小連翹內(nèi)生真菌種群分布及其抗菌性研究

1、小連翹內(nèi)生真菌種群分布及其抗菌性研究                                    作者：袁保紅，杜青平，鄧祖軍 【摘要】  目的 分析小連翹(Hyperioums sampsonii Hance)內(nèi)生  

2、       作者：袁保紅，杜青平，鄧祖軍【摘要】; 目的 分析小連翹(Hyperioums sampsonii Hance)內(nèi)生真菌的分布特征和抗菌活性。方法 采用內(nèi)生菌分離法分離菌株，雙培養(yǎng)法對(duì)峙試驗(yàn)測(cè)定其抗菌性。結(jié)果 從小連翹的根、莖、葉等不同的器官中分離得到81株內(nèi)生真菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)分類鑒定分屬于4個(gè)目，5個(gè)科，26個(gè)屬，其中頭孢霉屬（Cephalosporium sp.）和絲核菌屬（Rhizoctonia sp.）為優(yōu)勢(shì)菌群。不同部位內(nèi)生真菌的類型、數(shù)量和分布存在差異，根部有31株，分屬于12屬；莖部有12株，分屬于10屬；葉

3、部有38株，分屬于13屬。通過(guò)平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從小連翹所分離的內(nèi)生真菌中54.32%對(duì)某些植物病原真菌有拮抗活性。結(jié)論 小連翹內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物中具有潛在活性物質(zhì)，值得深入研究。 【關(guān)鍵詞】; 內(nèi)生真菌；小連翹；拮抗活性Studies on communities of endophytic fungi from Hyperioums sampsonii Hance and their antipathogenic activities in vitroAbstract: The endophytic fungi were isolated and identified morpholog

4、ically from the roots, stems and leaves of Hyperioums Sampsonii Hance. Eightyone strains of endophytic fungi were isolated and belonged to 26 genera, 5 families and 4 orders. Cephalosporium sp. and Rhizoctonia sp. were the dominant genera. Among 81 strains, 31 strains of 12 genera were isolated in r

5、oots, 12 strains of 10 genera in stems, and 38 strains of 13 genera in leaves. The results showed that the quantity, population, and distribution of the endophytic fungi varied in different positions of Hyperioums Sampsonii Hance. In the dual culture tests, 53.48% of all the isolated Endophytic fung

6、i showed antagonistic to some plant pathogens. These endophytic fungi inside the plants have intimate correlation with their hosts. These endophytic fungi and their metabolites might play an important role in the plants against the pathogens.Key words:endophytic fungi; Hyperioums Sampsonii Hance; an

7、tipathogenic activities小連翹(Hyperioums sampsonii Hance)，別名小翹、七層蘭、瑞香草、元寶草等，為多年生雙子葉植物藥藤黃科植物，味苦、性辛、平1。全草含鞣質(zhì)，有光致敏作用，動(dòng)物食后可產(chǎn)生皮炎；含小連翹堿(hypecorine)和小連翹次堿(hypecorinine)；花含金絲桃素(hepericin)2，有活血、止痛、調(diào)經(jīng)、止血、消腫之效；小連翹或其提取物作為有效藥物成分用于制備治療睡眠障礙、老年癡呆、記憶力減退等病癥的藥物3；同屬植物貫葉連翹，在西方國(guó)家稱圣約翰草，用于治療憂郁癥等疾病已有幾百年的歷史4。近年來(lái)的研究表明小連翹也具有抗憂郁作用

8、5。文獻(xiàn)報(bào)道，小連翹中含有聚（異）戊二烯二苯甲酮類衍生物、萘駢雙蒽酮類和黃酮類等多種化學(xué)成分，這些成分是小連翹藥理作用的主要有效成分，但是要提取和分離這些藥物成分還有很多困難6。近來(lái)研究表明,某些藥用植物中個(gè)別內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生與宿主相同或者相似藥理活性的成分7，由此對(duì)藥用植物內(nèi)生真菌的研究引起人們的廣泛關(guān)注。如果在小連翹內(nèi)生真菌中能夠發(fā)現(xiàn)類似的活性物質(zhì)，無(wú)疑找到了一種可替代小連翹植物的新型生物資源。但是至今未見從小連翹中分離及其內(nèi)生真菌的種群多樣性的研究報(bào)道。本文對(duì)小連翹內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離和分類鑒定，并對(duì)其種群多樣性及內(nèi)生真菌拮抗病原菌的活性的研究報(bào)道如下。1; 材料與方法1.1; 材料 分離

9、所用材料為小連翹的根、莖、葉，采自中國(guó)科學(xué)院華南植物園（廣州）。采集其健康的組織，無(wú)其它病蟲害，根、莖與葉分開采集，放于密封袋中，于4 存放，盡快進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離。 碘伏：威的牌消毒液，主要成份是聚乙烯吡咯烷酮碘（即碘伏），液體劑型，有效碘含量為0.5 %，是一種新型的PVP-I消毒劑，深圳市新華鵬消毒劑有限公司生產(chǎn)。 NS液：0.9 %NaCl；ST液：0.9 %NaCl，0.5 %吐溫80；中和劑：0.9 %NaCl，0.5%吐溫80，0.5 %硫代硫酸鈉。;PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000mL，pH7.0。在進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離時(shí)，向培養(yǎng)基中分別

10、加入青霉素、鏈霉素至50 g/mL。1.2; 供試菌株 紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. Oryzae)、惡苗病菌(Fusarium moniliforme)、棉花枯萎病菌 (Fusarium oxysporium f. sp. vasinfectum)由中山大學(xué)生命科學(xué)院微生物和生化教研室提供。1.2; 方法2; 結(jié)果2.1; 表面消毒效果 表面消毒后的樣品振蕩液0.3 mL分別涂布于PDA平板培養(yǎng)基上，28 培養(yǎng)2周后無(wú)菌落長(zhǎng)出，同時(shí)10株分離的代表性真菌菌苔分別經(jīng)過(guò)消毒過(guò)程處理后接種到PDA平板上，28 培養(yǎng)2周后，沒(méi)有觀察到菌落生長(zhǎng)。表明經(jīng)過(guò)樣品消毒處理過(guò)程，樣品表面附生菌的影響已消除，分離的菌株來(lái)自于樣品內(nèi)部，與植物組織結(jié)合緊密。2.2; 小連翹內(nèi)生真菌種群組成 從植物小連翹分離獲得內(nèi)生真菌共81株。經(jīng)顯微形態(tài)觀察鑒定為4個(gè)目，5個(gè)科，26個(gè)屬（見表1）。從表1可以看出，植物小連翹內(nèi)生真菌中，從目的分類水