強(qiáng)心靈丸中人參皂苷Rg1 和Re含量的高效液相色譜研究

1、強(qiáng)心靈丸中人參皂苷Rg1 和Re含量的高效液相色譜研究    【關(guān)鍵詞】  人參皂苷Rg1摘要: 目的: HPLC法測定強(qiáng)心靈丸中人參皂苷Rg l和Re的含量。 方法: ODS-C18 （鉆石）色譜柱（250mm×4.6mm，5m）;流動相:乙腈-0.2%磷酸（2080）;檢測波長:203nm。 結(jié)果: 該法可測定有參皂苷Rg1 和Re的含量，其分別在1.2457.400mg及2.16813.008mg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998和r=0.9998，平均回收率分別為98.50%和99.12%，RSD分別為1.50%

2、和0.65%。 結(jié)論: 該方法方便、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為強(qiáng)心靈丸中人參皂苷Rg1 和Re含量的含量測定方法。關(guān)鍵詞: 人參皂苷Rg1 ; 人參皂苷Re; 強(qiáng)心靈; 高效液相色譜法FU Dong-nin， LI X iang-yongAbstract: Objective:To establish a method to determine Ginsenoside Rgl and Re in Qiangxinling pill by HPLC.Methods:ODS-C18 （diamond）column（250mm×4.6mm，5m）was used and CH3CN-0.2

3、%（v/v）H3 PO4 （2080）as mobile phase.The flow rate was1.0ml/min and the wavelength was203nm.Results:The quantities of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re can be determined with the method，which have quite good linearity within the scope of1.2457.400mg and2.16813.008mg respectively（r=0.9998and r=0.9998）

4、，the average recover rate are98.50%and99.12%，RSD are1.50%and0.65%.Conclusion:The method is simple，accurate，good repeatbility，which can be used as the method to determine the quantity of gimsenoside Rg1 and qinsenoside Re in QiangXinLing pill.Key words:強(qiáng)心靈丸是連云港市中醫(yī)院制劑室的協(xié)定處方，臨床使用已有20余年，由人參、澤瀉、豬苓等10味藥組成

5、，具有補(bǔ)氣培元、回陽救逆、活血化瘀、利水滲濕之功效，用于冠心病，高血壓心臟病，肺心病等引起的心慌、氣促、胸悶、頭暈，疲乏無力、下肢水腫、心力衰竭、心肌炎等。強(qiáng)心靈原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只采用薄層色譜法對人參、澤瀉進(jìn)行鑒別，無含量測定項，為了使強(qiáng)心靈丸的質(zhì)量進(jìn)一步提高，我們用準(zhǔn)確度、精密度更高的高效液相色譜法對人參皂苷Rgl 和Re進(jìn)行含量測定。以乙腈和0.2%磷酸作為流動相，測定波長203nm。人參皂苷Rg1 和Re分離較好。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可以作為強(qiáng)心靈丸的含量測定方法。1 儀器與試劑安捷倫高效液相色譜儀（Agilent1100）（G1311A四元遞度泵，VWD-1314A型紫外可見檢測器，安

6、捷倫工作站）;ODS-C18 （鉆石）色譜柱（250mm×4.6mm，5m）;水為重蒸水，乙腈為色譜純，所用其他試劑均為分析純。人參皂苷Rg1 和Re對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號0703-200120，110754-200320）。強(qiáng)心靈丸（030106，030911，031015）均為本院制劑室提供。2 實驗方法2.1 色譜條件流動相為乙腈-0.2%磷酸（2080）;流速1ml/min;柱溫35;檢測波長203nm 1 ;進(jìn)樣量10l。 2.2 對照品、供試品和陰性供試品溶液的制備2.2.1 對照品溶液的制備分別精密稱取人參皂苷Rg1 及Re對照品5.03，5.10mg置

7、10ml量瓶中，加甲醇溶解并釋稀至刻度，搖勻，作為人參皂苷Rg1 及Re的對照品溶液。2.2.2 供試品溶液的制備取本品約0.6g，精密稱定，置100ml錐形瓶中，加水50ml，超聲提取30min，放冷，濾過，濾液用水飽和正丁醇提取3次，30ml/次，合并正丁醇提取液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解并定容至50ml，搖勻，用0.45m的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.2.3 陰性供試品溶液的制備取陰性供試品（除人參外的其余藥材制成的陰性供試品），按供試品溶液制備方法制備陰性供試品溶液。2.3 色譜行為將人參皂苷Rg1 及Re對照品溶液混合，進(jìn)樣，2個峰分離較好;取強(qiáng)心靈丸供試品溶液進(jìn)

8、樣，人參皂苷Rg1 及Re分離良好。陰性供試品溶液成分對人參中Rg1 及Re的含量測定無干擾。2.4 線性關(guān)系考察分別精密稱取人參皂苷Rg1 及Re對照品12.45，10.84mg，加甲醇超聲溶解，定容于10，5ml作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液;再精密吸取人參皂苷Rg1 及Re標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml分別置2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別得到系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由溶液濃度（X）作為橫坐標(biāo)對峰面積（Y）作為縱坐標(biāo)，作線性回歸方程分別為Y=157942.6，X-8666.5，r=0.9998;Y=11

9、0863.6，X-5342.9，r=0.9998。線性范圍分別為1.2457.400g，2.16813.008g。2.5 精密度實驗精密吸取上述對照品溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計算，人參皂苷Rg   1 及Re的RSD分別為0.75%及0.84%，表明精密度良好。2.6 穩(wěn)定性實驗取同一批號（030106）樣品適量，制成供試品溶液，分別于0，1，3，5，7，12，24h進(jìn)樣，10l/次，記錄峰面積，結(jié)果Rg1 及Re的RSD分別為0.90%及0.87%，表明供試品在24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。2.7 重復(fù)性實驗取同批樣品（n=5），按照含量測定方法進(jìn)行測定，記錄色譜圖，測

10、得人參皂苷Rg1 及Re平均含量分別為2.24%及4.27%，人參皂苷Rg1 及Re的RSD分別為0.74%及0.84%，表明該方法重復(fù)性較好。2.8 回收率實驗取已知含量的供試品（批號:030106，人參皂苷Rg1 及Re含量分別為2.24%和4.27%）0.3g，精密稱定，分別精密加入人參皂苷Rg1 及Re的對照品溶液（Rg1 對照品溶液的濃度為3.5mg/ml，Re對照品溶液的濃度為6.5mg/ml）各1.6，2.0，2.4ml，再按正文含量測定項下的方法進(jìn)行操作。結(jié)果見表1。表1 回收率實驗結(jié)果（略）2.9 樣品含量測定精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10l，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算供試品中Rg1 及Re的含量。結(jié)果見表2。 表2 樣品含量測定結(jié)果  %批號 人參皂苷Rg（略）3 討論本試驗曾用乙酸乙酯、乙醇、水飽和正丁醇、正丁醇和氯仿提取。結(jié)果表明以水飽和正丁醇萃取最好。取同批號樣品3份，分別用水飽和正丁醇萃取1，2，3，4次。結(jié)果表明，3次即可萃取完