ”后，看有溶液流出，持續(xù)一段時(shí)間后，按下“ HALT ”，“CLOSE” 沖洗 1-2min 即可， 1 次。可以每天開(kāi)機(jī)后進(jìn)行，或結(jié)束實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行。流動(dòng)相中有鹽，結(jié)束實(shí) 驗(yàn)時(shí)一定要清洗。儀器不自動(dòng)進(jìn)行。6、START UP DIAGNOSTICS; WATERS ALLIANCE每次儀器打開(kāi)后，會(huì)自動(dòng)進(jìn)行的操作有：SEPERATIONS MODULE, REV2.03, INITIALIZING; INITIALIZING NEEDLE SYRINGE; INITIALIZING CAROUSELS; INITIALIZING SOLV

7、ENT SYSTEM; IDLE （在屏幕上有顯示）“實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要 purge injector ”， 1 次即可，包括了“ purge sample loop ”。 在線脫氣機(jī)打開(kāi)后，開(kāi)始時(shí)運(yùn)行加速，使壓力很快降到 1.0psi 以下，然后維持在 0.5psi 左右。 懷疑管路堵塞可卸下單向閥、在線過(guò)濾器進(jìn)行清洗。單向閥安裝注意方向。7、8、9、10、11、12、本儀器配置注射器體積 250ul ，樣品環(huán) 100ul ?？稍凇?CONFIG ”中查看。 樣品環(huán)體積可換；但同時(shí)注射器體積也應(yīng)匹配。注射器體積有25 、100 、250 、 2500 等。在檢測(cè)器中“ DIAG ”中可以查看“ S

8、AMPLE ENERGY ”、“REFERENCE ENERGY ”等參數(shù)，了解紫外燈的使用情況。檢測(cè)器要經(jīng)常用“ SHIFT +3 ”來(lái)校正波長(zhǎng)，保證其準(zhǔn)確性。每 1-2 周檢查 1 次。先清洗檢測(cè)池。清 洗檢測(cè)池可以在線進(jìn)行，不用卸下；具體操作是，用雙向接頭替代色譜柱，流速設(shè)置為 0.45m 濾膜過(guò)濾過(guò)的甲醇沖洗 15min-30min 即可達(dá)到清洗目的。13、1ml/min ，用14、2 臺(tái)儀器可以共用一個(gè)工作站（工作站升級(jí)為多系統(tǒng)） ；但 2 臺(tái)儀器不能同時(shí)用一個(gè)項(xiàng)目采集樣品?；€平衡后縱坐標(biāo)可達(dá)到小數(shù)點(diǎn)后第 4 位（很平穩(wěn)）。 可單針自動(dòng)進(jìn)樣，也可以成組進(jìn)樣；

9、成組進(jìn)樣需要編輯樣品組方法（包括瓶號(hào)、樣品名、進(jìn)樣體積、 進(jìn)樣次數(shù)、功能、方法組 / 報(bào)告方法、下一針延遲等） 。樣品組方法可保存、調(diào)用。 （ctrl +D 可以用于列復(fù) 制是“下同”之意。 ）樣品組方法里的“功能”一項(xiàng)，有“平衡”及“平衡色譜柱”兩個(gè)選項(xiàng)，其功能不同；若儀器方法15、16、17、選用梯度，用“平衡色譜柱”可以在進(jìn)樣前運(yùn)行梯度來(lái)平衡柱子；而如果選用“平衡”則只是按照初始梯 度條件等度平衡柱子。 （當(dāng)然，如果是用等度的流動(dòng)相條件，則兩者沒(méi)有區(qū)別） 18 、 編輯儀器方法時(shí)注意：0.3 時(shí)，選 25；流速在?！搬橆^深度”除樣品瓶選用內(nèi)插管時(shí)設(shè)為 2 ，其余均用默認(rèn)值1） 2695

