紫蘇葉提取物抗家兔動脈粥樣硬化的實驗研究(一)

1、紫蘇葉提取物抗家兔動脈粥樣硬化的實驗研究(一)    作者：陳眷華 譚健民 徐在品 陳超 霍欣 鄧小燕 張迪 簡秀華【摘要】 目的探討紫蘇葉提取物(FPE)對由高脂高膽固醇引起家兔動脈粥樣化的影響。方法采用高脂高膽固醇飼喂法建立家兔動脈粥樣硬化模型，分別測定正常對照組、高脂模型組、紫蘇葉提取物低劑量組（0.17 g·kg-1）、中劑量組（0.5 g·kg-1）、高劑量組（1.5 g·kg-1）血清中TC，TG，LDL-C，HDL-C，MDA含量及SOD的活性，大體染色計算脂肪斑塊面積比（PA），組織切片觀察主動脈內膜增生(I

2、H)。結果FPE組均能明顯降低血清中TC，TG，LDL-C，MDA的含量（P0.01），并能升高血清中HDL-C的含量（P0.01）和SOD的活性（P0.05），F(xiàn)PE干預組PA值下降明顯，F(xiàn)PE中劑量組、高劑量組與高脂模型組比較具有統(tǒng)計意義 分別為（21.52±7.58）%，P0.05；（15.82±3.64）%，P0.01；（53.59±29.31）%。病理切片顯示，各用藥組主動脈IH程度均小于高脂模型組，其中高劑量用藥組AS程度最小。結論 紫蘇葉提取物具有抗高脂飲食誘導家兔動脈粥樣硬化的作用，其作用機制可能與其調節(jié)血脂與抗脂質過氧化有關。 【關鍵詞】 動脈粥

3、樣硬化 紫蘇葉提取物 血脂 脂質過氧化 家兔動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是以動脈內皮細胞功能障礙、脂質沉積、炎癥反應、平滑肌細胞遷移與增殖為主的病理改變，是導致心腦血管疾病的直接原因1?，F(xiàn)代藥理研究表明，紫蘇葉的主要成分迷迭香酸及黃酮類化合物具有抗氧化、清除自由基及改善血液流變學等作用2,3。已有的實驗研究結果表明紫蘇葉具有抗動脈粥樣硬化的藥理基礎，但目前有關其抗AS的實驗研究還未見報道。本實驗從紫蘇藥理理論出發(fā)，研究紫蘇葉提取物抗家兔動脈粥樣硬化作用，為拓展紫蘇的臨床應用提供實驗參考。1 材料與儀器1.1 藥物紫蘇葉提取物(FPE)：紫蘇葉購于貴陽市中藥公司，由貴州

4、大學動物科學學院基礎獸醫(yī)學實驗室制備，藥物濃度為每毫升含原生藥1 g。1.2 動物體重1.82.0 kg新西蘭大白兔30只，雄性，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供。1.3 飼料為機制顆粒飼料。基礎飼料配方：玉米35，小麥25，麥麩35，魚粉2，骨粉2，鹽1；高脂飼料配方1.5 %膽固醇+ 10 %煉制豬油+ 88.5%基礎飼料。1.4 儀器與試劑旋片式真空泵（浙江黃巖求精真空泵廠）；RE-52旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；TDl-5A離心機（上海菲恰爾分析儀器有限公司）；旋轉式切片機（德國，LEICA Rm2125）；光學顯微鏡（日本，OLYMPUS CX31）；722光柵分光光度計(上海精密

5、科學儀器有限公司)；膽固醇（上海山浦化工有限公司，化學純）；甘油三酯測定試劑盒、總膽固醇測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒均購自南京建成生物制品研究所。2 方法2.1 紫蘇葉提取物的制備取干紫蘇葉，適度粉碎后過20目篩備用，稱取樣品100 g，按固液比為115加入新鮮蒸餾水，煎煮至沸騰后，再繼續(xù)煎煮15 min，趁熱4層紗布過濾，濾渣按固液比為112加入新鮮蒸餾水重提1次，過濾，合并兩次濾液，用文火將濾液濃縮至300 ml，待濃縮液冷卻后，加入3倍量95%乙醇于4下放置12 h，沉淀后以3 000 r·min-1離心3 min，取上清液進行抽濾，濾

