HPLC_ELSD測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量及相關(guān)試驗(yàn)條件選擇的探討

1、藥材生產(chǎn)與質(zhì)量HPLC-ELSD測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量及相關(guān)試驗(yàn)條件選擇的探討馬艷蓉1,劉泓2,柴國(guó)林3,張蒞峽2(1.浙江大學(xué)藥學(xué)系,浙江杭州310031;2.中國(guó)中醫(yī)研究院基礎(chǔ)理論研究所,北京100700;3.浙江亞克藥業(yè)有限公司,浙江杭州310053摘要:目的探討高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法(HP LC-ELSD測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量中相關(guān)試驗(yàn)條件:如提取溶劑,溶劑濃度,提取方法及藥材粉碎度等的最佳選擇。方法采用HPL C-EL SD發(fā)光散射檢測(cè)法。結(jié)果黃芪甲苷在2.010.0L g與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。(r=0.9997,n=5,平均回收率為97.9%(RSD=1.8%。結(jié)論在

2、合適條件下,HP L C-EL SD測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量是一值得推廣的方法。關(guān)鍵詞:黃芪;黃芪甲苷;HPL C-EL SD;條件試驗(yàn)中圖分類號(hào):R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1004-2199(200306-0017-031儀器與試藥1.1儀器HP1100高效液相色譜儀,Alltech500型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,HP3395積分儀,HGA-2000空氣發(fā)生器,Rheodyne7725I進(jìn)樣閥,Hamilton25L l微量進(jìn)樣器,CX-1超聲波清洗器。1.2試藥黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所;黃芪藥材及飲片1,2,3,4,5經(jīng)謝宗萬教授鑒定為蒙古黃芪A str agalu mem

3、branaceus(FischBg e.v ar. mongholicus(Bg e.Hsiao。乙腈為色譜純,(南開大學(xué)精細(xì)化學(xué)實(shí)驗(yàn)廠,其它試劑為分析純,水為高純水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為YWGC18(10L m,4.6m m×200 m m;流動(dòng)相:乙腈-水(12;室溫,流速0.8mlm in-1;ELSD參數(shù):漂移管溫度:107;氣體流速: 2.7mlmin-1。2.2供試品制備方法條件考察17現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2003年第17卷第6期Resear ch and Pr actice of Chinese M edicines純甲醇或乙醇提取率高,進(jìn)一步比較不同濃度甲

4、醇和乙醇提取所含黃芪甲苷提取率,相應(yīng)不同濃度甲醇較乙醇及水偏高,以甲醇、60%甲醇、40%甲醇及水提取率分別為0.12、0.20、0.22、0.15m gg-1生藥,以40%甲醇最高。以選擇40%甲醇提取為最佳選擇。2.3供試品溶液的制備,本品經(jīng)粉碎為粗品,過60目篩,精密稱取1.5g,置索氏提取器中,加40%甲醇20ml冷浸過夜,再續(xù)加40%甲醇使之總量為50 ml,熱回流4h,提取液蒸干,殘?jiān)铀?0ml微熱溶解,加水飽和正丁醇振搖提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用氨試液洗2次,每次20ml,棄去氨液,正丁醇蒸干,殘?jiān)铀?m l,使溶解,放冷。通過D101大孔樹脂柱(1.5cm&#

5、215;12cm,50m l水洗脫, 70%乙醇50ml洗脫,收集70%洗脫液,蒸干,甲醇溶解,并定容至2m l容量瓶中,經(jīng)0.45L m微孔濾膜過濾后,作為供試品溶液。2.4線性關(guān)系的考察精密稱定黃芪甲苷對(duì)照品10mg,加甲醇溶解并容至10ml容量瓶中,精密吸取2,4,6,8,10L l進(jìn)樣,以進(jìn)樣量(自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),峰面積積分值(自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),線性回歸方程Y=1.5210X +12.1663,r=0.9997,進(jìn)樣量在210L g呈良好線性關(guān)系。2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一份樣品20L l,重復(fù)進(jìn)樣6次, R SD2.3%。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)同一份樣品按制備方法平行制備5份,含量平均值

6、為0.36mgg-1生藥,R SD為1.9%。2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)按照樣品測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行,對(duì)同一份樣品,先后在0,1,2,4,8h進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算R SD1.2%。2.8回收率測(cè)定采用加樣回收率測(cè)定法。取已知含量的樣品約0.75g,精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.0500m g ml-110ml(按11加入。按上述供試品樣品制備及色譜條件測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表1。表1回收率測(cè)定結(jié)果序號(hào)樣品量mg測(cè)得量mg回收率%x%RS D%2.9樣品測(cè)定,見表2。表2不同樣品測(cè)定結(jié)果序號(hào)樣品產(chǎn)地、提供單位含量(m gg-1外觀性狀特征1蒙古黃芪內(nèi)蒙海南亞洲藥廠0.64綿性大、柴性小、甜度高、發(fā)粘2蒙古黃芪內(nèi)蒙(三年生北京