10、“通用”標(biāo)簽下，“單次輸送體積”數(shù)值根據(jù)流動(dòng)相流速不同有別：流速V0.3-1.0 時(shí)，選 50 ;流速 1.0 時(shí)，選 1000。2）3）4）5） 2487 在 其余不動(dòng) 。脫氣”流量”溶劑”標(biāo)簽下， “脫氣模式”選擇“開(kāi)” 中編輯流動(dòng)相比例及梯度條件； 為可選備注項(xiàng)。其余“事件” 、 通用”標(biāo)簽下選擇“波長(zhǎng)模式”即可。“溫度”標(biāo)簽下，可以啟用柱溫設(shè)置“目標(biāo)柱溫”等。通道”不用設(shè)置。，啟用通道；在相應(yīng)“通道 1 ”或“通道 2”下設(shè)置波長(zhǎng)即可，6） AUFS 值在此儀器中沒(méi)有啟用，不改變面積大小。19 、 注射器中的氣泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除氣泡后，注射器中保留少量

11、溶劑，做“ purge injeCtor ”小心安裝上，再做幾次“ purge injeCtor ”觀察沒(méi)有氣泡即可。 其他方法，如 WATERS 工程師講可以在“ purge injeCtor ”開(kāi)始后、注射器桿向上時(shí)，擰掉下邊螺絲，上 下抽推排除氣泡。溶劑用甲醇較好；不用同時(shí)擰掉上方注射器。20、21、檢測(cè)器開(kāi)機(jī)自檢結(jié)束時(shí)有時(shí)會(huì)提示“ Calibration differs.521nm ” ,這是儀器自檢后提示與上一次自 檢結(jié)果有出入，原因很多，可能是檢測(cè)池中有小氣泡，檢測(cè)池污染，也可能是流路中溶劑有變動(dòng)。分析原 因，清洗檢測(cè)池，排氣泡，或者請(qǐng)工程師幫助。要注意樣品瓶中死體積大小，防止供試

12、液體積不足，針頭吸不到。HPLC 日常維護(hù)辦法之一：壓力異常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方 法。A、沒(méi)有壓力顯示，沒(méi)有流動(dòng)相流動(dòng) 原 因 解決方法1、電源問(wèn)題 1 、接通電源，開(kāi)機(jī)2、保險(xiǎn)絲被燒壞 2、更換保險(xiǎn)絲3、 控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定 b、修理或更換控制器 4、柱塞桿折斷 4 、更換柱塞桿5、泵頭內(nèi)有空氣 5 、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣6、流動(dòng)相不足 6、a、補(bǔ)充流動(dòng)相 b 、更換入口濾頭7、單向閥損壞 7 、更換單向閥8、漏液 8 、擰緊或更換手緊接頭B、流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒(méi)有壓力顯示 原 因 解決

13、方法1、儀表?yè)p壞 1 、更換儀表2、壓力傳感器損壞 2、更換壓力傳感器C、壓力持續(xù)偏高原 因 解決方法1、流速設(shè)定過(guò)高 1 、調(diào)整流速設(shè)定2、柱前篩板堵塞 2、a、在允許情況下反沖色譜柱 b 、更換篩板C、更換色譜柱3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相 b 、沖洗色譜柱4、色譜柱選擇不當(dāng) 4 、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱5、進(jìn)樣閥損壞 5 、清洗或更換進(jìn)樣閥6、柱溫過(guò)低 6、提高溫度 7、控制器失常 7 、修理或更換控制器8、保護(hù)柱阻塞 8 、清洗或更換保護(hù)柱9、在線過(guò)濾器阻塞 9 、清洗或更換在線過(guò)濾器D、壓力持續(xù)偏低1、因 解決方法流速設(shè)定過(guò)低 1 、調(diào)整流速2、系統(tǒng)漏液 2

