醫(yī)療器械無(wú)菌檢查操作規(guī)程備課講稿

1、醫(yī)療器械無(wú)菌檢查操作規(guī)程1. 目的建立無(wú)菌檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2. 適用范圍本規(guī)程適用于本公司質(zhì)管部對(duì)本廠生產(chǎn)的一次性微波消融針的無(wú)菌檢測(cè)。3. 職責(zé)質(zhì)量部負(fù)責(zé)實(shí)施。4. 內(nèi)容4.1 檢驗(yàn)依據(jù)4.1.1 產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)4.1.2 中華人民共和國(guó)藥典2015年版 無(wú)菌檢查法4.2 儀器、設(shè)備超凈工作臺(tái)、電熱干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀、電子天平、PH計(jì)、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、銀子，試管架，大試管若干等。4.3 培養(yǎng)基及稀釋液4.3.1 需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；4.3.2 霉菌培養(yǎng)基：大豆酪蛋白肉湯培養(yǎng)基；4.3.3 培養(yǎng)

2、基的無(wú)菌性檢查 養(yǎng)基 的無(wú)菌性檢查每批配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌性檢查（可與產(chǎn)品無(wú)菌檢驗(yàn)同步進(jìn)行）。 檢查時(shí)，每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5 支（瓶）培養(yǎng)14 天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)；4.3.4 稀釋液pH7.0 氯化鈉 -蛋白胨緩沖液，9g/L 無(wú)菌氯化鈉溶液；4.4 無(wú)菌檢驗(yàn)室的環(huán)境要求（ 1） 無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部百級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。（ 2）緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無(wú)菌檢驗(yàn)室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持正壓，陽(yáng)性對(duì)照室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持負(fù)壓。無(wú)菌檢驗(yàn)室與室外大氣之間靜壓差應(yīng)大于10Pa。無(wú)菌檢驗(yàn)室白室溫應(yīng)保持 1826C,相對(duì)濕度：4565%（ 3） 無(wú)菌檢驗(yàn)室的單向流空氣區(qū)、工作

3、臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的監(jiān)測(cè)。（ 4） 無(wú)菌檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)同時(shí)檢查超凈工作臺(tái)單向流空氣中的菌落數(shù)：每次操作時(shí)在層流空氣所及臺(tái)面的左中右置 3個(gè)TSA瓊脂平板，暴露30min,于3035c 培養(yǎng)48小時(shí)，菌落數(shù)平均應(yīng)不超過(guò)1CFU砰板。4.5 無(wú)菌檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備4.5.1 器具滅菌、消毒可經(jīng)壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121蒸汽滅菌30分鐘后使用。4.5.2 人員、物料進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室開(kāi)啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間滅菌處理，消毒時(shí)間不得少于30min。4.5.2.1 物料進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室流程進(jìn)入無(wú)菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試

4、品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無(wú)菌檢驗(yàn)室。4.5.2.2 人員進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室流程（ 1） 更鞋脫衣：在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，穿上無(wú)菌檢驗(yàn)室工作鞋；脫去一般區(qū)工作服。（ 2）洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水連續(xù)沖洗20 秒，洗凈泡沫。（ 3）更衣：在二更區(qū)按照要求穿衣，要求褲子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有頭發(fā)。（ 4）手消毒：用消毒液浸泡雙手5 秒以上或用浸過(guò)消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用洗必泰、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。（ 5）人員進(jìn)入：經(jīng)緩沖間進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室。4.6 無(wú)菌檢驗(yàn)操作要求 （ 1）全過(guò)程必須嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，

5、防止微生物污染。（ 2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴(kuò)散。（ 3）所有操作不得有大幅度或快速動(dòng)作，以免攪動(dòng)空氣中的塵埃微粒。（ 4） 使用金屬接種器具時(shí)，用前、用后均需灼燒滅菌。（ 5） 在接種培養(yǎng)物時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕、準(zhǔn)，防止培養(yǎng)物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污 染。（ 6）操作過(guò)程中所有的帶菌物品，用后均應(yīng)作消毒、滅菌處理。在檢驗(yàn)完成后經(jīng)傳遞窗傳至一般區(qū)，立即用壓力蒸汽滅菌鍋121滅菌30分鐘。4.7 對(duì)照菌液制備4.7.1 無(wú)菌檢驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5 代。4.7.2 取金黃色葡萄球的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種金黃色葡萄球至TSA瓊脂培 養(yǎng)基內(nèi)，在3035c培養(yǎng)1824h后備用