7、同仁醫(yī)院眼科所0.19柴性大、空心3蒙古黃芪內(nèi)蒙北京同仁醫(yī)院眼科所0.36柴性略小、粘性略大4蒙古黃芪山西(一年生北京同仁醫(yī)院眼科所0.17柴性大、纖維化強(qiáng)5蒙古黃芪飲片北京購(gòu)北京同仁醫(yī)院眼科所0.073潮濕(測(cè)水份含量13.0%、柴性大、纖維化強(qiáng)3討論3.1曾試驗(yàn)甲醇水不同比例(7525,(4060及乙腈-水等不同比例流動(dòng)相,確認(rèn)參考文獻(xiàn)1乙腈-水(23或(12,達(dá)基線分離、分離良好,乙腈比例加大黃芪甲苷相對(duì)保留時(shí)間減少,因此仍以乙腈-水(12出峰保留時(shí)間適度,尚可節(jié)省時(shí)間,節(jié)省有機(jī)溶媒,達(dá)到有效分離。3.2按ELSD檢測(cè)器設(shè)置要求計(jì)算并確定漂浮管溫度為107、氣體流速為2.7Lmin-1,

8、流速過高或過低會(huì)直接影響信噪比,溫度過高或過低直接影18現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2003年第17卷第6期Resear ch and Pr actice of Chinese M edicines響溶劑的揮發(fā)程度,否則將會(huì)影響基線的穩(wěn)定性,應(yīng)嚴(yán)格遵循儀器設(shè)置要求,可適當(dāng)調(diào)整。3.3有關(guān)計(jì)算問題,曾用同一組數(shù)據(jù),用常規(guī)計(jì)算法、自然對(duì)數(shù)及常用對(duì)數(shù)法計(jì)算結(jié)果,前者線性關(guān)系不好,用后二者無顯著區(qū)別。3.4HPLC-ELSD 法,操作簡(jiǎn)便,且不受外界環(huán)境干擾,試劑在檢測(cè)中全部蒸發(fā),靈敏度穩(wěn)定性及重現(xiàn)性很高,確定是一種值得推廣應(yīng)用的檢測(cè)黃芪及相關(guān)制劑中黃芪甲苷成份的最新而適用的方法。3.5樣品測(cè)試結(jié)果,其含量高低

9、與藥材外觀形狀有一定相關(guān)性,綿性大,柴性小,發(fā)粘含黃芪甲苷較高;柴性大纖維性強(qiáng),含量低;飲片經(jīng)炮制處理,含水量較高,含量偏低是否在加工中造成成分損失之故,有待進(jìn)一步探討。參考文獻(xiàn)1王寶王王木.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究M .北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1994.538.2付鐵軍,李伯剛,及元喬,等.HPLC 法測(cè)定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量J .天然產(chǎn)物的研究與發(fā)展,1997,9(4:53.3國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部S .2000.249.4周春玲,魯靜.高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)測(cè)定黃芪中黃芪甲苷的含量J .中國(guó)中藥雜志,2000,25(3:66.5田南卉,楊國(guó)紅,張?chǎng)H,等.HPL C EL

10、SD 檢測(cè)測(cè)定黃芪和制劑中黃芪甲苷含量M ,迪馬公司,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器應(yīng)用文獻(xiàn)和技術(shù)參考,2001.6鄧海銀.HPLC 儀器的通用質(zhì)量檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(EL SDJ ,藥物分析,1994,14(3:61.7國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂批件,2001年ZFBO 171.(收稿日期:2003-09-27Assays of Astragaloside in Radix Astragali by HPLC -ELED andStudies on Its Choosing of the Condition TestMA Yan -r ong 1,LIU Hong 2,ZHANG Li -x

11、 ia 2,CHAI Guo -lin3(1.Pharmacy School,Zhejiang U niv ersity ,Hang zhou 310031,China;2.Institute of Basic Theory of T CM ,China Academ y of Tr aditio nal Chinese M edicine,Beijing 100700,China ;3.Zhejiang Yake Pharmaceutical Co .,Ltd .,Hangzhou 310053,China Abstract :Objective To study the HPLC-ELED

12、 m ethod for the assay s of astrag aloside in Radix Astrag ali and determine the most suitable testing condition such as choosed solvent ,concentration o f the so lvent ,the w ay of the ex tr action and the g ranularity o f the raw m aterial ,etc .Method The HPLC -ELSD metho d w as used.Result The s

13、tandard curve w as linear at the range of 2.010.0L g fo r astrag alo side (r =0.9997,n =5,the average reco very was 97.9%(RS D =1.8%.Conclusion U nder suitable condition,the method of determ ining astragaloside in Radix Astragali by HPLC -ELED is w or th to be po pularized .Key words :Radix Astragali ;astrag aloside ;HPLC -ELED ;condition test封面介紹上海華宇藥業(yè)有限公司簡(jiǎn)介上海華宇藥業(yè)有限公司是目前國(guó)內(nèi)最大的中藥材生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)企業(yè)之一,是由中國(guó)藥材集團(tuán)公司和上海市藥材有限公司雙方共同投資組建而成,具有獨(dú)立法人資格的有限公司。公司主要經(jīng)營(yíng):中藥材、中藥飲片、中成藥等。2001年,公司通過