人血清(漿)胰島素ELISA定量試劑盒說(shuō)明書

1、人血清（漿）胰島素ELISA定量試劑盒說(shuō)明書 （測(cè)定范圍：0.550IU/ml）概述：胰島素是由胰島細(xì)胞合成和分泌的蛋白質(zhì)激素，由A和B兩條鏈組成。A鏈和B鏈分別含有21和30個(gè)氨基酸殘基，分子量為5734。胰島素的生理作用主要是促進(jìn)糖代謝，促進(jìn)葡萄糖的利用和糖原合成，抑制糖原異生，從而維持血糖恒定。測(cè)定血清（漿）胰島素水平并結(jié)合血糖變化是判斷細(xì)胞的功能是否正常以及估計(jì)胰島素敏感性的常用手段。然而由于胰島素和胰島素原的抗原性有很大程度的交叉，而目前常用的免疫分析法特異性很差，不能區(qū)分血中共存的胰島素和胰島素原，所測(cè)定的是免疫反應(yīng)性胰島素，即胰島素與胰島素原及其它胰島素類似物的總體水平，而不是胰

2、島素真正的含量。我們推出的研究用胰島素ELISA試劑盒，選取針對(duì)胰島素不同抗原決定簇的兩種單克隆抗體（單抗）分別固化于微孔中和生物素標(biāo)記，采用雙抗體夾心模式和生物素-親和素放大系統(tǒng)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，可準(zhǔn)確測(cè)定人血清（漿）中胰島素的含量，適用于：（1）評(píng)價(jià)細(xì)胞的功能和估計(jì)胰島素抵抗性，研究肥胖、糖尿病、高血壓和冠心病的病理生理；（2）1型和2型糖尿病的鑒別診斷；（3）診斷胰島素瘤；以及（4）2型糖尿病患者口服降糖藥的選擇等。試劑盒組成1. 96孔預(yù)包被微孔板 1個(gè)2. 20×酶免試驗(yàn)緩沖液 1瓶（50ml）3. 人胰島素標(biāo)準(zhǔn)品 1管（100IU）4. 標(biāo)準(zhǔn)品及生

3、物素化胰島素單抗稀釋液（15ml）5. 生物素標(biāo)記胰島素抗體 1管 (100l)6. 親和素-辣根過(guò)氧化物酶稀釋液（15ml）7. 親和素-辣根過(guò)氧化物酶溶液（SA-HRP）（10l）8. 底物溶液（TMB）（12ml）9. 終止液（2N HCL）(15ml)10. 封板模 1個(gè)自備材料：1. 酶標(biāo)儀（帶450nm）2. 加樣器，帶10ul、100ul、1000ul的一次性尖頭3. 吸水紙/巾4. 去離子水試驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備1. 1×試驗(yàn)緩沖液： 950ml去離子水中加入濃縮的50ml酶免試驗(yàn)緩沖液即可。本緩沖液用于洗板。濃縮緩沖液使用之前置于37水浴中使其結(jié)晶完全融化。配制好的洗液置于

4、4-8保存。2. 生物素標(biāo)記的人胰島素抗體：用100l生物素化胰島素單抗稀釋液重新溶解凍干粉（注意溶解壁上的粉末，以免丟失粘在管壁或蓋上的抗體凍干粉） 。使用前將本抗體用生物素化胰島素單抗稀釋液按180稀釋。3. 親和素-辣根過(guò)氧化物酶（SA-HRP）：使用之前用親和素-辣根過(guò)氧化物酶稀釋液14000稀釋。人胰島素標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)管號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品體積標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)品濃度原液凍干粉1000l100IU/ml#1500ul原液500l 50IU /ml#2150ul of原液850l 15IU /ml#3100ul of#1900l 5IU /ml#4100ul of#2900l IU /ml#510

5、0ul of#3900l IU /ml檢測(cè)程序1. 將試劑從4冰箱取出，室溫平衡。2. 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，并在微孔條上做好標(biāo)記。3. 在相應(yīng)孔中加入50l標(biāo)準(zhǔn)品從#5到#1（與稀釋順序相反）、血清/血漿標(biāo)本，標(biāo)準(zhǔn)需做雙復(fù)孔。4. 在已加有標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)本的各孔中加入50l稀釋后的生物素化胰島素單抗，混勻，室溫輕搖2小時(shí)。5. 甩去孔中反應(yīng)液，在干凈吸水材料上拍干后加滿洗液，甩掉洗液后拍干，如此重復(fù)5次，也可用洗板機(jī)洗5次。6. 每孔加入100l已稀釋好的親和素-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，置室溫輕搖30分鐘，重復(fù)第5步驟，洗板6次。7. 每孔加100l底物（TMB）溶液，室溫閉光反應(yīng)10-15分鐘。8. 每孔加

6、入100l終止液終止反應(yīng)。9. 用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm讀取OD值。結(jié)果計(jì)算手工作圖采用半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)本的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上的對(duì)應(yīng)濃度即為該標(biāo)本的胰島素含量，計(jì)算機(jī)操作采用4參數(shù)或Cubic Spline方式擬合曲線。注意事項(xiàng)1. 請(qǐng)?jiān)?-8下保存并在有效期內(nèi)使用，不同批號(hào)試劑，請(qǐng)勿混用。2. 使用前，請(qǐng)將所有組分置室溫平衡；用時(shí)請(qǐng)將瓶?jī)?nèi)物混勻。試劑盒啟用后盡量一次用完。未用完的試劑擰緊瓶蓋，板條置封袋內(nèi)， 4保存。生物素標(biāo)記抗體和胰島素標(biāo)準(zhǔn)品重溶后請(qǐng)保存于-20，避免反復(fù)凍融；HRP、反應(yīng)緩沖液、終止液4保存。3. 本試劑盒的測(cè)定范圍是0.550IU/ml。建議采用新鮮血清或血漿標(biāo)本，并根據(jù)具體情況對(duì)樣品進(jìn)行適度稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品需雙復(fù)孔測(cè)定；標(biāo)本若不能及時(shí)測(cè)定，請(qǐng)于-20或-70存放，避免反復(fù)凍融。* 空腹?fàn)顟B(tài)下采集的血樣、不需稀釋，接受糖餐刺激后，除1型糖尿病以外的其他類型血樣可稀釋3-5倍進(jìn)行檢測(cè)。單位：IU/ml。4. 建議用校準(zhǔn)的加樣器加所有成份。5. 以洗板機(jī)洗板時(shí),每孔注液量不應(yīng)少于300ul, 洗板次數(shù)不應(yīng)少