益母草中益母草堿的HPLC檢測(cè)

1、益母草中益母草堿的HPLC檢測(cè)                                            作者：鞏長(zhǎng)芹，周禮玲，王永平，常筠,張師愚【摘要】&

2、#160; 目的 建立益母草中益母草堿的HPLC檢測(cè)方法。方法 C18色譜柱，流動(dòng)相：甲醇pH=1.7的醋酸/醋酸鈉緩沖液（體積比8515），流速0.6 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm，靈敏度0.1AUFS，柱溫25 。結(jié)果 益母草藥材中益母草堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.015;平均回收率為100.08%，RSD為0.15%。結(jié)論 高效液相色譜直接檢測(cè)益母草堿，簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 【關(guān)鍵詞】  益母草；益母草堿；高效液相色譜法益母草為唇形科植物益母草(Leonurus heterophyllus Sweet)的干燥地上部分，以花蕾期的地上部分的干品或鮮品入藥，性味苦、辛

3、、微寒，歸肝、心包經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、化瘀生新、收縮子宮之功效，主治月經(jīng)不調(diào)、胎漏難產(chǎn)、行經(jīng)腹痛及產(chǎn)后淤阻等證，素有“血家圣藥”、“經(jīng)產(chǎn)良藥”之稱(chēng)。益母草中主要含有生物堿類(lèi)、二萜類(lèi)、甾醇、黃酮類(lèi)、有機(jī)酸、脂肪酸類(lèi)等成分。益母草中生物堿以益母草堿和水蘇堿為主1。藥理作用研究證明，益母草中的主要有效成分益母草堿(leonurine)具有顯著的直接擴(kuò)張外周血管、增加血流量、抗血小板聚集活性等作用2，可有效的降低血液黏度和提高紅細(xì)胞的變形能力，還可調(diào)經(jīng)止血，保護(hù)心肌缺血再灌注損傷。在中國(guó)藥典3及各級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)中，益母草藥材和益母草制劑的質(zhì)量控制均是以總生物堿為指標(biāo)，文獻(xiàn)4，5則采用雷氏鹽剩余比色法測(cè)定益母草

4、中鹽酸水蘇堿。而對(duì)于益母草堿的含量卻沒(méi)有要求，這樣不能保證益母草及其制劑的安全、有效。以益母草為原料的多種制劑，如益母草膠囊、益母草沖劑、益母草口服液、益母草浸膏、益母草片等都是臨床上的常用品,除個(gè)別品種在中國(guó)藥典2005年版增加了含量測(cè)定項(xiàng)目外,多數(shù)品種無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),有的品種則無(wú)含量測(cè)定要求,使市售的產(chǎn)品質(zhì)量得不到保證。所以建立一個(gè)以益母草堿為指標(biāo)直接檢測(cè)益母草藥材及其制劑的統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是很有意義的。本文嘗試建立益母草堿的高效液相色譜直接檢測(cè)方法。1  儀器與材料高效液相色譜儀LabAlliance， LabAlliance紫外檢測(cè)器Model 5000， Phenomenex C

5、18柱(4.6 mm×250 mm，5 m),Anastar色譜工作站；紫外分光光度計(jì)，SHIMADZU公司，UV2401PC。甲醇為一級(jí)色譜純；益母草堿對(duì)照品（購(gòu)于安徽省新星藥物開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司，純度為99）；益母草（購(gòu)于天津市南開(kāi)區(qū)協(xié)和藥店，經(jīng)我校中藥學(xué)院中藥鑒定教研室張麗娟副教授鑒定）。2  方法與結(jié)果2.1  紫外光譜最大吸收測(cè)定在200400 nm之間進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，掃描圖如圖1所示，益母草堿在215 nm和277 nm處均有吸收峰，最大吸收277 nm，故選用277 nm作為高效液相測(cè)定的波長(zhǎng)。2.2  色譜條件色譜柱：Phenomenex

6、C18柱(4.6 mm×250 mm，5 m)，流動(dòng)相：甲醇pH=1.7的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液（體積比8515），流速：0.6 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：277 nm，靈敏度：0.1AUFS，柱溫：25 ，進(jìn)樣量：20 L。2.3  對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取鹽酸益母草堿0.6 mg，溶于25 mL流動(dòng)相中，搖勻，制得0.024 mg·mL-1對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液0.5、 1.0、1.5、2.0、5 mL溶于5 mL流動(dòng)相中，分別搖勻，得質(zhì)量濃度分別為0002400240.024 mg·mL1間呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系。圖1  全波

7、長(zhǎng)掃描圖（略）Fig.1   Wavelength scanning of motherwort alkaloids圖2  對(duì)照品HPLC分析圖（略）Fig.2  HPLC chromatogram of reference substance2.4  樣品溶液的制備精密稱(chēng)取益母草提取物粗品2.2 mg，溶于10 mL流動(dòng)相中，搖勻即得。                  &#

8、160;          83、10.79、10.80、10.81、10.83，平均為10.81，RSD0.15。2.9  加樣回收率試驗(yàn)取益母草堿粗制品3.6 mg,用流動(dòng)相溶解后，精密加入益母草堿對(duì)照品0.4 mg，溶液適量，置于25 mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，搖勻。再按樣品測(cè)定方法操作測(cè)定，測(cè)得6次的峰面積分別為790 165、786 492、807 343、810 706、799 324、813 338，平均峰面積為801 228，結(jié)果計(jì)算回收率為100.08，RSD

9、1.54。3  討論3.1  波長(zhǎng)的確定  在200400 nm之間進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)吸收峰，215 nm和277 nm，但是215 nm有可能受到甲醇吸收的影響，而且在277 nm處沒(méi)有其他成分的干擾，所以選擇最大吸收波長(zhǎng)277 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2  色譜條件的建立  分別考察了不同體積比的甲醇水、甲醇水三乙胺、甲醇水冰醋酸、甲醇緩沖溶液等流動(dòng)相，最終選擇甲醇緩沖溶液作為流動(dòng)相。選擇用酸性流動(dòng)相，是因?yàn)橐婺覆葜幸婺覆輭A的存在形式有可能有兩種，即益母草堿單體及其鹽類(lèi)，利用酸性流動(dòng)相可以轉(zhuǎn)化成鹽類(lèi)一種形式，測(cè)定時(shí)只出現(xiàn)單一的峰。選擇緩沖溶液，是因?yàn)榫彌_溶液是一個(gè)平衡體系，比較穩(wěn)定，有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。3.3  本文是在完成了分離益母草堿和水蘇堿的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了益母草堿的高效液相色譜的直接檢測(cè)方法，為益母草藥材的質(zhì)量控制及其他益母草制劑的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 鄭虎占,董澤宏,佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用M.北京:學(xué)苑出版社,1998:3803.2 丁伯平，熊鶯，徐朝陽(yáng)，等.益母草堿對(duì)急性血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響J.中國(guó)中醫(yī)藥科技,2004，11(1):36.3 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部S.北京：化學(xué)工業(yè)