基于中藥信息學(xué)對(duì)三種中藥免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、基于中藥信息學(xué)對(duì)三種中藥免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究834?遼寧中醫(yī)雜志 2007 年第 34 卷第 6 期 基于中藥信息學(xué)對(duì)三種中藥免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究 李艷菊 ,劉輝,郭月秋.,馬連學(xué)(1.大連開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科 ,遼寧大連 116600;2.大連醫(yī)科大學(xué)臨床免疫學(xué)教研室 , 遼寧大連 116027;3.大連市藥品檢驗(yàn)所中藥室 ,遼寧大連 116021;4.撫順礦務(wù)局總醫(yī)院檢驗(yàn)科 ,遼寧撫 順113)8)摘要 :目的:探討利用中藥文獻(xiàn)信息資源篩選具有免疫調(diào)節(jié)作用的中藥的可能性.方法:于藥典中隨機(jī)選取 1O 味中藥分別查閱相關(guān)文獻(xiàn) ,選擇有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上單位獨(dú)立完成并發(fā)表 2 篇以上支 持

2、具有免疫調(diào)節(jié)作用淪文的中藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究 ,共計(jì)有 3 種中藥 (白芍,何首鳥(niǎo) ,山藥)入選.將 3 種中藥制戍含 20%生藥的 生藥液 ,用該生藥液給已經(jīng)用卵清蛋白免疫過(guò)的小鼠灌胃，每天 1 次，每次 0.5mL/，連續(xù) 7 天,測(cè)血清中相應(yīng)抗體水 平.結(jié)果:3 種中藥均能使小鼠體內(nèi)的卵清蛋白抗體顯著升高 ,與生理鹽水組比較有顯著差異 (P<005). 結(jié)論:初步 證明中醫(yī)藥信息庫(kù)的中藥信息資源具有較高的可靠性 ,本文提出的篩選原則對(duì)篩選具有免疫調(diào)節(jié)作用的中藥具有 一定的指導(dǎo)意義 .關(guān)鍵詞 :免疫調(diào)節(jié) ;中藥信息學(xué) ;白芍;何首烏;山藥中圖分類(lèi)號(hào)：R96;R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

3、:B 文章編號(hào)：1000 1719(2007)o60834 一 o2TheResearchoflmnluneRegulationE 骶 ctsofThreeChineseMedicinesBasedOilChineseMedicineInformatics /2Yan-ju.,UHui,GUOYueqiu,MALian xue4(1.ExaminingDepartment,DalianDe meZoneHospital,Dalian116600,Liaoning,China;2CliniclmmunologyTeachingandResearchCenter,OalianMedicalUniv

4、ersity,Dalian116027,Liaoning,China;3.TCMoffwe,DalianlnstitutionofDrugContml,Dalian116021,Liaoning,China;4.ExaminingDepartment,FushunMineralHospital,Fushun113008,Liaoning,China)Abstract:Objective:ToinvestigatethepossibihtyofselectingtheClfinesemedicinewithimmuneregulationeffectsaccordingtotheliteratu

5、reresourcesoftheChinesemedicines.Methods:TlellChinesemedieineswere:selectedrandomly,butonlythemedicines,thosehadbeentestedbymorethantwoinstitutionsandwere:reportedbymorethantwopapersrespectivelythatwhichhadtheeffectsofimmuneregulation,couldbeselectedinthistest,atlastthreemedicines(RadixpaeoniaeAlba,

6、RadixpolygoniMuhifloriandRhizomaDioscoreaewereselected.rhecrudeherballiquidscontained20%crudeherbalmedicineofthethreemedicineswtprepared,themiceimmunedwithovalbumin(OVA)wereorlyadministratedwiththethreeherballiquidsrespeetively,midthedosewas0.5mLeachmouseoneday,andrepeated7days,thentheantibodytoOVAw

7、asdetected.Results:nlelevelsoftheantibodytotheovalbuminofthemiceofbeingorallyadministratedwiththethreeherballiquidswere:allsiguificantincreasethanthemicebeingorallyadministratedwithnormalsaline(P<0.05).Conclusions:ltwasprovedpreliminarilythattheinformationresourcesintheifformationstorehouseof

8、theChinesemedicineswerecredible,theprincipleofscreenpresentedinthispaperisvaluableforselectingtheChinesemedicineswithinanuneregulationeffects.Keywords:immuneregulationeffects;Chinesemedicineinformatics;radixpaeoniaealba;radixpolygonimultiflofi;rhizomadioscoreae近年 ,關(guān)于中藥對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用的研究越來(lái)越多 ,許多學(xué)者關(guān)注對(duì)中藥的實(shí)驗(yàn)藥