6、液旋轉蒸發(fā)濃縮至無乙醇味為止，最后定容至100 ml，即每毫升提取液含原生藥1 g。2.2 動物分組與給藥實驗分別設正常對照組、高脂模型組、FPE低劑組（紫蘇組）、FPE中劑量組（紫蘇組）、FPE高劑量組（紫蘇組）（藥物劑量分別為0.17，0.5，1.5 g·kg-1）。實驗動物用基礎飼料適應性飼養(yǎng)7 d，然后隨機分為5組，每組6只。正常對照組飼喂基礎飼料，高脂模型組飼喂高脂飼料，用藥組飼喂高脂飼料并灌胃 FPE相應劑量的藥物，同時模型組與正常對照組均灌胃等量蒸餾水。灌胃量為每只兔子3 ml·d-1，共8周。2.3 觀察指標 分別于實驗前1天、第4周末和第8周末，清晨空腹行

7、耳中動脈采血3.54.0 ml，分離血清，按各檢測試劑盒的操作方法，測定總膽固醇 (TC)、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C)、丙二醛（MDA）的濃度及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。2.4 主動脈組織學觀察動物于第8周末頸動脈放血處死，完整取出胸主動脈于10%福爾馬林中固定12 h。按劉氏等方法4計算脂質斑塊面積百分比（percentage of plaques covering aortic intima, PA）：PA=脂質斑塊面積/胸主動脈總面積×100%，比較各組PA的差異。同時取近心端5 mm處主動脈，常規(guī)制作石蠟切片，行

8、蘇木素-伊紅（HE）染色，比較光鏡下血管內膜增生程度。2.5 統(tǒng)計學分析實驗結果采用±s表示，SPSS10.0 (ONE-WAYANOVA)進行方差分析。3 結果3.2 FPE對血清中脂質過氧化的影響經(jīng)統(tǒng)計學處理，實驗第4周末，F(xiàn)PE 3個劑量組MDA的含量均低于高脂模型組，但無顯著性差異，第8周末中劑量組與高劑量組明顯低于高脂模型組，并且表現(xiàn)出差異極顯著（P0.01）；用藥組在實驗第4周末，其中高劑量組血清中SOD的活性明顯高于模型組（P0.01），第8周末，中劑量組與高劑量組與高脂模型組比較有顯著性差異（P0.05）。結果見表56。表5 FPE對血清中丙二醛（MDA）含量的影響表

9、6 FPE對血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響與正常對照組比較，P0.05，P0.01；與高脂模型組比較，# P0.05，#P0.01；n=6PA=脂質斑塊面積/主動脈面積×100%HE染色顯示，空白對照組血管內膜光滑，無粥樣硬化斑塊突出，內膜、中膜、外膜三層結構清楚。高脂模型組血管可見明顯粥樣硬化斑塊突出于整個內膜，纖維帽下可見大量的泡沫細胞，斑塊根部可見細胞碎片，大量的巨噬細胞和梭形細胞穿插其間，中膜平滑肌受壓萎縮，并可見平滑肌增生向內膜層移行。FPE組病變與高脂模型組相仿，脂質斑塊占管腔的面積較模型組低。FPE組病變最輕，血管內膜增生不明顯，僅在局部有輕微的脂質斑塊增生，

