前列腺癌放射免疫顯像的實(shí)驗(yàn)研究

1、    前列腺癌放射免疫顯像的實(shí)驗(yàn)研究        摘要采用二巰基乙醇直接還原法將Tc-99m放射性核素標(biāo)記抗人前列腺癌單克隆抗體YDPC，標(biāo)記物經(jīng)Sephadex G-50柱，獲得純化的標(biāo)記抗體YDPC-99mTc，薄層層析檢測(cè)其放射化學(xué)純度為97%。YDPC-99mTc經(jīng)尾靜脈注射入荷人前列腺癌裸鼠體內(nèi)，24小時(shí)后行-照相，可以得到前列腺癌的特異顯像，而同一裸鼠體內(nèi)的人直腸癌移植瘤沒(méi)有顯像。結(jié)論：YDPC-99mTc放射免疫顯像具有前列腺癌特異性。關(guān)鍵詞前列腺腫瘤癌單克

2、隆抗體放射免疫顯像Experimetal study on the radioimmunoscintigraphy of prostate cancerZhang Chuanbo*, Chen Zhongxin, Guo Yinglu, et al.*Department of Urology, The Third School of Clinical Medicine, Beijing Medical University, Beijing 100083AbstractAnti-human prostate cancer monoclonal antibody YDPC was labele

3、d with technetium-99m by direct 2-mercaptoethanol reduction method. The labeled antibody YDPC-99m Tc was purified through Sephadex G-50 column chromatography. The radiochemical purity was 97%. YDPC-99m Tc was injected through tail vein of nude mice xenographed with human prostate cancer. The animal

4、was scintigraphed with -camera 24 hours later to get a clear and specific image of the tumor. These results indicate that the radioimmunoscintigraphy of prostate cancer is specific.Key wordsProstatic neoplasmsCarcinomaMonoclonal antibodyRadioimmunoscintigraphy目前臨床上對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移灶的CT、MRI等檢查，其敏感性和特異性都不高1，前列腺

5、癌的放射免疫顯像研究有希望解決這個(gè)問(wèn)題。我們采用抗前列腺癌單克隆抗體YDPC標(biāo)記放射性同位素Tc-99m對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行顯像。報(bào)告如下。 材料與方法一、主要材料與試劑前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3M，抗人前列腺癌雜交瘤細(xì)胞YDPC由北京醫(yī)科大學(xué)泌尿外科研究所俞莉章教授提供；99mTcO4：北京森科公司；MDP藥盒（亞甲基二磷酸）：上海紅旗制藥廠；Balb/C裸鼠：68周齡，北京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。二、單克隆抗體的純化Balb/C小鼠腹腔注射抗人前列腺癌雜交瘤細(xì)胞YDPC5×106/只，10天后收集腹水，經(jīng)飽和硫酸銨沉淀后，過(guò)Protein A-agarose親和層析柱，獲得純化的抗人前列腺癌

6、單克隆抗體YDPC(IgG2b)。三、YDPC的99mTcO4標(biāo)記及純化采用二巰基乙醇直接還原法2。四、標(biāo)記抗體的鑒定采用硅膠板薄層層析法五、標(biāo)記抗體在荷瘤裸鼠體內(nèi)的放射免疫顯像和分布裸鼠8只，實(shí)驗(yàn)組裸鼠右側(cè)肩部皮下接種PC-3M細(xì)胞5×105只，對(duì)照組裸鼠右側(cè)肩部皮下接種人直腸癌LoVo細(xì)胞；兩組裸鼠分別經(jīng)尾靜脈注射標(biāo)記抗體YDPC-99mTc11.5MBq只，于6小時(shí)、24小時(shí)后進(jìn)行-照相，資料存入電子計(jì)算機(jī)內(nèi)；顯像完畢，從眼球取血并斷頸處死裸鼠，取腫瘤組織及正常組織，稱濕重后，計(jì)數(shù)器測(cè)定放射性計(jì)數(shù)值，計(jì)算每克組織的吸收率及腫瘤與正常組織吸收率之比即T/NT值。結(jié)果一、YDPC的

7、Tc-99m標(biāo)記及標(biāo)記物的鑒定150gYDPC單克隆抗體經(jīng)二巰基乙醇直接還原法Tc-99m標(biāo)記后，用硅膠板薄層層析法檢測(cè)，其放射化學(xué)純度為97% 。二、人前列腺癌裸鼠模型的放射免疫顯像裸鼠皮下接種PC-3M、LoVo細(xì)胞34周后，長(zhǎng)成腫瘤平均直徑1cm；11.5MBq標(biāo)記抗體YDPC-99mTc經(jīng)荷人前列腺癌移植瘤裸鼠尾靜脈注射后，6小時(shí)裸鼠全身均顯像，放射性主要積聚在肝臟內(nèi)，腫瘤部位開(kāi)始有放射性濃聚，但沒(méi)有清晰的腫瘤顯像。24小時(shí)后，本底逐漸減少，移植瘤和肝臟顯像清晰，但腫瘤的放射性濃聚明顯高于肝臟。對(duì)照組裸鼠直腸癌移植瘤注入標(biāo)記抗體YDPC-99mTc后24小時(shí)沒(méi)有明顯放射性濃聚。三、YD