9、理學(xué)方面的研究 , 所涉及的中藥成分和研究方法各異 .為探討這些研究 的可比性 ,筆者利用信息學(xué)的原理 ,隨機(jī)選取有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上單位獨(dú)立完成 , 并發(fā)表 2 篇以上的支持有免 疫調(diào)節(jié)作用的論文的中藥 ,采用統(tǒng)一方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,為利用中藥文獻(xiàn)信息學(xué)的原理篩選具有免疫調(diào)節(jié) 作用的中藥 ,深入探討中藥的免疫藥理機(jī)制提供實(shí)驗(yàn) 收稿日期：20061128 基金項(xiàng)目 :遼寧省教育廳資助課題 (990221063) 作者簡(jiǎn)介：李艷菊(1968 一),女(滿(mǎn)族),遼寧撫順人 ,副高級(jí)檢驗(yàn)技師 碩士,研究方向：中藥的免疫作用及規(guī)律 . 通訊作者：劉輝(1960 一).男,教授,碩士生導(dǎo)師 . 依據(jù).

10、1 材料和方法1.1 中藥的選擇于 2000 年版中華人民共和國(guó)藥典隨機(jī)選取 10 昧中藥 ,于中國(guó)期刊網(wǎng)查找相關(guān)研究文獻(xiàn) ,凡有兩個(gè)或 兩個(gè)以上單位獨(dú)立完成 ,并發(fā)表兩篇以上的支持具有 免疫調(diào)節(jié)作用的論文的中藥 ,即納入本研究 ,其中自芍 (RadixpaeoniaeAlba)何首鳥(niǎo)(RadixpolygoniMuhi- flori)和山藥(RhizomaDioscoreae)3 種中藥符合入選 條件.3 種中藥購(gòu)于大連醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 ,經(jīng)大連 市藥檢所鑒定均為正品 .1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠，雄性,體重 1822g,由大連醫(yī)科大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 .遼寧中醫(yī)雜志 2007 年第 34

11、卷第 6 期13 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 中藥水煎劑的制備取 3 種中藥各 20g 分別 置于 lOOOmL 的玻璃燒杯中，各加水500mL;浸泡 lh 后.置于火上煎熬 .先武火煮沸以后改為文火 ,再煎 熬 30min 后熄火 ,用紗布濾出藥液 .再向各個(gè)燒杯內(nèi) 加水 300mL，用同樣的方法煎熬 將 2 次濾液混合后 置于火 J 二,濃縮成 lOOmL,制成含生藥 20%的藥液. 將該藥液密封 ,置于冰箱冷藏保存 ,以備用.1.3.2 卵清蛋白抗原的制備取市售雞蛋 ,將殼擊碎后取卵清 1mL,加生理鹽水 4mL.13.3 免疫方案取小鼠 ,注射卵清蛋白抗原 ,0.2 mL/只，注射部位為小鼠大

12、腿內(nèi)側(cè)肌肉.第 1次免疫 后 1O 天,進(jìn)行第 2 次免疫，第 2 次免疫后 4 天采血. 1.3.4 給藥方法將小鼠隨機(jī)分成 4 組,每組 16 只, 第 1 組給予生理鹽水灌胃為對(duì)照組 ;第 2 組給予白芍 水煎劑灌胃,為自芍組;第 3 組給予何首烏水煎劑灌 胃,為何首烏組;第 4 組給予山藥水煎劑灌胃 ,為山藥 組.在第 1 次抗原注射后的第三天各組同時(shí)開(kāi)始給 藥，每天 1 次，每次 0.5mL/只，連續(xù) 7天.1.4 抗體效價(jià)測(cè)定 卵清蛋白抗體測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA). 以卵清蛋白包被酶標(biāo)板 ,測(cè)定相應(yīng)抗體 ,抗 體水平以 OD 值表示.主要步驟如下：用包被液稀 釋雞卵

13、白(1:5)加到酶標(biāo)板中，每孔 0.1mL,置濕盒 中,4C24h;次日用洗滌液充分洗滌 3 次，甩干;將待檢血清稀釋 1O 倍后加入酶標(biāo)板中，每孔 0.1mL,置 37(2 恒溫箱 30min;取出同前法洗滌 3次，甩干;將 羊抗鼠抗體 (衛(wèi)生部北京生物制品研究所出品 ),用抗 體稀釋液 1:1200 稀釋后，每孔加 0.1mL,置 37(2 恒溫箱 30rain;取出同前法洗滌 3 次，甩干;各孔加 A,B 底物液(上?？迫A生物公司)各 0.05mL,置暗處約15min,其間不時(shí)觀(guān)察；各孔內(nèi)加入 2MH2S040.05M1,終止反應(yīng)；用酶標(biāo)儀(Biocell ht2 型)檢測(cè) OD 值 (

