臨床細(xì)菌檢驗(yàn)的全面質(zhì)量管理

1、臨床細(xì)菌檢驗(yàn)的全面質(zhì)量管理臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中具有特殊的位置， 主要表現(xiàn)在它的高風(fēng)險(xiǎn)性 （如腦脊液培 養(yǎng)結(jié)果正確與否直接關(guān)系到患者的生死） 、高干擾性（如標(biāo)本采集、運(yùn)送等過(guò)程中的諸多因 素都會(huì)干擾檢出率和正確率） 、高技術(shù)性和高嚴(yán)謹(jǐn)性（準(zhǔn)確表達(dá)、報(bào)告和解釋結(jié)果直接影響 治療的成?。?。因此，細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)等屬于高度復(fù)雜的試驗(yàn)范疇。由于致病菌的多樣性和變異性， 臨床細(xì)菌學(xué)始終是一門知識(shí)更新和發(fā)展較快的學(xué)科。 為 此，從事臨床細(xì)菌檢驗(yàn)的醫(yī)師和技師必須具有較好的業(yè)務(wù)素質(zhì)和敬業(yè)精神， 要勤于學(xué)習(xí)和探 索，要有嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)和對(duì)新事物的敏感性，這是高質(zhì)量完成細(xì)菌檢驗(yàn)任務(wù)的首要條件。細(xì)菌檢驗(yàn)的全

2、面質(zhì)量管理是一個(gè)連續(xù)的質(zhì)量管理過(guò)程，包括從患者準(zhǔn)備，申請(qǐng)單書寫， 標(biāo)本采集、標(biāo)識(shí)、保存、運(yùn)送、處理和檢驗(yàn)，結(jié)果分析和報(bào)告，直至醫(yī)師的理解和應(yīng)用（診 治）。為了有效地對(duì)這一過(guò)程進(jìn)行全面質(zhì)量管理，本文從檢驗(yàn)前、檢驗(yàn)中和檢驗(yàn)后三個(gè)方面 提出相關(guān)要求。一、檢驗(yàn)前的質(zhì)量管理（一）檢驗(yàn)項(xiàng)目的申請(qǐng) 細(xì)菌檢驗(yàn)項(xiàng)目的申請(qǐng)要有針對(duì)性和合理性。 臨床醫(yī)師應(yīng)在熟悉人體各部位正常菌群以及 常見致病菌的基礎(chǔ)上，結(jié)合感染患者的癥狀、 體征，科學(xué)地提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。 對(duì)于有感染跡象 者（WBCWBC 增高，中性粒細(xì)胞升高， CRP20mg/LCRP20mg/L 等），應(yīng)盡快申請(qǐng)做細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗(yàn)， 并力爭(zhēng)在使用抗菌藥物之前送檢

3、標(biāo)本， 以便及時(shí)獲得致病菌的有關(guān)資料和藥敏結(jié)果， 正確選 用抗菌藥。對(duì)于低臨床價(jià)值的細(xì)菌標(biāo)本， 如口腔和腸內(nèi)容物、 直腸周圍膿腫、 褥瘡、 多毛的 膿腫、 惡露、 嘔吐物、FoleyFoley導(dǎo)管尖等，由于易受正常菌群的污染，細(xì)菌培養(yǎng)價(jià)值較低，一 般不做細(xì)菌培養(yǎng)；必須申請(qǐng)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，其結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床分析。由于細(xì)菌檢驗(yàn)的特殊性， 細(xì)菌檢驗(yàn)申請(qǐng)單必須提供臨床信息， 特別應(yīng)說(shuō)明患者是否使用過(guò)抗菌藥以及使用過(guò)何種抗菌 藥，以便于實(shí)驗(yàn)室有的放矢地抵消抗菌藥的作用，提高細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率。（二）檢驗(yàn)標(biāo)本的采集、保存、運(yùn)送和驗(yàn)收1 1患者的準(zhǔn)備 主要包括兩個(gè)方面：一是做好采集部位的清潔和消毒工作，防止正常 菌群