14、 、確定漏液位置并維修原因 解決方法3、4、5、控制器失常 5 、維修或更換控制器E、壓力不斷上升色譜柱選擇不當(dāng) 3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱柱溫過(guò)高 4、降低溫度因 解決方法1、見(jiàn)列表 C 1 、見(jiàn)列表 CF、壓力降為零因 解決方法1、見(jiàn)列表 A、B 1、見(jiàn)列表 A、BG、壓力不斷下降，但不回零原 因 解決方法1 、見(jiàn)列表 D 1 、見(jiàn)列表 DH 、壓力波動(dòng) 原 因 解決方法1、泵中有氣體1、a、溶劑脫氣b 、從泵中除去氣體2、單向閥損壞2 、更換單向閥3、泵密封損壞3、更換泵密封4、脫氣不充分4、a、溶劑脫氣b 、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）5、系統(tǒng)漏液 5 、確定漏液位置并維修6、使用梯度洗

15、脫 6 、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)HPLC 日常維護(hù)辦法之二：漏液 通?？梢酝ㄟ^(guò)擰緊或更換管路接頭來(lái)解決漏液的問(wèn)題。但值得注意的是過(guò)份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和 塑料接頭的磨損。如果通過(guò)稍微擰緊接頭不能解決漏液的問(wèn)題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如， 卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)） ；損壞的接頭應(yīng)該更換掉。A 、接頭處漏液1、接頭松動(dòng) 1 、擰緊2、接頭磨損 2 、更換3、接頭過(guò)緊3、a、擰松，再重新擰緊b、更換4、接頭被污染 4、a、拆下清洗b、更換5、部件不匹配 5 、使用同一品牌的配件B、泵漏液原 因 解決方法1、單向閥松動(dòng)1、a、擰緊單向閥（不必?cái)Q的過(guò)緊） b 、更換單向閥

16、2、接頭松動(dòng) 2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過(guò)緊）3、 混合器密封損壞 3、a、更換混合器密封 b、更換混合器 4、泵密封損壞 4 、維修或更換泵密封件5、壓力傳感器損壞 5 、維修或更換壓力傳感器6、脈沖阻尼器損壞 6 、更換脈沖阻尼器7、比例閥損壞 7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換 8、放空閥的損壞 8、a、擰緊放空閥 b、更換放空閥C、進(jìn)樣閥漏液原 因 解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1 、重新安裝或更換進(jìn)樣閥2、定量環(huán)阻塞 2 、更換定量環(huán)3、進(jìn)樣口密封松動(dòng) 3、調(diào)整4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針 5、廢液管中產(chǎn)生虹吸 5 、保持廢液管高于廢液液面6、廢

17、液管阻塞 6 、更換或疏通廢液管D 、色譜柱漏液 原 因 解決方法1 、尾端接頭松動(dòng) 1 、擰緊接頭2、卡套內(nèi)有填料 2 、拆下、清洗卡套、重新安裝3、篩板厚度不合適 3、使用合適的篩板（參考下表）篩板選擇指導(dǎo) 物質(zhì)粒徑 篩板孔徑3-4u 0.5u 5-20u 2uE檢測(cè)器漏液原 因 解決方法1、流通池墊片損壞 1、a、避免過(guò)大的背景壓力（壓力降） b 、更換墊片2、流通池窗破碎 2 、更換窗口3、手緊接頭漏液 3 、擰緊或更換4、廢液管阻塞 4 、更換廢液管5、流通池阻塞 5 、重新安裝或更換HPLC 日常維護(hù)辦法之三：譜圖的各種問(wèn)題 液相色譜系統(tǒng)的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)

18、題可以通過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾因 解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板c、更換色譜柱2、3、色譜柱塌陷 2 、填充色譜柱干擾峰3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱b 、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4、流動(dòng)相 PH 選擇錯(cuò)誤 4 、調(diào)整 PH 值。對(duì)于堿性化合物，低 PH 值更 有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更改色譜柱B、峰前延因 解決方法1、柱溫低 1 、升高柱溫3、4、色譜柱損壞 4、見(jiàn) A1 、 A22、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)

