P16和nm23-H1在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義

1、P16和nm23-H1在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義         【摘要】  目的 探討新型抑癌基因P16和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的相關(guān)性。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)50例乳腺癌手術(shù)標(biāo)本和25例乳腺纖維腺瘤標(biāo)本（陰性對(duì)照組）中P16和nm23-H1的表達(dá)，通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察免疫組織化學(xué)表達(dá)情況并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 P16的陽(yáng)性表達(dá)率在乳腺癌組明顯低于對(duì)照組（P0.05）。nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率在陽(yáng)性組和對(duì)照組間比較無(wú)顯著性差異（P0.0

2、5）。在乳腺癌中，nm23-H1的陽(yáng)性率在各臨床分期組間比較有顯著性差異(P0.01)；P16和nm23-H1的陽(yáng)性率在各組織學(xué)分級(jí)組間比較有顯著性差異(P0.01)； nm23-H1和P16的陽(yáng)性表達(dá)率在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間比較有顯著性差異（P0.05）。結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)乳腺癌組織中P16和nm23-H1的表達(dá)狀況有助于判斷預(yù)后。 【關(guān)鍵詞】  乳腺癌 P16 nm23-H1 免疫組織化學(xué)   EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF  P16 AND   Abstract  Objective 

3、; To study the expression of growth suppressor gene P16 and nm23-H1 and their correlation with clinical pathological factors in breast cancer. Methods S-P method of Immunohistochemistry was applied to detect the expressions of P16 and nm23-H1 in 25 cases of breast fibroadenoma and in 50 cases of bre

4、ast cancer. The staining result was observed by optical microscope. Results The positive expression rate of P16 (48%) in breast cancer was statistically lower than that in fibroadenoma(88%) . while nm23-H1 (58%) was also lower than that in fibroadenoma(72%) and showed no significance (P0.05). The po

5、sitive expression rate of P16 and nm23-H1 were significantly associated with histological grading (P0.01).The positive expression rate of P16 and nm23-H1 were significantly associated between with or without lymph node metastasis（P0.05）.The expression of nm23-H1 was significantly associated with TNM

6、 stage(P0.01). Conclusion It could help to judge patientsprognosis by jointly detecting the expression rate of P16 and nm23-H1 in breast cancer.   Key words  Carcinoma of breast  P16  nm23-H1  Immunohistochemistry   本文應(yīng)用免疫組化方法對(duì)乳腺癌進(jìn)行P16和nm23-H1表達(dá)的檢測(cè)，并分析二者的表達(dá)與乳腺

7、癌臨床病理學(xué)特征及其與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。   1  資料與方法   1.1  研究對(duì)象   隨機(jī)選取20002001年在青海大學(xué)附屬醫(yī)院病理科保存的手術(shù)切除后的乳腺癌病理標(biāo)本50例?；颊吣挲g2565歲，中位年齡45歲。標(biāo)本中髓樣癌5例、小葉原位癌4例、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌41例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的24例。乳腺癌全部病例術(shù)前均未接受放療或化療，術(shù)后進(jìn)行常規(guī)化療。隨機(jī)選取20002001年青海大學(xué)附屬醫(yī)院病理科保存的乳腺纖維腺瘤病理標(biāo)本25例作為病理對(duì)照組,患者年齡1744歲，中位年齡30歲。   1.2

8、  方法   免疫組化技術(shù)采用鏈霉素-生物素免疫組化法即SP法，將標(biāo)本做常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)切片（4m）,脫蠟，水化，用PBS沖洗（10min×3times）；滴加一抗（P16抗體和nm23-H1抗體），4孵育過(guò)夜，PBS沖洗（10min×3 times）；滴加二抗，37孵育30 min，PBS沖洗（10min×3 times）；DAB顯色，37孵育30 min，PBS沖洗（10min×3 times）；自來(lái)水沖洗，蘇木精淺染，自來(lái)水沖洗反藍(lán)，梯度酒精脫水，透明化，中性樹(shù)膠封固。用PBS代替抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性染色切片作為

9、陽(yáng)性對(duì)照。   1.3  結(jié)果判定方法 1，2   P16陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿中出現(xiàn)的棕黃色顆粒。整個(gè)切片未見(jiàn)細(xì)胞染色或著色細(xì)胞數(shù)10記為陰性()；著色細(xì)胞數(shù)10記為陽(yáng)性（+）。      nm23-H1陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿著棕黃色，整個(gè)切片未見(jiàn)細(xì)胞染色或著色細(xì)胞數(shù)在20%以下為記為陰性()，著色細(xì)胞數(shù)20%記為陽(yáng)性（+）。   1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   所有數(shù)值采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行2檢驗(yàn)。P0.05視為具有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 &

10、#160;          2  結(jié)果   2.1  乳腺癌和乳腺纖維腺瘤中P16和nm23-H1的表達(dá)情況（見(jiàn)表1）   表1P16和nm23-H1在乳腺癌和乳腺纖維腺瘤中的表達(dá)表2乳腺癌中P16和nm23-H1的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系   P16陽(yáng)性表達(dá)率在患者的不同發(fā)病年齡、腫瘤大小、病理類(lèi)型各組間，臨床分期各組間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。組織學(xué)分級(jí)越高，P16的陽(yáng)性率越低，各組間比較有顯著性差異(P0. 01)。無(wú)腋窩