4、的污染；二是耐心細(xì)致地交待患者，使其主動(dòng)配合以便采集到有價(jià)值的標(biāo)本。2 2標(biāo)本采集 標(biāo)本正確采集十分重要，其目的是千方百計(jì)捕捉病原菌并保持其活性，以提高檢出率，同時(shí)又要盡可能避免非病原菌的污染和干擾。 為此， 要根據(jù)各種感染性疾病 和目標(biāo)病原菌的不同特點(diǎn)，正確合理地確定采樣部位、 時(shí)機(jī)和次數(shù)。 要選用恰當(dāng)?shù)牟蓸悠鞑?并嚴(yán)格按規(guī)范操作。 一般來(lái)講， 采樣量多一些有利于病原菌的檢出， 但應(yīng)以不影響患者健康 和便于操作為前提，因此采樣量要恰當(dāng)。3 3標(biāo)本保存與送檢盛標(biāo)本的容器應(yīng)無(wú)菌、不漏和便于密封。要根據(jù)目標(biāo)病原菌的特點(diǎn)決定是否使用保菌液、 運(yùn)送液或增菌液，以及選擇何種保菌液、 運(yùn)送液或增菌液。標(biāo)本

5、采 集后應(yīng)盡可能立即送檢。 如不能及時(shí)送檢， 要根據(jù)目標(biāo)病原菌的特點(diǎn)確定保存條件 （如溫度 等），在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。4 4驗(yàn)收和登記 標(biāo)本的驗(yàn)收和登記要有專人負(fù)責(zé)。驗(yàn)收的內(nèi)容主要包括：采樣時(shí)間與 送檢時(shí)間 （注意時(shí)間間距） 以及送檢條件是否符合保存致病菌活力的要求； 盛標(biāo)本容器是否 有溢漏和污染； 申請(qǐng)單是否填寫完整； 標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請(qǐng)單一致和唯一等。 對(duì)不合格的標(biāo) 本要拒收， 并向送檢醫(yī)護(hù)人員說(shuō)明拒收原因， 告知正確送檢的要求， 囑其重新采集和送檢標(biāo) 本。以上各項(xiàng)均與細(xì)菌檢驗(yàn)的質(zhì)量密切相關(guān)， 檢驗(yàn)科（細(xì)菌室）應(yīng)與臨床科室通過(guò)共同研討，認(rèn) 真制定有關(guān)的要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并嚴(yán)格執(zhí)行。

6、二、檢驗(yàn)中質(zhì)量管理（一）致病菌分離鑒定1 1標(biāo)本（細(xì)菌）的接種、分離和鑒定根據(jù)標(biāo)本和檢驗(yàn)?zāi)康牡牟煌臃N不同的培養(yǎng)基。對(duì)陽(yáng)性培養(yǎng)要分離純化， 然后進(jìn)行分群和種屬鑒定。 整個(gè)操作過(guò)程要按標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （ SOPSOP） 進(jìn)行，不得隨意更改操作程序， 對(duì)于疑難菌株， 要查閱文獻(xiàn)、 組織會(huì)診， 不能草率作出結(jié)論。2 2檢驗(yàn)過(guò)程的記錄和結(jié)果報(bào)告檢驗(yàn)過(guò)程中所見現(xiàn)象和發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題， 均應(yīng)如實(shí)地記錄，以便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 作出正確結(jié)論和發(fā)出可信的報(bào)告， 亦可作為今后總結(jié)和改進(jìn)工作的依 據(jù)。所發(fā)報(bào)告內(nèi)容要登記，以便查詢；如原（初步）報(bào)告有誤或不完善，應(yīng)發(fā)糾正報(bào)告。（二）藥敏試驗(yàn)質(zhì)控藥敏試驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格按最新發(fā)布的NCC

7、LSNCCLS 所規(guī)定的培養(yǎng)基、操作方法、藥敏紙片和判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。為了監(jiān)控試驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量，必須做好藥敏質(zhì)控。1 1常用的藥敏質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株NCCLSNCCLS 從美國(guó)菌種收集中心（ATCCATCC 選擇推薦了一些菌株作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)株（見表 1 1）。2 2質(zhì)控株的保存盡管質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)株比其他一些菌株藥敏結(jié)果是相對(duì)穩(wěn)定的，但反復(fù)多次的傳代不可避免地會(huì)造成菌株的變異。 為防止變異， 必須將標(biāo)準(zhǔn)株凍干保存。 每月從凍干 株中復(fù)蘇 1 1 次，種入大豆胰酶消化肉湯中（厭氧菌可用 GAMGAM 肉湯等）作為工作株。工作株 可存于 4 4C8 8C，并于每周轉(zhuǎn)種 1 1 次。通常工作株轉(zhuǎn)種 4 45 5 次后即須

