中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白與IgA腎病早期診斷及病理分級的關(guān)系

1、·論著 ·中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白與 IgA 腎病早期診斷及 病理分級的關(guān)系張 虹 , 童俊容 , 王 寅 , 羅正茂 , 何 鳳 , 黃遠航 , 劉 宏 , 王妍春 , 張建林 , 曾健英基金項目 :國家自然科學(xué)基金 (81170765 ; 廣東省科技計劃項 目 (2011B061200034 ; 廣東省科技計劃項目 (2011B061300020作者單位 :510010廣東省廣州市 , 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院腎內(nèi)科 通訊作者 :童俊容 , 510010廣東省廣州市 , 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院 腎內(nèi)科 ; E mail :tongjr63163. com【 摘要 】目的探討

2、IgA 腎病患者血清及尿液中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白 (NGAL 與 IgA 腎病早期診斷及病理分級的關(guān)系 。 方法選擇 IgA 腎病患者 89例 , 根據(jù) Lee 氏分級 Lee 級 42例 (A 組 , Lee 級 47例(B 組 ; 對照組 33例 。 應(yīng)用 ELISA 法檢測 3組受檢者的血清及尿液中的 NGAL 水平并比較不同病理分級患者在系膜增 殖 、 新月體 、 腎小球硬化方面的差異 , 分析血清及尿液的 NGAL 水平與系膜增殖評分的相關(guān)關(guān)系 。 結(jié)果IgA 腎病患者血清及尿液的 NGAL 水平均較對照組升高 (P 0. 05 ; Lee 氏 級患者的系膜增殖程度 、 腎小球

3、硬化程度 、 新月 體數(shù)目與 Lee 氏 級患者比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0. 05 ; 血清及尿液的 NGAL 水平均與系膜增殖積分呈正 相關(guān) (血清 NGAL :r =0. 543, P =0. 016; 尿液 NGAL :r =0. 761, P =0. 007 。 結(jié)論NGAL 可能在 IgA 腎病的病理生理學(xué)方面起重要作用 , 尿液 NGAL 可能成為判斷 IgA 腎病患者早期腎損傷及預(yù)后的有效指標(biāo) ?！?關(guān)鍵詞 】中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白 ; 腎小球腎炎 , IgA ; 早期診斷【 中圖分類號 】 R 692. 6【 文獻標(biāo)識碼 】 A【 文章編號 】 10079572(2

4、012 03086803Neutrophil Gelatinase associated Lipocalin as An Indicator of Early Diagnosis and Pathological Grading of IgA Ne-phropathyZHANG Hong , TONG Jun rong , WANG Yin , et alDepartment of Nephrology , Guangzhou Army General Hospi-tal , Guangzhou 510010, China【 Abstract 】ObjectiveTo explore the

5、correlation between neutrophil gelatinase associated lipocalin (NGAL and theearly diagnosis and the pathological grading of IgA nephropathy (IgAN MethodsWe selected 89patients with IgA nephropa-thy and , according to Lee's grading method , divided them into Lee group A (n =42 and Lee group B (n

6、=47 Meanwhile , 30healthy subjects were enrolled as the control groupNGAL in serum and urine was measured using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA to compare the differences of mesangial proliferation , crescent formation , and glomerular sclerosis in patients with different pathological grade

7、s ; meanwhile , the correlation of sNGAL and uNGAL with the mesangial pro-liferation score was exploreResultsBoth sNGAL and uNGAL levels were significantly higher in IgAN patients than those incontrol group (P 0. 05 The differences in mesangial proliferation , crescent formation , and glomerular scl

8、erosis were statisti-cally significant between Lee patients and Lee patients (P 0. 05 Both sNGAL level and uNGAL level were positively correlated with mesangial proliferation score (sNGAL :r =0. 543, P =0. 016; uNGAL ; r =0. 761, P =0. 007 ConclusionNGAL may play an important role in the pathophysio

9、logy of IgANuNGAL may act as an effective biomarker in theearly diagnosis of kidney damage and prognosis of IgAN patients【 Key words 】Neutrophil gelatinase associated lipocalin ; Glomerulonephritis , IgA ; Early diagnosisIgA 腎病 (IgA nephropathy , IgAN 是我國常見的原發(fā)性 腎小球疾病 , 占原發(fā)性腎小球疾病的 40% 47%, 約 1/3的 患者在

