肺與大腸相表里與針刺對其調節(jié)作用的離體研究

1、肺與大腸相表里與針刺對其調節(jié)作用的離體研究                           作者：嚴興科 張廣全 王燕 崔建美 王培育 王宇 楊永清【摘要】  目的揭示“肺與大腸相表里”及針刺對其調節(jié)的作用機制。方法運用離體肌條反應技術研究針刺后哮喘大鼠肺與大腸在體外的反應關系。結果正常大鼠肺勻漿對其離體大腸肌條的收縮作用強

2、于心勻漿的作用，差異有顯著性意義（P<0.05）；哮喘病理時肺勻漿對離體大腸肌條的作用有顯著性差異（P<0.05）；大腸勻漿對氣管肌條的影響無顯著性差異（P>0.05），但表現為收縮趨勢；哮喘針刺后肺勻漿對哮喘大鼠離體大腸肌條的作用強度和模型組相比明顯降低，有顯著性差異（P<0.05）；大腸勻漿對離體氣管肌條的收縮趨勢影響不明顯。結論在生理和病理狀態(tài)下,肺與大腸均存在一定的相互影響。針刺對肺與大腸相關的失調具有一定的調整作用。 【關鍵詞】  肺與大腸相表里； 哮喘； 針刺； 離體臟腑相關是中醫(yī)學整體觀念的核心理論之一，長期指導著中醫(yī)學的臨床實踐。而當前的研究主

3、要著眼于對某一臟或腑的生理、病理的單一研究，導致了臟腑間的割裂，使得中醫(yī)理論和臨床實踐有不相符合的方面。因此有必要對臟腑間的相互關系進行研究，以促進中醫(yī)理論的深入1。針灸的調節(jié)效應具有整體性(多器官性)的特點，為臟器相關研究及其調節(jié)提供了恰當的研究手段；同時，從臟器相關出發(fā)，為在更深入、更廣義的層面上研究針灸的調節(jié)作用提供了更高的理論與技術起點2。本文在我們以往哮喘研究工作的基礎之上，選擇肺與大腸相關為切入點，以建立的體外研究系統(tǒng)為技術手段，即通過離體實驗在體外研究肺與大腸之間的生理關系、病理影響以及針刺對其聯系的調節(jié)作用，以期用生命的語言闡明中醫(yī)肺與大腸表里相關的科學內涵，推動中醫(yī)理論在針灸

4、臨床中的科學應用，同時也為中醫(yī)臟腑相關的物質基礎研究提供新的研究思路。1  儀器與材料1.1   儀器  SMUP-B型生物信號處理系統(tǒng)（上海嘉龍教學儀器廠）；Kent呼吸流量測定系統(tǒng)(Kent Scientific Corporation)、肌張力傳感器（C5P型，上海嘉龍教學儀器廠）；血壓換能器（PT14M1型，上海嘉龍教學儀器廠）；功能學科實驗軟件1.11版（復旦大學醫(yī)學院生理教研室）；離體肌條固定裝置（自制）；電動玻璃勻漿機（DY89-型，寧波新芝科器研究所）；麥氏浴槽（復旦大學醫(yī)學院生理教研室提供）。1.2   動物及分組&

5、#160; 清潔級雄性SD大鼠18只(中科院上海實驗動物中心提供)，體重（130±30）g，分為正常對照組、 哮喘模型組、哮喘模型針刺組，每組6只。2  方法2.1   大鼠哮喘模型的復制及針刺2.1.1    大鼠哮喘模型制備依據3，給大鼠一次性腹腔注射含卵蛋白0.50 g和Al(OH)3 凝膠0.50 g的生理鹽水1.5 ml，兩周后頸外靜脈內注射含卵蛋白(0.25 g/kg)的生理鹽水溶液(1 ml/kg)激發(fā)哮喘發(fā)作。正常對照組大鼠的腹腔注射和頸外靜脈注射均用如上體積的生理鹽水。2.1.2  &#

6、160; 哮喘大鼠針刺治療方法根據針刺治療哮喘的有效方法“三穴五針一火罐”法4，針刺取穴為大椎、風門（雙）、肺俞（雙），穴位定位參見實驗針灸學5。大鼠自造模之日起，隔天針刺1次，每次留針20 min，每隔5 min行針1次(以200次/min捻轉速度捻針20次為行針1次)，共治療7次。2.2    大鼠肺、大腸離體肌條的制作2.2.1   大鼠離體氣管螺旋條制備6各組大鼠自甲狀軟骨下至氣管分叉處剪下全部氣管，放入盛有克-亨氏（Krebs-Henseleit）液6的平皿中，剝離氣管周圍結締組織，氣管內以小玻璃棒作支撐，用小鑷子提起一端，按螺旋形（

