茶多酚酒石酸亞鐵比色法教學(xué)內(nèi)容

1、茶多酚酒石酸亞鐵比色法精品文檔多酚類物質(zhì)的提取與含量測定一、實驗原理酒石酸亞鐵分光光度比色法的原理：過量的酒石酸亞鐵與提取液中多酚反應(yīng)生成穩(wěn)定的紫褐色絡(luò)合物，溶液顏色的深淺與溶液中多酚含量成正比。測定總多酚時所用的標(biāo)準(zhǔn)物則需根據(jù)樣品中所含多酚的種類而定，比如測定茶葉中茶多酚含量時，兒茶酚能較好地代表茶多酚，則以兒茶酚作標(biāo)準(zhǔn)物；而測定藤茶多酚時，則以沒食子酸作標(biāo)準(zhǔn)物較合適。二、實驗材料、試劑與儀器材料：茶葉；儀器：水浴鍋，分光光度計，三角瓶，容量瓶，吸管等；試劑：（ 1）酒石酸亞鐵溶液：稱取1.00g 硫酸亞鐵（ FeSO4·7H2O ）和 5.00g 酒石酸鉀鈉 (C4H4O6NaK

2、· 4H2O ） ,混合后加蒸餾水溶解 ,定容到 1000mL ；（2）pH 7.5 磷酸鹽緩沖液：稱取60.20gNa2HPO4·12H2O 和 5.00g NaH2PO4 ·12H2O ， 混合后加蒸餾水溶解 ,定容到1000mL 。三、操作步驟（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作或茶多酚含量經(jīng)驗值的應(yīng)用# 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作參照 GB-8313-87 茶 茶多酚測定方法。收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔為簡化操作，可用在一定操作條件下“吸光度值為 1.00時，供試液中茶多酚的濃度為7.826 mg/mL”這一經(jīng)驗值，直接由待測液的吸光度值計算樣品中茶多酚的含量。（二

3、）樣品總多酚的提取準(zhǔn)確稱取 1.0g 磨碎并混勻的茶葉樣品于200mL 三角瓶中，加入 80mL 沸水，并在沸水浴中保溫浸提30min ，然后過濾、洗滌濾渣，將濾液合并、冷卻、加蒸餾水定容至100mL 。（二）樣品多酚提取液的多酚總量測定吸取 1mL 樣品多酚提取液于25mL 容量瓶中，加入4mL 蒸餾水和 5mL 酒石酸亞鐵溶液，搖勻，再用pH 7.5 磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，混勻。同是以蒸餾水代替樣品提取液，加入與樣品測定同樣的試劑作空白，用 0.5cm 比色皿在 540nm 波長處測定吸光度。4.3 測定步驟4.3.1 試液的制備 按 GB 8305-87 茶 水浸出物測定中3.4.1

4、的規(guī)定 , 制備試液。4.3.2 測定 準(zhǔn)確吸取上述 (4.3.1) 試液 1mL, 注入 25mL 的容量瓶中 ,加水 4mL 和酒石酸亞鐵溶液(3.1)5mL, 充分混合 ,再加 pH7.5 的緩沖液 (3.2) 至刻度 ,用 10mm比色杯 ,在波長 540nm 處, 以試劑空白溶液作參比 ,測定吸光度 (A) 。四、計算7.826 吸光度為 1.00 時,茶多酚含量的經(jīng)驗值(mg/mL) 。# 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則樣品提取液的測定與標(biāo)準(zhǔn)曲線制作步驟相同，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和相應(yīng)公式，求得樣品中茶多酚的含量。收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔計算方法和公式茶葉中茶多酚的含量 ,以干態(tài)質(zhì)量百分率表示 ,按下式計算 :A1.957 ×2L1茶多酚 () ××100100L2M×m×式中 : L1- 試液的總量 ,mL; L2- 測定時的用液量 ,mL; M- 試樣的質(zhì)量 ,g; m- 試樣干物質(zhì)含量百分率 ,； A- 試樣的吸光度 ; 1.957- 用 10mm 比色杯 ,當(dāng)吸光度等于 0.50 時,每毫升茶湯中含茶多酚相當(dāng)于1.957mg 。如果符合重復(fù)性 (5.2) 的要求 ,則取兩