14、450ran).1.5 統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(戈土 s)表示,兩組間均值比較采用 t 檢驗(yàn)，顯著性水準(zhǔn) P<0.05.用 SPSS 軟件協(xié)助完成 .2 結(jié)果3 種中藥均能使小鼠體內(nèi)的卵清蛋白抗體顯著升 高與生理鹽水組比較有顯著差異(P<0.05),見(jiàn)表1.表 13 種中藥 xCtJ,鼠卵清蛋白抗體生成水平的影響(; s) 拄:與對(duì)照組比較 ,P<0.05.3 討論傳統(tǒng)中藥的使用方法多是水煎劑口服 ,考慮中藥 水煎劑已包含中藥的各種成分 ,于是本文采用中藥水 煎劑口服的給藥途徑 .給機(jī)體注射抗原檢查相應(yīng)抗體 產(chǎn)生的水平 ,特別是采用酶聯(lián)免疫方法

15、進(jìn)行檢測(cè)可以 靈敏地反映機(jī)體的免疫水平的變化 ,在中藥免疫調(diào)節(jié) 作用中已有成功地應(yīng)用 j,抗體的產(chǎn)生需要 T 細(xì)胞 ?835?的輔助和細(xì)胞因子的參加 ,因此檢測(cè)抗體的水平也可 以在一定程度上反映細(xì)胞免疫的情況 ,是一種評(píng)價(jià)機(jī) 體免疫的有效方法 .故本文統(tǒng)一采用抗原激發(fā)以酶聯(lián) 免疫測(cè)相應(yīng)抗體的方法對(duì)依據(jù)文獻(xiàn)選出的中藥的免疫作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn) .白芍系毛莨科植物的去外皮干燥根 ,有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo) 白芍水煎劑對(duì)巨噬細(xì)胞功能有明娩的促進(jìn)作用;對(duì)白芍總苷（Totalglucosidcsofpaeony,TGP 的系列研 究,使白芍總苷的免疫調(diào)節(jié)作用得到廣泛證實(shí)叫.山藥為薯蕷科多年生宿根蔓草植物山藥的塊根 , 又名白

16、苕 ,土薯,大薯,薯藥】 ,山藥富含多糖 ,可刺激 和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能【 9】 ,山藥磷脂類(lèi)成分有提高免 疫功能的作用 .何首烏,又稱(chēng)首烏 ,赤首烏,為寥科植物何首烏的 干燥塊根 .何首烏有促進(jìn)老齡小鼠胸腺呈明顯形態(tài)和 超微結(jié)構(gòu)逆轉(zhuǎn)變化的作用，有實(shí)驗(yàn)表明，何首烏能 增加老年大鼠胸腺胞漿蛋白和核酸含量 1 引,從而起到 促進(jìn)胸腺細(xì)胞增生 ,保護(hù)胸腺組織 ,提高免疫力的作 用.何首烏能使小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)明顯上 升,提高機(jī)體的非特異性免疫功能 ,同時(shí)還能提高 正常小鼠脾臟抗體形成細(xì)胞數(shù) l 引 ,從而使機(jī)體特異性 免疫功能增強(qiáng) .筆者的實(shí)驗(yàn)表明 ,口服以上 3 種藥物水煎劑均能 使小鼠卵清

17、蛋白抗體有明顯的升高作用（表 1）,進(jìn)一 步證實(shí)了 3 種藥物的免疫調(diào)節(jié)作用 .也說(shuō)明了本文所 使用的驗(yàn)證試驗(yàn)方法有效 .初步證明中醫(yī)藥信息庫(kù)的 中藥信息資源具有很高的可靠性 ,本文提出的篩選原 則 （有2 個(gè)或 2 個(gè)以上單位獨(dú)立完成 ,并發(fā)表 2 篇以上 的支持有免疫調(diào)節(jié)作用的論文 ）對(duì)篩選具有免疫調(diào)節(jié) 作用的中藥具有一定的指導(dǎo)意義 .參考文獻(xiàn)1國(guó)家藥典委員會(huì)中華人民共和國(guó)藥典（一部）M.北京:北京 化學(xué)工業(yè)出版社 ,2000:13172 楊光.黨參多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響J.中藥藥理與臨床，2005,21(4):393 常波.灌服中藥三仙湯對(duì)小鼠免疫應(yīng)答的影響J.中華實(shí)用中西醫(yī)雜 ,2004,4(5):6764 姜憲輝.補(bǔ)骨脂對(duì)激發(fā)態(tài)小鼠的體液免疫影響的實(shí)驗(yàn)研究J.遼寧中醫(yī)學(xué)院 ,2004,6(2):116梁雯若白芍抗炎免疫藥理作用研究J.新中醫(yī),1989,21 (3):51李俊白芍總苷對(duì) B 淋巴細(xì)胞增殖和白細(xì)胞介素 I 生成的調(diào)節(jié)作 用J.中國(guó)藥理學(xué)和毒理學(xué)雜志，1994,8(1):537 劃燁.白芍總苷負(fù)調(diào)節(jié)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞誘生TNF 的定量分析J.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，1998,11(1):18 明-李時(shí)珍.本草綱目(下冊(cè))M.北京:人民衛(wèi)生出版社.1982:16769 蔣艷玲.懷山藥多糖對(duì)衰老小鼠免疫器官組織的影響J.