偶聯(lián)劑汞代異煙酸n-丁二酰亞胺酯的合成研究

1、偶聯(lián)劑汞代異煙酸-N-丁二酰亞胺酯的合成研究周繼萌 羅 雯 #(四川大學原子核科學技術(shù)研究所 成都 610064 # 成都大學生物工程系 成都 610081摘 要用親電取代法通過異煙酸與氧化汞直接反應制得一種適合于各種蛋白質(zhì)碘標記的偶聯(lián)劑該試劑結(jié)合固相分離技術(shù) 來建立一簡便的標記抗體途徑60%氯胺-T-lodogen 1直接標記法或Bolton-Hunter 2試劑間接標記法都存在體內(nèi)迅速脫碘并使射性碘被甲狀腺所攝取的問題Zalutsky 的研究指出但該試劑合成較復雜采用異煙酸為原料合成的偶聯(lián)劑氯化汞代異煙酸-N -丁二酰亞胺 酯與親酯性的芳環(huán)汞代苯甲酸5相比較與小分子蛋白質(zhì)片段結(jié)合時作為一種

2、 快速碘標記蛋白質(zhì)及放射性藥物偶聯(lián)劑的合成方法操作程序更簡 便易行 NCOOHNCOOHHgCl HgO + NaClH+NHSDCCNCO OHgClN O O1232002-03-12收稿蛋白質(zhì)碘化IR-408紅外光譜儀ML-902定時恒溫磁 力攪拌器800型離心機TV 異煙酸(上海試劑廠ÂÈ»¯ÄÆ二環(huán)已基碳二亞胺(DCC均 為AR級G產(chǎn)地Gemny1.2 氯化汞代異煙酸(2的制備取2.2g (9.8mmol黃色氧化汞溶解于50mL 64%的高氯酸中的 溶解完全后加入0.5g (4.6mmol異煙酸勻速攪拌(異煙酸在溶解過程中汞

3、化物逐漸結(jié)晶沉淀出來´ýÈÜÒºÖгÁµíÎïÈܽâºó¹ýÂË ³éÂ˳ÃÈȹýÂËÈ¥µô²»ÈܲÐÎï

4、m/Z:359M+123M+-HgCl基峰(BP:201 V(正已烷:V(乙酸乙酯 =1:11.3 氯化汞代異煙酸的酯化 溶液呈懸濁液保持低溫放置過夜 取上清液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸餾使餾出液至盡干燥產(chǎn)率57.8% ÔÚ1×50cm的色層柱上 樣品上柱后分別用3:11:6的正已烷/乙酸乙酯為淋洗劑作梯度淋洗用刻度離心管收集主要產(chǎn)物得汞代異煙酸-N-丁二酰亞胺酯白色油狀物約 0.20g低溫保存Rf=0.81.56(m, 27H, 3×n-C4H9;2.911(s, 4H, COCH2CH2CO; 8.34(s, 1H C-4H; 8.63(s, 1H, C-

5、6H; 9.20(s, 1H, C-2HIR,/cm-1:3089(=C-H, 1716(C=C, 2979(C-H, 1071(C-O, 1510(NO2, 1661(C=N元素分析CH7O4N2HgCl C26.13(26.30, H1.60(1.54, N6.37(6.15102-5mci½Á°è»ìºÏºó¼ÓÈë0.25mL酯化物溶液(將前面制備的酯化物溶解為1mol CHCl3溶液µÃ»ìº&#

6、207;ÎïÓÃ2ÓлúÏàÔÚµªÆøÁ÷ÖÐŨËõÓÃTHF或CH2Cl2萃取純化的標記產(chǎn)物標記率為60%混合物在4°C下攪拌過夜碘化的HAS在1×25cm柱上與其它反應產(chǎn)物分離含有碘化蛋白質(zhì)的收集物用1mol/L HCl中和至pH=760%ÐÔÄÜÁ¼

7、;ºÃµÄ±ê¼ÇÎïżÁª¼ÁÒÔ·ÅÉäÐÔµâÔÚ·¼»·È¡´úλÖÃÑ¡Óù¯»¯Îï

8、;ΪÁÚλȡ´ú»ù6 ºÏ³ÉÊÊÒËÓÚµ°°×Öʱê¼ÇµÄµâ»¯ÊÔ¼ÁÂÈ»¯¹¯´úÒìÑÌËá-N-丁二酰亞胺酯結(jié)果得到確認 氯化汞代異煙酸為一簡捷快速的制備過程 酯合成在無水試劑操作下進行先標記偶聯(lián)劑用125I通過氯化汞代異煙酸-N-丁二酰亞胺酯標記人血清清蛋白(HAS得到標記率平均達40%60%˵Ã÷²úÎïÊÇÐÔÄÜÁ¼ºÃµÄÅ