萘乙酸殘留的高效液相色譜法測定_圖文

1、第29卷第4期2010年4月分析測試學(xué)報FENX I CESH I XUEBAO (Journal of I nstrumental Analysis Vol 129No 14382385收稿日期:2009-11-13;修回日期:2010-03-09基金項目:國家水體污染控制與治理科技重大專項資助項目(2008ZX07101-006-05;環(huán)保公益資助項目(200809102第一作者:孔德洋(1977-,男,山東滕州人,助理研究員,博士研究生,Tel:025-*,E -mail:kongdeyanghot m ail 1com萘乙酸殘留的高效液相色譜法測定孔德洋1,石利利1,單正軍1,葛峰1,

2、高士祥2(1.環(huán)境保護(hù)部南京環(huán)境科學(xué)研究所,江蘇南京210042;2.南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院污染控制與資源化國家重點實驗室,江蘇南京210093摘要:建立了水稻植株及環(huán)境樣品中萘乙酸的快速分析方法。以二氯甲烷為提取溶劑,對試樣進(jìn)行加速溶劑萃取,自動凝膠滲透色譜儀凈化,高效液相色譜分離,二極管陣列(P DA 檢測器測定,外標(biāo)法定量。萘乙酸的質(zhì)量濃度在010520100mg/L 范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。萘乙酸在土壤及水稻樣品中的檢出限為0105mg/kg,土壤中的添加水平為0105、1100mg/kg 時,回收率為92%、86%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為119%、313%;植株中添加水平為0110、1

3、100mg/kg 時,回收率為76%、83%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為215%、219%。該方法的靈敏度及重復(fù)性均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。關(guān)鍵詞:萘乙酸;加速溶劑萃取;凝膠色譜法;農(nóng)藥殘留;高效液相色譜中圖分類號:O65717;O6251512文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1004-4957(201004-0382-04Deter m inati on of 2Naphthylacetic Acid by ASE -GPC Coup led with HP LCK ONG De 2yang 1,SH IL i 2li 1,SHAN Zheng 2jun 1,GE Feng 1,G AO Shi 2xiang

4、 2(1.Nanjing I nstitute of Envir on mental Science,M inistry of Envir on mental Pr otecti on of the Peop le s Republic ofChina,Nanjing 210042,China;2.State Key Laborat ory of Polluti on Contr ol and Res ourceReuse,School of the Envir on ment,Nanjing University,Nanjing 210093,China Ab s trac t:A rap

5、id detecti on method has been established t o deter m ine the residues of 2naphthylace 2tic acid in rice p lants and the envir onmental sa mp les by high perfor mance liquid chr o mat ography(HP LC in combinati on with accelerated s olvent extracti on (ASE and aut o gel per meati on chr oma 2t ograp

6、hy (GPC .The sa mp le was extracted by ASE with dichl or omethane as extracti on reagent andcleaning up by aut o GPC .The extract was analyzed by HP LC with phot odi ode array (P DA detect or .The results showed that the calibrati on curve was linear over the concentrati on of 2naphthylacetic acidin

7、 the range of 0105-20100mg/L.The li m its of detecti on (LOD s of 2naphthylacetic acid in s oiland rice p lant were both 0105mg kg -1.The recoveries of 2naphthylacetic acid in s oils sa mp le for 2tified with 0105and 110mg /kg were 92%and 86%,res pectively,and the RS D s were 119%and313%,res pective

8、ly .The recoveries in rice p lant sa mp le f ortified with 0110and 1100mg/kg were76%and 83%,res pectively,with RS D s of 215%and 219%.The sensitivity and repeatability of themethod could meet the analysis require ments of pesticide residues .Key wo rd s:2naphthylacetic acid;accelerated s olvent extr

9、acti on (ASE ;gel per meati on chr oma 2t ography (GPC ;pesticide residue;HP LC 萘乙酸(2Naphthylacetic acid 是一種具有生長素類性質(zhì)的生長調(diào)節(jié)劑,可以調(diào)節(jié)植物的生長和發(fā)育1。由于其毒性小,增產(chǎn)效果明顯,且采用萘乙酸浸泡種子,能使小麥、水稻、玉米等作物的幼苗變粗壯2-3,因此在農(nóng)業(yè)上得到廣泛應(yīng)用。日本、美國對其在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留均有嚴(yán)格限量4。因此,建立快捷準(zhǔn)確對環(huán)境中萘乙酸殘留的分析方法是研究的重點。目前國內(nèi)對萘乙酸在水果和蔬菜中的殘留檢測已有報道。檢測方法主要有分光光度法、氣相色譜法、高效液相色

