紫外分光光度法測定石蒜鱗莖的總生物堿含量

1、紫外分光光度法測定石蒜鱗莖的總生物堿含量              作者：李亞仲， 單宇， 吳志平， 袁菊紅， 夏冰、【摘要】  目的建立一種簡單快速的方法來測定石蒜鱗莖總生物堿含量,為石蒜鱗莖質量控制提供依據(jù)。方法紫外分光光度法,以加蘭他敏為對照品,測定波長為289 nm。結果加蘭他敏在20.4102.0 g/ml范圍內與吸光度值呈良好的線性關系,計算得回歸方程Y=0.008 4X-0.022 7,r=0.999 9(n=5)；加樣回收率為99.8%,RSD=1.

2、44%;測定結果在5h內穩(wěn)定，RSD=0.64%；不同來源石蒜鱗莖的總生物堿含量差異較大，栽培石蒜鱗莖的總生物堿含量可以達到并超過野生石蒜。結論該測定方法穩(wěn)定、快速、簡便,測定結果良好。 【關鍵詞】  石蒜； 總生物堿； 紫外分光光度法Determination of Total Alkaloids in Bulb of Lycoris radiate UV-spectrophotographyAbstract：ObjectiveAn effective method was established in order to determine the total alkaloids

3、from bulb of L. radiate. MethodsThe total alkaloids were extracted from the samples and tested at 289 nm.ResultsThe calibration curve of galanthamine were linear (r=0.999 9), and the recovery rate was perfect (99.8% ). The results of measurement were consistent in 5 hours. The contents of total alka

4、loids were different when the bulbs were from different populations. ConclusionThis method is simple, effective and quick and the contents of total alkaloids were different among different populations.Key words：Lycoris radiata;  Total alkaloids;  UV-spectrophotography   石蒜（Lycori

5、s radiata）為石蒜科（Amaryllidaceae）石蒜屬多年生草本植物，主要分布于長江流域及西南各省。據(jù)本草綱目等記載，石蒜具有解毒、祛痰、利尿、催吐等功效，主治癰瘡惡核、咽喉腫癰、水腫等。石蒜的鱗莖含有石蒜堿（Lycorin）、加蘭他敏（Galanthamine）、水仙堿（Tazettine）、石蒜來寧（Lycorenine）、普洛維因（Pluviine）、石蒜胺（Lycoramine）、維他廷（Vitatine）、亥派斯特林（Hippeastrine）等十多種生物堿和重要醫(yī)藥成分。石蒜堿是治療阿米巴痢疾藥吐根代用品的原料，也有一定抗癌作用；加蘭他敏、石蒜胺(力可拉敏)在臨床上為治

6、療小兒麻痹后遺癥恢復神經(jīng)功能的要藥。1995年版中國藥典記載，加蘭他敏的氫溴酸鹽為原料藥和注射液已成功用于小兒麻痹后遺癥、重癥肌無力、腸麻痹的治療以及手術后的催醒劑。近年來，國內外將其用于輕中度阿爾茨海默癥(AD)的治療。加蘭他敏作為第2代膽堿酯酶抑制劑，因其藥效持續(xù)時間長，不良反應小，服藥方便，而日益受到各國研究人員及臨床醫(yī)師的青睞15 。   目前,國內外對石蒜的研究主要集中在石蒜生物堿的成分分析，引種栽培和臨床藥效的研究69。何麗一等10，11曾利用分光光度法分別對石蒜堿、氫溴酸加蘭他敏進行了測定，而對石蒜鱗莖總生物堿含量的測定方法研究未見報道,石蒜鱗莖總生物堿含量的

7、測定對于研究石蒜生物堿代謝，控制石蒜質量，合理栽培、采收，提高提取率具有重要意義。本文主要目的在于建立一套穩(wěn)定、快速、簡便，測定結果良好的石蒜鱗莖總生物堿含量測定方法,為石蒜鱗莖品質分析提供參考。同時我們利用該方法對不同栽培方式及野生石蒜鱗莖的總生物堿含量進行了測定比較。1  器材   UV-2501PC型分光光度計(日本島津公司);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司); 加蘭他敏對照品(中國藥品生物制品檢定所)；所用試劑均為國產(chǎn)分析純。   取盛花期開花植株的鱗莖,切成片后于5560干燥12h，粉碎后過80目篩備用。石蒜鱗莖來源于4個不同