8、棄去。在質(zhì)控中，如 發(fā)現(xiàn)工作株結(jié)果有疑問(wèn)， 應(yīng)予以更換。 反復(fù)傳代亦易使其敏感性變異， 特別是銅綠假單胞菌 （ATCCATCC 2785327853），將會(huì)丟失對(duì)脲基青霉素的敏感性。如無(wú)凍干條件時(shí)，可將質(zhì)控株置入：含 1010 15%15%甘油的大豆胰酶消化肉湯，或 脫纖維羊（或兔）血，或 脫脂奶，或 含 50%50%小牛血清的肉湯，存于-20-20C以下環(huán)境中（最好一 6060C以下），亦可防止變異。3 3藥敏質(zhì)控方法質(zhì)控株應(yīng)每天隨臨床分離株一道進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，質(zhì)控株的藥敏結(jié)果如果在質(zhì)控允許范圍內(nèi)（參見最新CLSCLS 文件），說(shuō)明實(shí)驗(yàn)條件符合要求，結(jié)果可信；若藥敏結(jié)果在質(zhì)控允許范圍外， 則實(shí)

9、驗(yàn)中可能存在差錯(cuò)。 由于質(zhì)控允許范圍的最大值與最小值是質(zhì) 控株在標(biāo)準(zhǔn)條件下多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 95%95%可信限，故 2020 次連續(xù)質(zhì)控結(jié)果中僅允許 1 1 次落在范 圍外，但不能偏離質(zhì)控允許范圍中間值 （最大值 + +最小值） /24/24 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。由于允許范圍恰 好包括 4 4 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差， 故落在允許范圍外的抑菌圈直徑一定要在離中間值一個(gè)允許范圍（中間值1個(gè)允許范圍）之內(nèi)。此外， 2020 次或更多次藥敏結(jié)果的平均值應(yīng)接近中間值。如果 2020 次連續(xù)質(zhì)控結(jié)果中次或 3030 次中有次結(jié)果超出了允許范圍，則提示實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在問(wèn)題，必須查找原因加以解決。常規(guī)的藥敏質(zhì)控可按下法進(jìn)行：連續(xù)測(cè)定某

10、藥對(duì)質(zhì)控株的藥敏結(jié)果，每天一次，共測(cè)2020 或 3030 天，取得 2020 或 3030 個(gè)值。如果 2020 個(gè)值中僅有一個(gè)值， 或 3030 個(gè)值中僅有三個(gè)以下的值超出允許范圍， 則結(jié)果基 本可信，可改每天質(zhì)控一次為每周一次。 此后，若某周出現(xiàn)一次質(zhì)控值超出允許范圍， 則于 當(dāng)天查找原因（包括用錯(cuò)紙片和質(zhì)控株，菌株污染，孵育條件錯(cuò)誤等），經(jīng)糾正明顯錯(cuò)誤后重測(cè)，如結(jié)果在允許范圍內(nèi)可繼續(xù)每周一次的質(zhì)控； 如未能找出明顯原因則需采取立即糾正措施：連續(xù)質(zhì)控五天，每天一次：若五次結(jié)果皆在允許范圍以內(nèi)，則繼續(xù)每周一次的質(zhì)控；五次結(jié)果只要有一次失控，則存在系統(tǒng)誤差，需進(jìn)行增加的糾正措施：查找到原因，

