人白細胞介素-8IL-8試劑盒使用方法

1、人白細胞介素七(L-6 )試劑盒使用方法檢測范圍：96T40 ng/L-1200 ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-8 ( IL-8 )含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細胞介素-8 ( IL-8 )水平。用純化的人白細胞介素8 ( IL-8 )抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介 素( IL-8 ),再與HRP標(biāo)記的白細胞介素-8 ( IL-8 )抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù) 合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的 作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品屮的

2、白細胞介素-8 ( IL-8 )呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度( OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白細胞介素-8 ( IL-8 )濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX 1 瓶7終止液6ml X 1 瓶2酶標(biāo)試劑6ml X 1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(2400 ng/L )0.5ml X 1 瓶3酶標(biāo)包被板12孔X 8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml X 1 瓶4樣品稀釋液6ml X 1 瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml X 1 瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml X 1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，

3、可將標(biāo)本放于 20°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管屮進行稀釋。1200ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150U1的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150U1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液600 ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150H1的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 U1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液300 ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150U1的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150U1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150 ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150 U 1的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150U1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液75 ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150 U 1的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150 U 1標(biāo)準(zhǔn)品

4、稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 U1,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 U1,然后再加待測樣品10U1 (樣品最終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37°C溫育30分鐘。30秒后棄去，如此4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸懾水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50 U1,空白孔除外。7. 溫育：操作同3o8. 洗滌：操作同

5、5o9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 H1,再加入顯色劑B50U1,輕輕震蕩混勻，37°C避光顯色 15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50H1,終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查岀相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1 試劑盒從冷

6、藏環(huán)境屮取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用 完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴屮加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本屮待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn) 品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以 總稀釋倍數(shù)（X nX 5）。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物請避光保存。7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)8. 所有樣品，