6、，同時(shí)制備0.9%氯化鈉溶7加入在6 支小試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加9.0ml 的 0.9%氯化鈉溶液，在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121滅菌30min備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取1.0ml加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:10 的菌液；取第一支試管內(nèi)1.0m l 菌液加入第二支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:100的菌液，同法稀釋成濃度1：10-6 （每ml含菌量0 100CFU即可。4.7.3 采用平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù)。4.8 . 試驗(yàn)方法4.8.1 供試液準(zhǔn)備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)的方法，如供試品不適宜直接投放，可按下列方法制備供試液，應(yīng)使浸提介質(zhì)充分洗提供試品的浸提表

7、面，供試液制備應(yīng)按無(wú)菌操作法進(jìn)行，在制備后2 小時(shí)內(nèi)使用。根據(jù)供試品具體特性選擇下列方法：a） 管類(lèi)器具：按管內(nèi)表面積每10cm2 流過(guò)管內(nèi)腔1ml 浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min ，收集到無(wú)菌的容器內(nèi)。b）容器類(lèi)器具：按容器內(nèi)表面積每10cm加入浸提介質(zhì)1ml的比例，振搖數(shù)次。c）實(shí)體類(lèi)器具：實(shí)體類(lèi)器具按表面及每 10cm加入浸提介質(zhì)1ml,振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質(zhì)于無(wú)菌容器中。4.8.2 接種薄膜過(guò)濾法：優(yōu)先采用封閉式薄膜過(guò)濾器（集菌器），也可使用開(kāi)放式薄膜過(guò)濾器。濾膜孔經(jīng)不大于0.45 m0a、 如采用封閉式薄膜過(guò)濾器，取一副三聯(lián)式集菌器，將供試液通過(guò)集菌儀過(guò)濾，使通過(guò)每只

8、培養(yǎng)管的量基本均勻。然后通過(guò)集菌儀一只加50ml TSB培養(yǎng)基，另兩只分別加入50ml 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（其中一只做陽(yáng)性對(duì)照，內(nèi)加金黃色葡萄球菌液 1ml） 。另取一副二聯(lián)集菌器，用同批的沖洗液或浸提介質(zhì)50ml 通過(guò)集菌儀過(guò)濾（每只約50ml）,同法一只加硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 50ml,另一只加TSB培養(yǎng) 基 120ml 分別作陰性對(duì)照。b、如用一般薄膜過(guò)濾器，將供試液過(guò)濾后取出濾膜，將其剪成3等份，分別置 于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及 TSB培養(yǎng)基的容器中，其中兩份作檢驗(yàn)，一份作陽(yáng)性對(duì)照。直接接種法：適用于一次性使用注射針、一次性使用靜脈輸液針（包括輸液器、輸血器、注射器配套使用注射針）

9、。a、 敷料供試品：取規(guī)定數(shù)量，每個(gè)包裝以無(wú)菌操作拆開(kāi)，于不同部位剪取約120mg或1cmx 3cm的供試品，接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。b、無(wú)菌針頭：直接投入含15ml以上硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及 TSB培養(yǎng)基的容器 中。c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎斷，接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。4.8.3 培養(yǎng)、觀察（ 1）上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，其中硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035c培養(yǎng)；TSBW養(yǎng)基，置2025c培養(yǎng)。除陽(yáng)性對(duì)照管 培養(yǎng)4872小時(shí)外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生 長(zhǎng)。（ 2）如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14 天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生產(chǎn)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2 天，真菌培養(yǎng)3 天， 觀察是否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無(wú)菌生長(zhǎng)。4.8.4 結(jié)果判斷（ 1）培養(yǎng)結(jié)束后，陽(yáng)性對(duì)照