11、 然后改每周一次質(zhì)控為每天一次，完成2020（或 3030）天質(zhì)控，其間失控次數(shù)若在一次（或三次）以內(nèi)，則再改為每周一次。如果有兩個(gè)（或四個(gè)）以上的值超過(guò)允許范圍，則繼續(xù)做每天一次的質(zhì)控。每當(dāng)改變?cè)噭⑺幟艏埰团囵B(yǎng)基等時(shí)，均要重新進(jìn)行連續(xù)2020 （或 3030）天的質(zhì)控。每次失控均要查找原因，糾正后才能發(fā)出報(bào)告。（三）培養(yǎng)基、試劑和染色的質(zhì)控1 1 培養(yǎng)基的質(zhì)控 培養(yǎng)基無(wú)論是自制的還是商業(yè)購(gòu)買的， 都應(yīng)注明生產(chǎn)日期和效期。 培 養(yǎng)基的質(zhì)控主要包括以下四個(gè)方面： 無(wú)菌試驗(yàn)，每批培養(yǎng)基在高壓或過(guò)濾除菌后均要抽取樣本進(jìn)行培養(yǎng)，以證實(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)。支持生長(zhǎng)試驗(yàn)，以適宜的菌株接種，經(jīng)培養(yǎng)應(yīng)生長(zhǎng)良好。選擇

12、和抑制生長(zhǎng)試驗(yàn)，對(duì)選擇性培養(yǎng)基應(yīng)至少分別選1 1 株可生長(zhǎng)、1 1 株被抑制菌進(jìn)行接種培養(yǎng)，可生長(zhǎng)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，被抑制菌應(yīng)不能生長(zhǎng)。生化反應(yīng)培養(yǎng)基至少應(yīng)分別選陽(yáng)性和陰性反應(yīng)菌株各 1 1 株，以證實(shí)應(yīng)有的生化反應(yīng)。常用的質(zhì)控菌見表 2 2，請(qǐng)正確選 用。2 2 生化反應(yīng)試紙和試劑的質(zhì)控 試紙和試劑無(wú)論是外購(gòu)的還是自制的， 在使用時(shí)一定要注明開啟時(shí)間和失效期。測(cè)定代謝產(chǎn)物的試紙或試劑， 要用已知陽(yáng)性和陰性的菌株進(jìn)行測(cè)試， 并作好測(cè)試記錄。測(cè)定代謝產(chǎn)物的試劑，要防止細(xì)菌的污染。觸酶、氧化酶、凝固酶試劑在 開瓶時(shí)以及使用中，每天至少要分別用一陽(yáng)性和陰性菌測(cè)試1 1 次。桿菌肽、OptochinOpt

13、ochin、ONPGONPG XVXV 紙片（條）在開瓶時(shí)以及使用中，每周至少要分別用一 陽(yáng)性和陰性菌測(cè)試 1 1 次（XVXV 紙片僅做陽(yáng)性菌）。用于分枝桿菌鑒定的試劑在開瓶或配制時(shí)， 以及每次使用時(shí)，均要做陽(yáng)性菌對(duì)照（鐵的攝取試驗(yàn)還要做陰性對(duì)照）?？寡逶陂_瓶時(shí)和使用中每月需分別用陽(yáng)性反應(yīng)和陰性反應(yīng)菌做1 1 次測(cè)試?？乖瓩z測(cè)試劑和DNADNA 探針在每次操作時(shí)，均要設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。其他試劑和紙片僅在開瓶或配制時(shí)， 做 1 1 次陰、陽(yáng)性反應(yīng)測(cè)試即可。各種常用試紙和試劑的 質(zhì)控菌和預(yù)期結(jié)果見表 3 3。3 3 染色的質(zhì)控 常用染色的質(zhì)控要求見表 4 4，質(zhì)控結(jié)果應(yīng)作好記錄。（四）儀器設(shè)備質(zhì)量監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的各種儀器設(shè)備的運(yùn)行情況， 應(yīng)每天進(jìn)行監(jiān)測(cè)，每一儀器均要有專人按使用說(shuō) 明書要求進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)， 儀器上要附有運(yùn)行記錄卡， 每天由維護(hù)保養(yǎng)人記錄溫度等指標(biāo)的變 化情況。一旦發(fā)現(xiàn)異?；蚴Э?，應(yīng)立即查找原因并進(jìn)行維修。（五）積極參加室間質(zhì)評(píng)要按規(guī)定參加細(xì)菌學(xué)的室間質(zhì)評(píng)， 對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控水平進(jìn)行全面評(píng)估， 不斷提高檢測(cè)水平。三、檢驗(yàn)后質(zhì)量管理檢驗(yàn)工作完成后