10、發(fā)病 10 20年后進展為終末期腎病 (end stage renal disease , ESRD 1。 目前 , 臨床上用于檢測腎臟早期損害的指 標(biāo)有 1微球蛋白 (1MG 、 N 乙酰 D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG 和胱抑素 C (Cystatin C , Cys C 等 , 但用于早 期診斷 IgAN 的指標(biāo)其敏感度或特異度不佳2。 因此 , 積極尋找能早期有效診斷 IgAN 的生物學(xué)指標(biāo) , 探索延緩 IgAN 進展 的方法具有十分重要的臨床意義 。 中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂 蛋白 (neutrophil gelatinase associated lipocalin , NGAL

11、是 li-pocalin 家族的新成員 , 是在人中性粒細胞中發(fā)現(xiàn)的一種小分 子分泌性蛋白3。 研究發(fā)現(xiàn)腎臟近曲小管細胞在損傷后可高表達 NGAL , 提示 NGAL 可用于診斷急性腎損傷 4, 但有關(guān)IgAN 患者血 、 尿中 NGAL 水平變化及 NGAL 水平與病理分級 的關(guān)系少見報道 。 本研究測定了 89例 IgAN 患者的血清 、 尿液 中 NGAL 水平 , 并分析其與疾病病理分級的關(guān)系 。·868·1資料與方法 1. 1一般資料選取 2007 2009年在我科經(jīng)光鏡及免疫病理確診的原發(fā)性 IgAN 患者 89例為研究對象 , 其中男 36例 , 女 53例

12、, 年齡 18 68歲 , 平均 (30 11 歲 。 入選患者均排除 過敏性紫癜 、 肝硬化 、 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 、 乙肝病毒感染 、 腫瘤 等繼發(fā)性 IgAN 。 IgAN 患者的腎組織病變在光鏡下按 Lee 分級 , 其中 級 42例 (A 組 , 級 47例 (B 組 。 同期 選取其他科室的非腎臟病患者 33例作為對照組 , 男 14例 , 女 19例 , 年齡 20 60歲 , 平均 (32 10 歲 。 對照組患者無腎 小球腎炎 、 糖尿病 、 良性腎動脈硬化 、 系統(tǒng)性疾病腎臟損害 等 。 1. 2方法所有受檢者于清晨抽取靜脈血 5ml , 1000r /min離心 10min

13、 , 取上清液存于 80 冰箱保存 。 同時收集晨起 清潔中段尿 10ml , 置無致熱源及內(nèi)毒素的試管中 , 3000r /min 離心 5min , 取上清液置于凍存管中 , 80 冰箱保存 , 避免反復(fù)凍融 。 血清及尿液的 NGAL 水平用 ELISA 方法檢測 (ELISA 試劑盒購自美國 RD 公司 , 實驗方法按試劑盒說明書 操作 。 根據(jù)所得標(biāo)本的吸光度值 , 計算各標(biāo)本相應(yīng)的 NGAL 水 平 。 同期檢測患者血肌酐 、 尿素氮 、 血清清蛋白和 24h 尿蛋 白等指標(biāo) , 此 4項指標(biāo)均由本院檢驗科檢測 。 1. 3腎小球新月體數(shù)目 、 腎小球系膜增殖和腎小球硬化程度的判定

14、由病理科醫(yī)師觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)改變 , 系膜增殖0 4分 , 新月體 0 4分 , 腎小球硬化 0 4分 , 比較系膜增 殖積分與血 、 尿 NGAL 相關(guān)性 。 腎小球新月體數(shù)目計算 :在光 學(xué)顯微鏡計算機圖像分析系統(tǒng)屏幕上 , 計算出每例切片中出現(xiàn) 的新月體數(shù)目與全部腎小球數(shù)目的比值 。 腎小球系膜增殖和腎 小球硬化程度判定 :在光學(xué)顯微鏡計算機圖像分析系統(tǒng)屏幕 上 , 計算每例正切腎小球中系膜增殖或腎小球硬化面積占腎小球總面積的百分比 , 再按照 Okada 等 5介紹的方法進行評分 ,病變累及腎小球面積 30%者為 1分 , 30% 60%者為 2分 , 60%者為 3分 ; 取其平

15、均值作為每例患者腎小球病變的積 分 。 1. 4統(tǒng)計學(xué)方法采用 SPSS 13. 0軟件進行統(tǒng)計分析 。 所有計量資料以 ( s 表示 , 兩組間差異比較采用兩獨立樣本 t 檢驗 , 多組間差異比較采用 One way ANOVA , 多個變量間的 兩兩比較采用 LSD 檢驗 。 血清 NGAL 水平與系膜增殖的相關(guān) 分析采用 Pearson 直線相關(guān)分析及線性回歸分析 , P 0. 05為 差異有統(tǒng)計學(xué)意義 。 2結(jié)果2. 1對照組和 IgAN 組一般資料IgAN 患者中 B 組的收縮壓 、舒張壓 、 尿素氮 、 血肌酐及 24h 尿蛋白均高于對照組和 A 組 , 差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0