7、每23個軟骨為一個螺旋）將氣管剪成寬約3 mm的條狀。2.2.2    離體大腸肌條制備6各組實驗大鼠處死后，迅速取出所需的大腸（距盲腸下端2 cm處剪取結腸條2.5 cm）。去除附著的系膜和脂肪，放入盛有克-亨氏（Krebs-Henseleit）液的平皿中，洗凈內容物，制成條段，供實驗用。2.3  大鼠離體肌條張力檢測6將制備的大鼠離體肌條標本放入盛有克-亨氏液的麥氏浴槽內，下端以較短的無彈性連線固定于自制的大鼠立體定位系統(tǒng)的非彈性彎鉤上，上端以較長的無彈性連線連至張力換能器上。浴槽內溫度恒定在37，持續(xù)供給純氧，初始負荷調節(jié)在500 mg，標本平衡3

8、0 min后，按照勻漿與肌條的對應關系（肺勻漿對大腸肌條，大腸勻漿對氣管肌條）開始給藥或勻漿。張力換能器與SMUP-B型生物信號處理系統(tǒng)相連，經A/D轉換，輸入機，由實時信號處理軟件進行記錄、計算和分析。2.4  勻漿制作方法各組大鼠處死后，迅速分離肺（包含氣管）、心臟、小腸（全部回腸）、大腸（全部結腸），用生理鹽水洗凈血液和內容物，剔除脂肪組織，用濾紙揩凈多余水分，稱重，與生理鹽水按14重量比，用DY89-II型電動玻璃勻漿機在冰水混合物中仔細研磨，制成勻漿。以3 500 r/min離心20 min，保留上清液，-20凍存?zhèn)溆谩?.5   統(tǒng)計分析方法使用SPS

9、S11.0統(tǒng)計軟件，兩組比較用t檢驗；多組比較，方差齊時用單因素方差分析(One-Way ANOVA)；方差不齊時用秩和檢驗（Kruskal-Wallis H）。3  結果3.1  正常大鼠肺、大腸勻漿與離體肌條的相互作用正常大鼠肺勻漿對正常大鼠離體大腸肌條的收縮作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、心勻漿的作用相比，有顯著性差異（P<0.05，見圖1）；正常大鼠大腸勻漿對正常大鼠離體氣管肌條的收縮作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、小腸勻漿的作用比較，無顯著性差異（P>0.05）, 但大腸勻漿對離體氣管肌條的作用呈現舒張趨勢（見圖2）。表明在生理狀態(tài)下，肺勻漿對離體大腸肌條

10、有明顯的收縮作用，提示肺和大腸有某種更為密切的聯系。圖1  正常大鼠肺與正常大鼠離體大腸肌條的相互作用結果（略）圖2  正常大鼠大腸勻漿與正常大鼠離體氣管肌條的相互作用結果（略）3.2  哮喘大鼠肺、大腸勻漿與哮喘大鼠離體肌條的相互作用肺勻漿對離體大腸肌條的收縮作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、心勻漿的作用相比，有顯著性差異（P<0.05，見圖3）；大腸勻漿對離體氣管肌條的作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、小腸勻漿的作用相比，無顯著性差異（P>0.05），但大腸勻漿對離體氣管肌條的作用與正常組的舒張趨勢不同，呈現收縮趨勢（見圖4）。1   

11、      圖3  哮喘和哮喘針刺組大鼠肺、心勻漿與哮喘大鼠離體大腸肌條的作用結果（略）圖4  哮喘針刺組大鼠大腸勻漿與哮喘大鼠離體氣管肌條的作用結果（略）3.3   哮喘大鼠針刺后肺、大腸勻漿與離體肌條的相互作用針刺組肺勻漿對離體大腸肌條的收縮作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、心勻漿的作用相比，無顯著性差異（P>0.05），見圖5；針刺組大腸勻漿對離體氣管肌條的作用和生理鹽水、牛血清白蛋白、小腸勻漿的作用相比，無顯著性差異（P>0.05），見圖6。圖5  哮喘針刺組大鼠肺勻漿

12、與離體哮喘針刺組大鼠大腸肌條作用結果（略）圖6  哮喘針刺組大鼠大腸勻漿與哮喘針刺組大鼠離體氣管肌條作用結果（略）3.4  哮喘大鼠針刺組肺、大腸勻漿和哮喘大鼠肺、大腸勻漿對哮喘大鼠離體肌條的作用針刺組肺勻漿對哮喘組離體大腸肌條的收縮作用較哮喘組肺勻漿的作用減弱，有顯著性差異（P<0.05），見圖3。大腸勻漿對離體氣管肌條的作用和小腸勻漿的作用相比，無顯著性差異（P>0.05），見圖4。4  討論    我們通過研究表明，肺與大腸在生理、病理中的密切聯系具有生物醫(yī)學依據7，8。動物進化研究表明氣管、支氣管起源于原腸的一個皺