10、FPE的病變程度介于高劑量和低劑量之間。見圖2。a空白對照組 b高脂模型組 cFPE低劑量組 dFPE高劑量組 eFPE中劑量組圖1 各組家兔胸主動脈脂質斑塊病理變化（蘇丹染色）a空白對照組（100×） b高脂模型組（100×） cFPE低劑量組 （100×） dFPE高劑量組（100×） eFPE中劑量組（100×）圖2 各組家兔主動脈內膜增生病理變化（HE染色）表7 胸主動脈前段脂質面積百分比PA值比較(±s)組別PA值正常對照0高脂模型53.59±29.31蘇葉39.57±13.06蘇葉21.52±

11、7.58*蘇葉15.82±3.64*與高脂模型組比較，*P0.05，*P0.01；n=64 討論本實驗用高脂高膽固醇飲食建立家兔AS 動物模型，胸主動脈大體觀察見明顯粥樣斑塊，病理切片見血管內皮下由泡沫細胞組成的脂質斑塊，證明成功建立AS模型。目前有關AS 形成的學說眾多，主要有內皮細胞損傷學說、脂質浸潤學說及微血栓形成學說，而內皮細胞損傷學說最受人們所重視。各種原因造成的動脈內膜損傷是動脈粥樣硬化病變發(fā)生的關鍵因素，內皮細胞功能障礙可以引發(fā)一系列變化，從而促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。如氧化型低密度脂蛋白(OXLDL) 及氧化自由基損傷血管壁，導致內皮細胞受損后壞死、脫落，局部膠原纖

12、維暴露、血小板粘附、聚集，釋放各種趨化因子及生長因子，使局部膠原纖維合成增加、單核細胞附壁浸潤，中膜平滑肌細胞向內膜遷移、增殖，這些細胞發(fā)生表型的改變，吞噬大量脂質、形成泡沫細胞最終導致AS5。本實驗結果表明，F(xiàn)PE能夠提高家兔SOD的活性并降低MDA的含量。病理切片顯示，動脈粥樣硬化程度與藥物劑量相關，藥物劑量越大，病變程度越小，因此認為FPE抗AS作用可能與清除自由基、抗脂質過氧化損傷的藥理作用有關。本實驗研究表明，紫蘇葉提取物用藥組（0.17，0.5，1.5 g·kg-1）均能明顯降低血清中TC，TG，LDL-C的含量（P0.01），并能升高血清中HDL-C的水平，表現(xiàn)出良好的

13、調節(jié)血脂的作用?，F(xiàn)已公認高脂血癥是動脈粥樣硬化病變的最主要原因，內膜中脂質沉積被認為是AS病變的早期表現(xiàn)。大量實驗研究表明，中藥可通過調節(jié)血脂代謝紊亂來抑制AS 的形成69。因此筆者認為，F(xiàn)PE調整血脂代謝可能是其抗AS的其中一個藥理基礎。綜上所述，紫蘇葉提取物具有抗AS的作用，可能與其抗脂質過氧化及調節(jié)血脂作用有關，對于其具體作用機制還有待作進一步的研究?！緟⒖嘉墨I】1 許文亮,郭新貴,徐延路,等. 冠心病患者血漿膽固醇與內皮素-1、C-反應蛋白及血小板可溶性P選擇素相關性研究J.新醫(yī)學, 2004, 35 (6)：330.2 呂曉玲,朱惠麗,姜平平,等.紫蘇提取物抗氧化活性體外實驗研究J.中國食品添加劑,2003,5：22.3 徐在品,鄧小燕,門吉英,等.紫蘇不同部位提取物對大鼠血液流變性的影響J.生物醫(yī)學工程學雜志, 2006,23 (4)：762.4 劉發(fā)益,文志斌,尚改萍，等.補陽還五湯抗家兔動脈粥樣硬化形成的實驗研究J.湖南醫(yī)科大學學報,2000,25 (1)：33.5 薛文雋, 吳國忠.中藥抗動脈粥樣硬化的藥理學研究進展J.上海中醫(yī)藥雜志,2003,37(6)：58.6 戴 敏, 訾曉梅, 彭代銀, 等.丹皮酚抗鵪鶉實驗性動脈粥樣硬化作