16、. 05 ; IgAN 患者中 A 組的血肌酐 、 24h 尿蛋白 均 高 于 正 常 對 照 組 , 差 異 有 統(tǒng) 計 學(xué) 意 義 (P 0. 05 。 而 3組受檢者的年齡 、 性別構(gòu)成及血清清蛋白水平間 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0. 05, 見表 1 。 2. 2正常對照組與 IgAN 組患者的血清及尿液 NGAL 的比較 A 組患者的血清 NGAL 及尿液 NGAL 水平均高于對照組 , 差異 有統(tǒng)計 學(xué) 意 義 (P 0. 01 , B 組 患 者 的 血 清 NGAL 及 尿 液 NGAL 水平均高于對照組和 A 組 , 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0. 01, 見表 2、 圖

17、1 。 2. 3不同病理分級的 IgAN 患者病理資料比較Lee 氏分級 級患者的系膜增殖程度 、 腎小球硬化程度 、 新月體數(shù)目與 級患者比較 , 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0. 05, 見表 3 。 2. 4IgAN 患者血清 NGAL 及尿液 NGAL 水平與系膜增殖積分的相關(guān)性分析血清 NGAL 水平與系膜增殖呈正相關(guān) (r =0. 543, P =0. 016 , 回歸方程 :Y =21. 628X +60. 366。 尿液 NGAL 水平與系膜增殖亦呈正相關(guān) (r =0. 761, P =0. 007 , 回歸方程 :Y =33. 647X +86. 362, 尿液 NGAL 較血

18、清 NGAL 與系膜增殖相關(guān)系數(shù)高 (見圖 2 。表 2對照組與 IgAN 組的血清及尿液 NGAL 水平比較 ( s Table 2Comparison of serum and urine NGAL among the three groups 組別 例數(shù)血清 NGAL (ng/ml 范圍 平均值尿液 NGAL (ng/ml范圍 平均值對照組 3316. 46 72. 2541. 62 4. 968. 44 15. 1210. 30 1. 75A 組 4242. 84 134. 6276. 79 9. 57 28. 18 64. 5947. 56 6. 56 B 組 4782. 74 23

19、5. 66158. 69 19. 54 75. 32 126. 48102. 45 10. 82F 值 3. 272. 58P 值0. 010. 01注 :與對照組比較 , P 0. 01; 與 A 組比較 , P 0. 01表 3不同病理分級的 IgAN 患者病理資料比較 ( s Table 3Comparison of pathological data of IgAN patients組別 (組織學(xué)分級 例數(shù) 系膜增殖 (分 新月體 (%腎小球硬化 A 組 ( 級 421. 17 0. 430. 04 0. 020. 03 0. 02B 組 ( 級 472. 27 0. 680. 21

20、0. 040. 33 0. 12t 值 6. 7532. 5692. 086P 值 0. 050. 010. 01表 1對照組和 IgAN 組的一般資料Table 1Main parameters of control subjects and IgAN patients組別 例數(shù) 男 /女 年齡 (歲 收縮壓 (mm Hg 舒張壓 (mm Hg 尿素氮 (mmol /L 血肌酐 (mol /L 血清清蛋白 (g /L 24h 尿蛋白 (g /24h 對照組 3314/1932 10106 1472 1412. 04 2. 1172. 52 16. 0242. 25 9. 480. 06 0.

21、 02A 組 4217/2529 11110 1276 1612. 50 2. 3198. 56 18. 3841. 81 7. 691. 18 0. 53 B 組 4719/2830 12136 21 83 18 14. 58 2. 49 110. 46 23. 6639. 79 8. 361. 46 0. 58F 值 163. 25128. 348. 267. 72102. 896. 86115. 686. 21P 值0. 050. 050. 050. 050. 050. 050. 050. 05注 :與對照組比較 , P 0. 05; 與 A 組比較 , P 0. 05·968

22、·注 :與對照組比較 , *P 0. 01; 與 A 組比較 , #P 0. 01圖 1對照組和 IgAN 組的血清 NGAL 及尿液 NGAL 水平Figure 1sNGAL and uNGAL level in control subjects and IgAN patients圖 2血清及尿液的 NGAL 水平與系膜增殖積分的相關(guān)性分析 Figure 2Correlation between sNGAL , uNGAL levels and degree of me-sangial proliferation in IgAN patients3討論IgAN 患者存在持續(xù)蛋白尿