8、PC-99mTc在裸鼠體內(nèi)的分布和腫瘤的攝取率標(biāo)記抗體YDPC-99mTc經(jīng)尾靜脈注入荷人前列腺癌移植瘤裸鼠，根據(jù)99mTc的物理半衰期計(jì)算腫瘤對(duì)標(biāo)記抗體的攝取率(Dose%/g)分別為1.9%(6小時(shí))和2.1%(24小時(shí))。標(biāo)記抗體在裸鼠體內(nèi)血液、肝臟、腎臟6小時(shí)的T/NT值分別為0.17、0.39和0.25，24小時(shí)分別為2.00、1.23和0.46；在其它組織中6小時(shí)T/NT值均大于1.00，24小時(shí)大于3.00。討論單克隆抗體和放射性核素標(biāo)記抗體技術(shù)的出現(xiàn)為早期診斷前列腺癌，確定前列腺癌是否發(fā)生骨和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，明確前列腺癌的分期提供了新的途徑。Babaian等3對(duì)19例前列腺癌患者

9、放射免疫顯像后作雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)活檢，檢測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性為44.4%，特異性為86.0%，認(rèn)為可以檢測(cè)直徑在5mm的淋巴結(jié)?？骨傲邢侔┑膯慰寺】贵wYDPC可以和前列腺癌細(xì)胞PC-3M特異性地結(jié)合，免疫組織化學(xué)結(jié)果表明大部分前列腺癌組織表達(dá)了YDPC抗體所針對(duì)的抗原，YDPC和其它腫瘤及正常前列腺組織沒(méi)有或只有微弱的反應(yīng)，證明它是用于前列腺癌放射免疫顯像的良好抗體。99mTc發(fā)射-射線，能量140keV，半衰期為6小時(shí)，是近年來(lái)放射免疫顯像中應(yīng)用最多的放射性核素。我們成功地將YDPC抗體標(biāo)記上Tc-99m，檢測(cè)YDPC-99mTc的放射化學(xué)純度為97%。高于放射免疫顯像的標(biāo)記抗體放射化學(xué)純度要

10、求（95%以上）。標(biāo)記抗體YDPC-99mTc經(jīng)尾靜脈注射入荷瘤裸鼠后，短時(shí)間內(nèi)(6小時(shí))主要是肝脾顯像，但標(biāo)記抗體已開(kāi)始在前列腺癌移植瘤局部集中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，本底逐漸減少，24小時(shí)腫瘤組織變得清晰可見(jiàn)。對(duì)照組裸鼠中，直腸癌移植瘤24小時(shí)未見(jiàn)顯像，腫瘤部位的放射性分布6小時(shí)、24小時(shí)與周?chē)M織無(wú)明顯差別，說(shuō)明標(biāo)記抗體顯像的特異性是由抗前列腺癌單克隆抗體YDPC導(dǎo)向定位的。實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步測(cè)定24小時(shí)標(biāo)記抗體在腫瘤部位的攝取率為2.1%。腫瘤的放射免疫顯像與同位素在體內(nèi)的分布一致。除血液、肝臟和腎臟外，其它臟器的T/NT值6小時(shí)都大于1，24小時(shí)都大于3。T/NT值反應(yīng)腫瘤組織與正常臟器濃聚標(biāo)記

11、抗體的差異，其值高低直接影響體內(nèi)顯像的結(jié)果。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，血液、肝臟和腎臟的T/NT值增大，但不明顯，這是因?yàn)楸狙芯克玫腨DPC抗體是完整的抗體分子，肝臟內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)抗體Fc段的親和性使抗體堆積于肝臟內(nèi)，短時(shí)間內(nèi)顯像時(shí)影響與腫瘤組織的對(duì)比度，尤其顯像肝內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移灶時(shí)更明顯。腎臟T/NT值24小時(shí)為0.46，說(shuō)明腎臟可能是放射性核素代謝并排出體外的臟器。本研究結(jié)果表明，標(biāo)記抗體YDPC-99mTc可以在荷人前列腺癌移植瘤裸鼠體內(nèi)得到清晰的腫瘤顯像，具有特異性，有希望應(yīng)用于臨床，有助于前列腺癌患者骨和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期診斷。參考文獻(xiàn)1Gasser TC, Streule K, Nidecke

12、r A, et al. MRI and ultrasonography in staging prostate cancer. N Eng J Med, 1991, 324: 494-495.2Stephen J, Mather,David Ellison. Reduction-mediated technetium-99m labeling of monoclonal antibodies. J Nucl Med,1990, 31: 692-697.3Babaian RJ, Sayer J, Podoloff DA, et al. Radioimmunoscintigraphy of pelvic nodes wi