8、樣地。分別來自于南京湯山、南京紫金山的兩個野生居群及江蘇省中科院植物研究所2個不同栽培樣點。2  方法與結果2.1  樣品供試液的制備稱取石蒜鱗莖粉末（過80目篩）12.000 g,置于平底燒瓶中,加12 ml 10%NaOH溶液，靜置15 min, 加50 ml醋酸乙酯（P0.900）,搖勻后放在80水浴中，保持回流。第1次回流2 h,第2次回流1 h，第3次回流1 h。將濾液合并，減壓濃縮至干，用甲醇定容至25 ml，將此溶液過濾后，用移液槍精密吸取50 l入10 ml容量瓶，用甲醇定容至10 ml備用。2.2  波長掃描以甲醇為空白對照,將標準對照品溶液、樣

9、品供試液和空白對照液在200700波長范圍內進行掃描。結果顯示前兩者在(289±2) nm處有最大吸收值,且吸收峰相同，而空白對照液在289 nm處幾乎沒有吸收,故本實驗選擇289nm為測定波長。見圖1。2.3  穩(wěn)定性實驗室溫下取40.8 g/ml的對照品溶液,分別在1,2,3,4,5 h后,于289 nm處測定吸光度。結果5 h內穩(wěn)定，RSD=0.64%。         2.4  標準曲線 精密稱取加蘭他敏對照品0.025 5 g，置于25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,

10、搖勻,得到1 020 g/ml對照品溶液。精密量取對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml入10 ml容量瓶，補甲醇至刻度。以甲醇為空白于289 nm下測定吸光度值。以取樣量為橫坐標,吸光度值為縱坐標,計算得回歸方程Y=0.008 4X-0.022 7,r=0.999 9(n=5),加蘭他敏在20.4102 g/ml濃度范圍內與吸光度值呈良好的線性關系。結果見圖2。2.5  精密度實驗取5份標準對照液0.5 ml,照2.4測定方法制備標準品供試液和空白對照液,在289 nm波長處測定吸光度值,RSD為0.51%,表明精密度較好。1.樣品  2.對照&#

11、160; 3.甲醇圖1  波長掃描圖（略）圖2  加蘭他敏標準曲線（略）2.6  加樣回收率實驗用100 l移液槍取已知總生物堿含量的石蒜鱗莖樣品液一式5份各50 l,置于10 ml容量瓶中,分別加入濃度為1 020 g/ml的對照品溶液0.3 ml。在每個容量瓶中分別補甲醇至刻度，搖勻后依法測定,計算其回收率，平均加樣回收率為99.8%，RSD=1.44%。2.7  樣品總生物堿的測定取不同來源樣品,按2.1的方法制備樣品供試液和空白對照液,在289 nm波長處分別測定吸光度并計算總生物堿相對含量。從表1可以看出,不同來源石蒜鱗莖的總生物堿含量不同。中

12、山植物園梅林栽培居群石蒜鱗莖總生物堿的含量最高；南京紫金山野生居群總生物堿含量最低。表1  不同居群石蒜鱗莖的總生物堿含量（略）3  討論   紫外分光光度法是根據(jù)生物堿分子結構的不同，在紫外區(qū)某一波長處有最大吸收，其吸收度與生物堿的含量成正比的原理進行定量測定的。該法已成功運用于多種中草藥總生物堿含量的測定1214。   石蒜生物堿大多溶于水、乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。用水提取藥粉易糊化；用酸性水溶液提取法提取，在后面的萃取過程中易造成加蘭他敏及其他水溶性石蒜生物堿的流失。因此，本研究采用親脂性有機溶劑提取法，提取液回收溶劑后即得總生

13、物堿，盡量減少了生物堿的流失。   從總生物堿的測定結果來看，不同的生長環(huán)境對石蒜鱗莖的總生物堿含量有較大的影響。野生居群石蒜鱗莖總生物堿含量差異較大，這可能是由于環(huán)境條件的差異導致植物能量及物質代謝的變化，進而影響生物堿代謝的變化；人工栽培居群石蒜鱗莖的總生物堿含量可以達到并超過野生居群。該結果可為石蒜鱗莖的品質分析及進一步研究合理的栽培條件提供一定的參考依據(jù)?！緟⒖嘉墨I】  1 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草M.上海:上海科學技術出版社,1999,8:207.2 賈獻慧,周銅水,鄭 穎,等.石蒜科植物生物堿成分藥理學研究J.中醫(yī)藥學刊,2001,19

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