11、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P16陽(yáng)性率明顯高于有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。   nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率在患者的不同發(fā)病年齡、腫瘤大小病理類(lèi)型各組間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。臨床分期和組織學(xué)分級(jí)越高，nm23-H1的陽(yáng)性率越低，各組間比較有顯著差異(P0.01)。無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P16陽(yáng)性率明顯高于有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。   3  討論   3.1  nm23-H1的表達(dá)及其意義   人類(lèi)nm23基因中存在兩個(gè)亞型，即nm23-H1H1和nm23-H2，其氨基酸序列具有88的同源性，編碼的蛋白產(chǎn)物為核苷二磷酸

12、激酶(nueleosidediphosphatekinase，NDPK)。該酶主要存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上，是一種能催化多種反應(yīng)并具有復(fù)雜生物學(xué)功能的酶。主要通過(guò)影響微管裝配、信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)譯調(diào)節(jié)及細(xì)胞黏附而維持細(xì)胞的正常分裂狀態(tài)，從而抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移3。nm23-H1低表達(dá)可引起系列氨基酸編碼產(chǎn)物減少，導(dǎo)致系列信號(hào)傳導(dǎo)異常，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。劉紅等4認(rèn)為nm23-H1基因表達(dá)與乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著負(fù)相關(guān)，可作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)測(cè)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。本研究中nm23-H1基因在50例乳腺癌病人中的表達(dá)率與病人年齡、腫瘤大小及病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，但與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

13、移情況有關(guān)。nm23-H1基因表達(dá)率研究有助于從乳腺癌患者中篩選出高?；颊哌M(jìn)行有針對(duì)性的治療。就本研究而言，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組低，說(shuō)明該基因在惡性腫瘤發(fā)展中有丟失現(xiàn)象。nm23-H1表達(dá)率降低，則提示轉(zhuǎn)移的可能性增大。因此，nm23-H1基因的低表達(dá)率既可以作為乳腺癌轉(zhuǎn)移的標(biāo)志，又可用來(lái)鑒定常規(guī)組織病理學(xué)不能確定的具有高轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤亞群，從而預(yù)測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。但在本研究中，nm23-H1的表達(dá)在乳腺癌和乳腺纖維腺瘤之間無(wú)顯著性差異，這與有些報(bào)道不一致。分析其原因可能與病例的選擇、樣本量的大小有關(guān)。   3.2  P16的

14、表達(dá)及其意義   P16，又稱(chēng)MTS1（multiple tumorsuppressor 1)或CDKN2(cyclin-depedent inhibitor2)，是一種CDK4和CDK6的特異性抑制因子，其生物學(xué)行為與細(xì)胞周期的調(diào)控有關(guān)。P16能與CDK4或CDK6直接結(jié)合，抑制周期素D(cyclin D)與CDK4或CDK6結(jié)合形成復(fù)合物從而抑制其激酶活性，使RB蛋白不能被磷酸化，繼續(xù)保持著與轉(zhuǎn)錄因子E2F的結(jié)合，從而阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，起到抑制細(xì)胞增殖的作用5，6。本實(shí)驗(yàn)中，P16蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在不同年齡、病理類(lèi)型、腫瘤大小、TNM分期各組間無(wú)顯著性差異，但在

15、組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移各組間有顯著性差異。組織學(xué)分級(jí)越高，P16蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越低，提示P16蛋白的表達(dá)缺失可能促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的增殖活性，并使其分化受阻。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P16蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率降低，提示P16蛋白在抑制乳腺癌經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著一定的作用。   3.3  P16與nm23-H1間的內(nèi)在聯(lián)系   本研究顯示，隨著分化程度的增高，P16和nm23-H1的陽(yáng)性率都增高，說(shuō)明P16和nm23-H1的表達(dá)在乳腺癌的分化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者P16和nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，說(shuō)明P16和n

16、m23-H1在乳腺癌的淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制上的確存在著一定抑制效應(yīng)。研究表明P16的主要生物學(xué)功能是控制細(xì)胞增殖，其作用主要是通過(guò)與CDK4結(jié)合，拮抗CDK4的作用，阻止細(xì)胞由G期進(jìn)入S期（DNA合成期）來(lái)實(shí)現(xiàn)的。而有證據(jù)也表明nm23-H1可與G期染色體單鏈核酸著絲粒的重復(fù)序列TTAGGG結(jié)合，參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)。由此可見(jiàn)，P16和nm23-H1在抑制腫瘤的增殖活性方面可能有協(xié)同作用。   綜上所述，P16和nm23-H1的表達(dá)與乳腺癌的細(xì)胞分化、淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。證明聯(lián)合檢測(cè)乳腺癌中P16和nm23-H1的表達(dá)的確有助于預(yù)后判斷?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1沈明明，周梅芳，楊健，等原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中p16基因的遺傳學(xué)改變J實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2005，9(5)：49-51黃俊輝 ，海健，李洋，等.原發(fā)性乳腺癌組織中nm23-H1的表達(dá)及其意義J.中國(guó)醫(yī)師雜志，2003 ，7（5）：648-6493Gohring UJ，EustermannI，BeckerM，et alLack of prognostic signifieance of nm23 expression in human carcinoma of breas