13、壁，人類胚胎學也證明消化管、消化腺、呼吸道和肺上皮組織均來源于原始消化管的內胚層，這種發(fā)生、發(fā)育學的共同起源，為肺與大腸功能上的內在聯系奠定了客觀物質基礎9，10。肺表面活性物質在肺和腸道的共同存在和相似作用為肺與大腸的生理聯系提供了又一佐證，且研究證明，腸道表面活性物質較肺表面活性物質有更古老的起源，與二者的進化關系相一致11，12。腸道和支氣管相關淋巴組織(gut-associated lymphoid tissue, bronchus-associated lymphoid tissue)是構成人體以SIgA為主要抗體的公共黏膜免疫系統(tǒng)的主要器官，當抗原刺激其中之一時，可同時在另一淋巴組

14、織產生相同的特異性SIgA免疫反應，為肺與大腸相關提供了免疫學證據13。諸多研究表明，大腸或肺的損傷，均可造成另一相關臟器的病理傷害14，15。    針灸哮喘，不僅具有良好的近期療效，也有一定的遠期效果4，是目前我國防治哮喘的常用方法之一16。動物實驗表明，該針刺方法不僅可降低普通大鼠哮喘模型的氣道阻力17，同樣可降低腎上腺切除大鼠哮喘模型的氣道阻力，同時發(fā)現哮喘大鼠針刺后血清也具有類似的抗哮喘作用 18。因此，研究針刺后器官、組織中活性成分的改變將可能對針灸效應及作用的解釋起到積極意義。    本文在上述臨床與動物實驗的基礎上，對

15、肺與大腸離體關系及針刺對其的調節(jié)作用進行了研究。我們采用離體實驗研究方法，將經過造模和針刺處理后的器官勻漿組分加入到離體器官肌條反應體系中，觀察肌條張力的舒縮變化情況，以期從體外肺腸的直接相互作用來尋找肺與大腸的可能聯系和作用特點。結果表明，在生理狀態(tài)下，肺內可能有促進離體大腸肌條收縮的活性成分，這種收縮作用較心勻漿更強，這預示著肺和大腸有某種更為密切的聯系，和中醫(yī)學“肺與大腸相表里”的理論存在一致性。哮喘模型針刺組肺勻漿對離體大腸肌條的收縮作用較哮喘組肺勻漿的作用明顯降低，表明針刺對哮喘有效，對肺腸相關也發(fā)揮了調節(jié)作用。    我們在離體實驗方法建立時，氣管肌條

16、、大腸肌條均對乙酰膽堿呈現劑量依賴的收縮作用，表明本實驗體系的建立是成功的。氣管肌條對乙酰膽堿的反應性弱于大腸肌條，氣管肌條產生收縮反應的所需乙酰膽堿濃度明顯高于大腸肌條的反應濃度，顯示大腸肌條對乙酰膽堿反應的敏感性高于氣管肌條。本研究中，正常組大腸勻漿對離體氣管肌條均表現為舒張趨勢，針刺后這種趨勢減弱；哮喘模型組大腸勻漿對離體氣管肌條表現為收縮趨勢，針刺后趨勢變化不顯?？傮w上上述作用趨勢均未表現出統(tǒng)計學意義，其原因可能在于實驗勻漿中活性成分的濃度達不到氣管肌條的反應閾值；其次可能在于氣管肌條剪切后，氣管的完整結構被破壞，加之離體氣管肌條缺乏像離體大腸肌條那樣的自律性神經活動，使舒縮變化不顯著

17、。這需要在今后的研究中深入探索?！疚墨I】  1 王洪所，許有玲. 面向21世紀：中醫(yī)基礎理論研究的現狀和未來M. 北京：軍事醫(yī)學出版社，1999：269.2 陳漢平. 中醫(yī)藥應用與研究大系-針灸分冊M. 上海：上海中醫(yī)藥大學出版社，1995：10.3 崔龍?zhí)O，楊永清，馬淑蘭，等. 過敏性哮喘大鼠模型的制備J.上海實驗動物科學，2000，20(2)：69. 4 楊永清，陳漢平，王安琪，等. 針灸治療哮喘174例療效分析J. 上海針灸雜志，1994，13(4):153.5 林文注.實驗針灸學，第一版M.上海：上?？萍汲霭嫔?，1994，287.6 徐叔云. 藥實驗方法M. 北京：人民衛(wèi)生出

18、版社，1991：1135，1171，1490.7 嚴興科，王 宇，楊永清，等. 肺與大腸相表里新解J 上海中醫(yī)藥大學學報，2003，17（1）：6.8 嚴興科，張廣全，楊永清，等. 肺與大腸相表里理論與研究進展J. 陜西中醫(yī)，2003，24（4）：378.9 李永林. 比較生理學M. 北京：高等出版社，1984.10 鄭思競. 肺的胚胎學A. 崔 祥，王鳴岐，薩藤三，等. 實用肺臟病學M.上海：上海科技出版社，1991：1.11 Bourbon JR, Chailley-Heu B. Surfactant proteins in the digestive tract, mesentery, and other organs: evolutionary significanceJ. Comp Biochem Physiol A 2001，129(1):151.12 Sullivan LC, Daniels CB, Phillips ID, et al. Conservatio