10、譜法等5-8。加速溶劑萃取(ASE 、固相萃取(SPE 和凝膠滲透色譜(GPC 法是目前研究應(yīng)用最多、最有效的前處理技術(shù)9-15。本文采用加速溶劑萃取技術(shù)、凝膠滲透色譜凈化,液相色383第4期孔德洋等:萘乙酸殘留的高效液相色譜法測定譜分離測定,分析了水稻植株及環(huán)境土壤中萘乙酸的殘留狀況,結(jié)果滿意。1實驗部分111儀器與試劑W aters2695高效液相色譜儀、W aters2996二極管陣列紫外檢測器、W aters凝膠色譜儀(美國W a2 ters公司;快速溶劑萃取儀(美國D i onex公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;氮吹儀;液相色譜柱:Sy mmetry C18柱(5m×416mm×

11、;250mm,美國W aters公司。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品:萘乙酸純度9910%(江蘇省農(nóng)藥檢定所提供;乙腈、二氯甲烷為色譜純試劑;二氯甲烷、磷酸、氯化鈉(140烘烤4h、碳酸氫鈉、無水硫酸鈉(130烘烤4h、硅藻土為分析純試劑。112樣品提取土壤、植株:分別稱取20g待測樣品,添加少量活性炭,加入無水硫酸鈉碾磨混勻,以二氯甲烷為提取劑,在80、10134MPa條件下于快速溶劑萃取儀中靜態(tài)循環(huán)萃取2次。ASE條件:溫度80;預(yù)熱1m in,加熱5m in,靜態(tài)提取5m in;50%溶劑快速吹掃樣品,氮氣吹掃萃取池的時間60s;壓力:10134MPa;循環(huán)2次,收集全部溶劑。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至5 mL

12、,進(jìn)GPC凝膠色譜儀凈化。113樣品凈化GPC凈化條件:Envir ogel T M GPC Cleanup色譜柱(19mm×300mm;流動相為二氯甲烷(色譜純,流速5mL/m in;收集15151615m in出峰的組分5mL,氮氣吹干,用甲醇定容至2mL,過0145m 濾膜,進(jìn)液相色譜測定。114液相色譜測定條件色譜柱:Sy mmetry C柱(5m×416mm×250mm;流動相:體積比7030的甲醇-水(磷酸調(diào)18pH值為310,流速為1mL/m in,進(jìn)樣量20L。115加標(biāo)回收率與檢出限分別稱取2010g空白土壤、植株樣品,加入一定量的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液,

13、混勻,按上述方法進(jìn)行前處理、提取、凈化,分別設(shè)置5組平行處理,進(jìn)行加標(biāo)回收率實驗。2結(jié)果與討論211ASE提取條件的優(yōu)化分別考察了丙酮、石油醚、乙腈和二氯甲烷4種萃取溶劑對土壤及水稻植株中萘乙酸殘留的提取效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),石油醚和乙腈的提取效率低于65%,而丙酮后期凈化過程復(fù)雜,用二氯甲烷提取可保證萘乙酸的回收率達(dá)70%以上,因此選用二氯甲烷作為萃取溶劑進(jìn)行提取?？疾炝颂崛囟确謩e為40、60、80、100時,加速溶劑萃取儀對樣品的提取效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn), 80時樣品的萃取回收率達(dá)75%以上,繼續(xù)增大提取溫度,會導(dǎo)致待測組分分解,且提取溶劑損失嚴(yán)重,因此實驗選擇在80下提取。在植株提取過程中添加少量

14、活性炭,可以吸附一定量的色素,有利于后期的凈化16。212GPC凈化條件的優(yōu)化本文采用Envir ogel T M GPC Cleanup凝膠色譜柱為分離柱,以二氯甲烷為流動相進(jìn)行GPC分離。該凈化方法可使色素等干擾物質(zhì)與待測物達(dá)到較好的分離。空白及實際樣品的液相色譜圖如圖1所示。由圖1可以看出,該方法可使干擾組分和待測物達(dá)到良好的分離,滿足分析要求。分析測試學(xué)報第29卷 圖1萘乙酸的實際樣品測定圖Fig 11Chr omat ogra m s of 2naphthylacetic acid in real sa mp lesA.blank s oil sa mp le,B.actual s

15、oil samp le,C .blank p lant sa mp le, D.p lant sa mp le; 1.2naphthylacetic acid213方法的線性關(guān)系農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇依次稀釋,配成質(zhì)量濃度分別為0105、0110、0120、0150、110、210、1010、2010mg/L 的工作溶液,在優(yōu)化實驗條件下進(jìn)行液相色譜測定。萘乙酸的質(zhì)量濃度在010520100mg/L 范圍內(nèi)與色譜峰高呈良好的線性關(guān)系,其回歸方程為y =19111,r 2=01999,其中y 為色譜峰高(Hz ,為萘乙酸的質(zhì)量濃度(mg/L 。214方法的回收率及檢出限考察了萘乙酸在土壤及水稻樣品中

16、的加標(biāo)回收率,結(jié)果表明,在該方法條件下,土壤中萘乙酸的添加量為0105、1100mg/kg 時,回收率為92%、86%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為119%、313%;植株中萘乙酸的添加量為0110、1100mg/kg 時,回收率為76%、83%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為215%、219%。儀器的最低檢出量(S /N =6為2×10-10g,土壤及水稻植株樣品中萘乙酸的檢出限為0105mg/kg 。3結(jié)論建立了用快速溶劑萃取、GPC 凈化、液相色譜法測定土壤及水稻植株中萘乙酸的方法。該方法簡便有效,可以很好地去除樣品中的雜質(zhì)干擾,土壤、植株的平均回收率為76%92%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為119%313%,線性相關(guān)