19、 2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑樣品過(guò)載 3、降低樣品含量C、峰分叉原 因 解決方法1、保護(hù)柱或分析柱污染圖 1 、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。 如果必要更 換保護(hù)柱。 如果分析柱阻塞， 拆下來(lái)清洗。 如果問(wèn)題仍然存在， 可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或 更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。D 、峰變形因 解決方法1、樣品過(guò)載 1 、減少樣品載量E、早出的峰變形因 解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積b 、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因 解決方法1、柱外效

20、應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池G、 K '增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重 原 因 解決方法1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式 1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b 、加入乙酸（或酸性樣品） C、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d 、更換一支柱子2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式 2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）C、加入水（或多官能團(tuán)化合物） d、試用另一種方法3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì) 3、加入三乙胺（或堿性樣品）H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因 解決方法1、緩沖不合適1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液I

21、、額外的峰 原 因 解決方法1 、樣品中有其他組份1 、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰b 、提高流速2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率3、空位或鬼峰 3、 a、檢查流動(dòng)相是否純凈b 、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑c、減少進(jìn)樣體積J、保留時(shí)間波動(dòng)因 解決方法1、2、3、溫控不當(dāng) 1 、調(diào)好柱溫流動(dòng)相組分變化 2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）色譜柱沒(méi)有平衡 3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保留時(shí)間不斷變化因 解決方法1、流速變化 1 、重新設(shè)定流速2、泵中有氣泡 2、從泵中除去氣泡3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動(dòng)相b 、選擇合適的混合流動(dòng)相L、基線漂移原 因 解決方法1 、柱溫波動(dòng)。（即使

22、是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈 敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。 ）1 、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器 圖2、流動(dòng)相不均勻。 （流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。 ）2、使用 HPLC 級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體1N 的硝酸。（不要用鹽酸）3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用 4、檢測(cè)器出口阻塞。 （高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 5、更

23、改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。10-20 倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC 級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K '值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。10

24、、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處M 、基線噪音（規(guī)則的） 原 因 解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器 1 、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去 或泵中有空氣 檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液 圖 2、見(jiàn)第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全 3 、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備 5、斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀, 檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng) 6 、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器N 、基線噪音（不規(guī)則的） 原 因 解決方法1、漏液 圖 1

25、、見(jiàn)第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和 不正常的噪音。如有必要，更換密封。 檢查流通池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2 、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶 3 、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器 / 記錄儀電子元件的問(wèn)題4、斷開(kāi)檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5 、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡 6 、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后 面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污 7 、用 1N 的硝酸（不能用磷酸） 染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。 ） 清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量不足 8 、更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞 9 、更換色譜柱10、

26、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 10 、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，O 、寬峰建議不使用泵的混合裝置因 解決方法1、2、流動(dòng)相組成變化流動(dòng)相流速太低1、重新制備新的流動(dòng)相2 、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間）3 、見(jiàn) section 3 。檢查接頭是否松原因 解決方法動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以 及不正常的噪音。如果必要更換密封。4、檢測(cè)器設(shè)定不正確 4 、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響 a、柱子過(guò)載 b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大C、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大 d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)a、圖 5、小體積進(jìn)樣（例如： 10ul 而不是 100ul ）以

27、1：10 或 1：100 的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池C、使用內(nèi)徑為 0.007-0.01 的短管路d 、減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低 6 、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效 7 、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶 劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷 9 、打開(kāi)柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、 呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過(guò)低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò) 75 C12、 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分離度降低因 解決方

28、法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）1 、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在 色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果?wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更 換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、所有的峰面積都太小1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高 1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少 3 、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng) 4、使用正確的連接R所有的峰面積都太大1、因 解決方法 檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低 1、采取較大的衰減2、進(jìn)樣過(guò)多 2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不

