溶血對(duì)乙型肝炎表面抗原檢測(cè)的影響

1、溶血對(duì)乙型肝炎表面抗原檢測(cè)的影響    摘要：溶血對(duì)乙型肝炎表面抗原測(cè)定的影響。方法：采用ELISA酶免疫對(duì)健康人和乙肝患者進(jìn)行檢測(cè)比較。結(jié)果：溶血標(biāo)本采用ELISA雙位點(diǎn)夾心一步法易產(chǎn)生假陽性。結(jié)論：溶血影響乙型肝炎表面抗原的測(cè)定結(jié)果， 溶血標(biāo)本應(yīng)采用二步法進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。    關(guān)鍵詞：溶血；乙型肝炎表面抗原；ELISA     乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)是診斷乙肝的主要指標(biāo)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展酶聯(lián)免疫法因其簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，不需要特殊設(shè)備的特點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用

2、1-2。由于各種原因造成的溶血，非特異性物質(zhì)對(duì)試驗(yàn)造成影響，致使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽性，現(xiàn)報(bào)告如下。1 資料與方法 1.1  一般資料：14例乙肝患者檢查，86例健康人體檢。 1.2  試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法，ELISA），上海科華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。  1.3  方法 1.3.1 溶血血清制備，將待測(cè)血清放置于低溫冰箱（-40）內(nèi)凍20 min后，取出融化，以3 000 r/min離心10 min，分離溶血血清。溶血和不溶血各1份。從冰箱取出試劑盒室溫放置30 min，微孔反應(yīng)條中每孔加入待測(cè)標(biāo)本50L，設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔，每孔

3、加入陰性對(duì)照（或陽性對(duì)照) 各1滴,并設(shè)空白對(duì)照 1孔。然后每孔加入酶結(jié)合物1滴（空白對(duì)照除外），充分混勻，封板，置37避光孵育30 min，棄孔內(nèi)液體，洗板5次后拍干。每孔加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，置37避光孵育15 min，目測(cè)比色，肉眼判斷結(jié)果：顯藍(lán)色為陽，無色為陰性。1.3.2 最后結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行分析。2 結(jié)果2.1  14例溶血和不溶血乙型肝炎陽性結(jié)果完全一致。2 .2  68例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陰性結(jié)果完全一致。2.3  18例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原結(jié)果不一致，出現(xiàn)假陽性。經(jīng)二步法：從冰箱取出試劑盒室

4、溫放置30 min。微孔的反映條件中各加入50 L待測(cè)液，并分陰陽性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照或陽性對(duì)照，各1滴，并設(shè)空白對(duì)照1孔，37避光孵育30 min，棄空內(nèi)液體、洗版5次拍干，每孔加酶結(jié)合物1滴（空白組除外），充分混勻，封板，然后在 37避光孵育30 min，棄空內(nèi)液體，洗版5次，拍干，加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，然后在37避光孵育15 min，目測(cè)比色并判斷結(jié)果：HbsAg顯藍(lán)色為陽性，無色為陰性，結(jié)果均為陰性。結(jié)果經(jīng)SPSS 13.0分析，見表1。表1  血液標(biāo)本ELISA檢測(cè)結(jié)果分析檢測(cè)結(jié)果乙肝患者（例）健康人（人）溶血不溶血溶血不溶血陽性（）1414180

5、陰性（）006886F值-P值-00002.4  溶血對(duì)陰性標(biāo)本檢測(cè)易出現(xiàn)假陽性，陽性標(biāo)本無影響。3 討論 3.1  引起溶血的常見原因及對(duì)策3.1.1 采血時(shí)發(fā)生的溶血：注射器和容器不干燥，不清潔；注射器與針頭連接不好；壓脈帶捆扎時(shí)間過長(zhǎng)，淤血過久3；抽血消毒時(shí)酒精未干就進(jìn)行抽血；穿刺不順利損傷組織過多；抽血速度過快針尖在靜脈中探來探去；血液注入容器中時(shí)未取下針頭，或用力推出產(chǎn)生大量氣泡；在有血腫的地方采集血樣；滲透壓的改變；為了盡快分離血清，用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等；用干燥管采血等。3.1.2 患者自身的因素：患者自身有溶血性疾??；由于患者嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因

6、導(dǎo)致穿刺困難造成的溶血。3.2  溶血標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)：乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性分析原因，可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），能與聚乙烯孔內(nèi)預(yù)包被的抗原或抗體結(jié)合，在洗滌過程難以完全洗脫；也可能是谷胱甘肽等過氧化物酶的作用，谷胱甘肽廣泛存在于人體組織和細(xì)胞中，當(dāng)溶血時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶進(jìn)入血漿，并大量吸附于細(xì)胞碎片及纖維蛋白原上，從而增加加樣后微孔板洗滌的難度，同辣根過氧化物酶作用相似，其可使過氧化氫釋放出原生態(tài)氧，從而催化底物甲聯(lián)苯胺生成可溶性物質(zhì)顯色，使乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性4。由于一步法洗滌步驟往往難以完全洗脫，殘

7、留的過氧化物酶催化底物四甲基聯(lián)苯胺顯藍(lán)色，使乙肝標(biāo)志物HBsAg產(chǎn)生假陽性。二步法首先將血清洗掉，殘留的過氧化物酶含量極微。溫育過程中不會(huì)與酶結(jié)合物所含抗原與抗體結(jié)合，再經(jīng)第二次洗滌，大大降低了殘留的可能性，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。  3.3  對(duì)待結(jié)果要嚴(yán)謹(jǐn)：檢驗(yàn)醫(yī)師在對(duì)“健康者”的檢測(cè)時(shí)，要慎重，出現(xiàn)假陽性后，建議采用二步法進(jìn)一步檢測(cè)，而對(duì)于新兵體檢等要求嚴(yán)格的體檢來說，直接采用二步法檢測(cè)；對(duì)于乙肝表面抗原陽性的溶血標(biāo)本，其結(jié)果一定要慎重，務(wù)必做到準(zhǔn)確無誤，否則會(huì)給患者帶來極大的痛苦，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失和精神壓力。 參考文獻(xiàn)：1 孫正偉,薛瑞賢,王  鍵.酶聯(lián)免疫法一步法檢測(cè)乙肝表面抗原前帶現(xiàn)象的初步探討J.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2003,2(1):25.  2 張小潔,劉建芝.真空采血標(biāo)本溶血原因分析及預(yù)防措施J.護(hù)士進(jìn)修雜志,2001,16(