17、系數(shù)均大于01999。土壤及水稻樣中萘乙酸的檢出限為0105mg/kg,方法符合農(nóng)藥殘留檢測要求。參考文獻(xiàn):1毛善國,徐建明,李東梅.赤霉素和萘乙酸不同配比浸種對小麥幼苗生長的協(xié)同作用J .安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34(18:4672-4673.2丁益,王百年,韓效釗,等.2萘乙酸的合成方法及應(yīng)用前景J .安徽化工,2004,129(3:17-18.3周秀梅,李保印,張建偉,等.萘乙酸和生根靈對火棘帶冠硬枝扦插的效果J .農(nóng)業(yè)科技開發(fā),2004,18(2:28-29.483583第4期孔德洋等:萘乙酸殘留的高效液相色譜法測定4世界貿(mào)易組織衛(wèi)生及植物衛(wèi)生措施委員會.日本修訂部分熱帶農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留

18、限量E B/OL.2009-09-08htt p:/www1shkjxn1com/zxb/jsblzt/ggnycpzlbz/200909/t20090908_1296241ht m l.5姜欣,周寧.2萘乙酸高效液相色譜分析J.農(nóng)藥,1997,36(7:18-19.6周昱,莊無忌.毛細(xì)管氣相色譜法測定果蔬中2萘乙酸殘留量J.分析化學(xué),1993,21(8:992.7王雪娟,魏金旺.2萘乙酸的分析方法研究J.色譜,2000,18(6:563-565.8王東新,周耀明,陳維.溶膠-凝膠毛細(xì)管柱氣相色譜法直接測定萘乙酸J.分析儀器,2003,(3:35-37.9王建華,郭翠,龐國芳,等.GPC凈化-

19、同位素稀釋內(nèi)標(biāo)定量GC-MS對植物油中多環(huán)芳烴的測定J.分析測試學(xué)報,2009,28(3:267-271.10賀小雨,陳樹兵,俞雪鈞,等.冷凍去脂-固相萃取/氣相色譜-質(zhì)譜法對水產(chǎn)品中禾草丹、溴氰菊酯及19種有機氯農(nóng)藥殘留的測定J.分析測試學(xué)報,2009,28(3:306-309.11葉明立,朱巖.ASE加速溶劑萃取技術(shù)在食品、農(nóng)殘方面的分析應(yīng)用J.現(xiàn)代科學(xué)儀器,2003,(1:35-37.12劉詠梅,王志華,儲曉剛.凝膠滲透色譜技術(shù)在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用J.分析測試學(xué)報,2005,24(2:123-127.13陳猛,袁東星,許鵬翔,等.固相微萃取研究進(jìn)展J.分析科學(xué)學(xué)報,2002,18(5:

20、429-435.14李櫻,儲曉剛,仲維科,等.凝膠滲透色譜-氣相色譜同時測定糙米中擬除蟲菊酯、有機氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯的殘留量J.色譜,2004,22(5:551-554.15F I SHER JOHN A,SCARLETT M J,ST OTT A D.Accelerated s olvent extracti on:an evaluati on f or screening of s oils forselected U1S.EP A se m ivolatile organic p ri ority pollutantsJ.1997,31(4:1120-1127.16朱曉蘭,蔡繼寶,楊俊,等

21、.加速溶劑萃取/氣相色譜法測定土壤中的有機磷農(nóng)藥殘留J.分析化學(xué),2005,33(6:821-824.(上接第381頁3PE DANO M L,R I V AS G A.Ads or p ti on and electr ooxidati on of nucleic acids at carbon nanotubes paste electr odesJ.Eletr oche m Commun,2004,6(1:10-16.4WALLACE S S.B i ol ogical consequences of free radical2da maged DNA basesJ.Free Radic

22、al B i ol M ed,2002,33(1:1-14.5蔡凌霜,曾昭睿,吳采櫻.DNA氧化損傷產(chǎn)物及其檢測方法J.分析測試學(xué)報,2001,20(5:88-93.6P ALECEK E.O scill ographic polar ography of highly poly merized deoxyribonucleic acidJ.Nature,1960,188(4751:656-657.7JOSEPH W,P ALECEK E,N I E LSE N P E,et al.Pep tide nucleic acid p r obes for sequence2s pecific DN

23、A bi osens orsJ.J Am Che m Soc,1996,118(33:7667-7670.8MER I C B,KER MAN K,OZK AN D,et al.I ndicat or2free electr oche m ical DNA bi osens or based on adenine and guaninesignalsJ.Electr oanalysis,2002,14(18:1245-1250.9BREET C M A,BREET A M O,SERRANO S H P.On the ads or p ti on and electr oche m ical oxidati on of DNA at glassycarbon electr o