29、正確 3 、正確連接記錄儀原 因 解決方法2、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿HPLC 日常維護(hù)辦法之四：進(jìn)樣閥的問(wèn)題 以下問(wèn)題在使用進(jìn)樣閥過(guò)程中有可能發(fā)生。A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈原 因 解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1 、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難1、因 解決方法進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 1 、重新安裝2、定量環(huán)阻塞 2 、清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染 3 、清洗或更換進(jìn)樣器4、管路阻塞 4 、清洗或更換管路C、自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)1、因 解決方法無(wú)壓力（或電源） 1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 3、重新安

30、裝D、自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題因 解決方法1、阻塞 1 、清洗或更換阻塞部件2、機(jī)械故障 2 、見(jiàn)隨機(jī)維修手冊(cè)3、控制器故障 3 、維修或更換控制器HPLC 日常維護(hù)辦法之五：由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題 你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問(wèn)題。你最好養(yǎng)成習(xí)慣，每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了 味覺(jué)）來(lái)“感覺(jué)”你的液相色譜是否存在問(wèn)題，這樣可以幫助你迅速找到問(wèn)題所在。例如：在你看到漏液 之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到。A、溶劑的氣味 1、漏液 1 、見(jiàn) section 3 b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原 因 解決方法1、儀器過(guò)熱1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)

31、設(shè)施b 、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定c、C、關(guān)掉儀器，查找維修手冊(cè)讀數(shù)不正常1、因 解決方法 壓力不正常 1 、見(jiàn) section 22、柱溫箱問(wèn)題 2、a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定 b、參照用戶手冊(cè)3、檢測(cè)器燈失效 3 、更換燈D 、燈警告 原 因 解決方法1、壓力超出極限值1、a、檢查是否阻塞2、b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定 其它警示燈 2、見(jiàn)用戶手冊(cè)E、警告音因 解決方法1、溶劑泄漏 /濺出 1、找到并解決2、其它警告音 2 、見(jiàn)用戶手冊(cè)F、刺耳的短音或長(zhǎng)音因 解決方法1、2、軸承失效潤(rùn)滑不夠1 、見(jiàn)用戶手冊(cè)2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑3、機(jī)械故障3 、見(jiàn)用戶手冊(cè)HPLC 日常維護(hù)辦法之六：常見(jiàn)故障及日常維護(hù) 下表中

32、列出了液相色譜常見(jiàn)的一些問(wèn)題，右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問(wèn)題出現(xiàn)的頻率。括號(hào)中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時(shí)間間隔。用戶手冊(cè)則提供您更多的維護(hù)方法。溶劑瓶問(wèn) 題 維 護(hù)1、 進(jìn)口篩板阻塞 1、a、更換（3-6個(gè)月）b、過(guò)濾流動(dòng)相，0.5U濾膜2 、流動(dòng)相脫氣2、氣泡泵問(wèn) 題維護(hù)1 、氣泡1 、流動(dòng)相脫氣2、泵密封損壞 2 、更換（ 3 個(gè)月）3、單向閥損壞 3 、過(guò)濾流動(dòng)相，運(yùn)用在線過(guò)濾，準(zhǔn)備備用單向閥進(jìn)樣閥問(wèn) 題 維1 、轉(zhuǎn)子密封損壞1、a、不要擰的過(guò)緊 b、過(guò)濾樣品色譜柱問(wèn) 題 維1 、篩板阻塞 1 、a、過(guò)濾流動(dòng)相 b、過(guò)濾樣品c、運(yùn)用在線過(guò)濾或保護(hù)柱 2、柱頭塌陷2、a、避免使用PH>8的流動(dòng)相（針對(duì)大部分硅膠的柱子） b 、使用保護(hù)柱 c 、使用預(yù)柱（飽和色譜柱） 檢測(cè)器問(wèn) 題 維 護(hù)1、 燈失效