23、、 血壓逐漸升高 、 腎功能下降 , 在病理組織上 , 腎小管間質(zhì)病變廣泛存在 , 小管間質(zhì)損害與腎 小球損害 相 平 行 , 且 小 管 間 質(zhì) 損 害 常 是 疾 病 進 展 的 主 要 標(biāo) 志 6, 是決定 IgAN 預(yù)后不良的關(guān)鍵因素之一 。NGAL 由一條多肽鏈構(gòu)成 , 分子量為 25kD , 主要表達在 近曲腎小管 , 腎小管上皮細胞受到損傷性刺激后會大量分泌 NGAL 7。 目前 的 研 究 發(fā) 現(xiàn) NGAL 是 反 映 急 性 腎 損 傷 的 指 標(biāo) 3, 我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病患者血清 NGAL 水平 與腎小球濾過率 (GFR 存在顯著的負相關(guān) , 可反映腎損害 的嚴(yán)

24、重程度 , 并預(yù)示殘留的 GFR 8。 本研究結(jié)果表明 , 病理 Lee 氏分級 級患者的收縮壓 、 舒張壓 、 尿素氮 、 血肌酐 及 24h 尿 蛋 白 均 高 于 對 照 者 和 Lee 氏 分 級 級 患 者 。 IgAN 病理 Lee 氏分級 級患者血清及尿液的 NGAL 水平 較對照者 明 顯 升 高 , 提 示 血 清 NGAL 和 尿 液 NGAL 可 能 是 IgAN 早期腎損傷的生物學(xué)指標(biāo) , 并且病理 Lee 氏分級 級患者血清及尿液的 NGAL 水平較對照者和 級患者均明 顯升高 , 表明血清 NGAL 和尿液 NGAL 可能與 IgAN 的腎臟病 理損害有關(guān) , 能在

25、一定程度上反映 IgAN 的病理進展 。本研究還發(fā)現(xiàn) , IgAN 患者血清及尿液的 NGAL 水平與系 膜增殖積分均呈正相關(guān)關(guān)系 , 且尿液 NGAL 水平與系膜增殖積 分的相關(guān)關(guān)系更為密切 。 本研究結(jié)果表明 , IgAN 患者血清及 尿液的 NGAL 水平反映了腎臟病理損害的嚴(yán)重程度 , 尤其是尿 液 NGAL 可較好地預(yù)示 IgAN 的病理進展程度 。 與目前報道的 IgAN 中腎小管間質(zhì)損傷的其他生物學(xué)標(biāo)志如 NAG 與 IgAN 病 理呈正相關(guān)的結(jié)果相類似 9。 尿液 NGAL 與尿液 NAG 在診斷 IgAN 方面的敏感度和特異度如何 , 有待進一步研究 。研究發(fā)現(xiàn) NGAL 具

26、有鐵轉(zhuǎn)運蛋白的功能 , 參與了損傷后腎 小管上皮細胞內(nèi)的鐵轉(zhuǎn)運和誘導(dǎo)血紅素加氧酶的生成 , 從而有 利于損傷小管的再生 , 為腎小管損傷的保護提供了重要的思 路 10。 從這個角度看 , NGAL 已不僅是臨床腎病的一個重要 的生物學(xué)指標(biāo) , 還可能在 IgAN 腎損害過程中腎小管上皮細胞 適應(yīng)性損傷的病理生理學(xué)方面起一定作用 。 因此 , 隨著 NGAL 水平的升高 , 表明腎小管上皮處于亞臨床損害狀態(tài) , 是腎小球 損傷的前奏 , 血清及尿液的 NGAL 水平檢測可用于 IgAN 的早 期診斷和療效評估 , 值得臨床進一步分析評價 。參考文獻1Fofi C , Pecci G , Gall

27、iani M , et alIgA nephropathy :multivariate statistical analysis aimed at predicting outcome J J Nephrol , 2001, 14(4 :2802852Kawasaki YThe pathogenesis and treatment of IgA nephropathy J Fukushima J Med Sci , 2008, 54(2 :43603Bolignano D , Donato V , Coppolino G , et alNeutrophil gelatinase associated lipocalin (NGAL as a marker of kidney damage J Am J Kidney Dis , 2008, 52(3 :5956054Mori K , Nakao KNeutrophil gelatinase associated lipocalin as the re-al time indicator of active kidney damage J Kidney Int , 2007, 71 (2 :9679705Okada H , Suzuki H