黃根醇提物對四氯化碳所致大鼠肝纖維化的保護作用

1、黃根醇提物對四氯化碳所致大鼠肝纖維化的保護作用         09-09-07 16:03:00     編輯：studa20                       作者：鄧家剛，周程艷，鄭作文【摘要】  目的研究黃根醇提物對四氯化

2、碳所致大鼠肝纖維化的保護作用。方法大鼠首次于背部皮下注射純CCl4 5 ml/kg，以后每周2次注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，連續(xù)注射8周。8周后取血，計算大鼠的肝脾指數(shù)，檢測大鼠血清中ALT，AST的活性及其總蛋白（TP）、白蛋白(Alb)的含量，計算白蛋白與球蛋白的比值；檢測血清中透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)、型前膠原(PC)、型膠原(C) 的含量；檢測肝臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、羥脯氨酸（Hyp）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平。結(jié)果黃根醇提物能明顯降低CCl4所致的大鼠肝纖維化肝脾指數(shù)的升高(P<0.01)和

3、血清中ALT，AST活性的升高(P<0.01)，降低血清中HA，LN ，PC，CIV，GLB的含量(P<0.01)，升高血清中的TP，ALB含量和A/G的比值(P<0.01)；降低肝組織中MDA 的水平和Hyp 的含量(P<0.01)，亦能升高肝組織中SOD的活性和GSH-Px的水平(P<0.01)。結(jié)論黃根醇提物具有顯著的抗肝纖維化的作用。 【關鍵詞】  黃根 四氯化碳 肝纖維化Abstract：ObjectiveTo study the protective effects of the alcohol extract from Prismatome

4、ris  tetrandra against liver fibrosis in mice induced by carbon tetrachlotide (CCl4). MethodsMouse model with liver fibrosis was induced by the multiple subcutaneous injections of 40% CCl4, 3 ml/kg, twice a week for 8weeks.The indexes of the liver and spleen in mice were calculated.ALT and AST

5、activities and contents of TP，Alb in serum were examined,meanwhile  the ratio  of the ALB and GLB were calculated.The four indexes of liver- fibrosis(HA，LN，PC，C) were determined in liver tissue. SOD activities and MDA，GSH levels in liver tissue were determined. Results The alcohol extract

6、from Prismatomeris tetrandra could obviously inhibit the increase of liver and spleen indexes(P<0.01)in liver fibrosis mice, and the increase of ALT and AST in serum (P< 0.01) , elevate the contents of TP，ALB ，A/G in serum(P<0.01),suppress the content of HA，LN ，PC，CIV ，GLB in liver tissue(P

7、<0.01)  ,  decrease the MDA levels in liver tissue(P<0.01), and improve SOD activity and GSH level in liver tissue(P<0.01) ConclusionThe alcohol extract from Prismatomeris tetrandra has remarkable protective effects on liver fibrosis in mice.Key words:Alcohol extract from Prismato

8、meris tetrandra;  Carbon tetrachlotide;   Liver fibrosis肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征，也是進一步向肝硬化發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)1。目前研究認為肝纖維化是一個動態(tài)過程，尚屬于可逆性病變，其轉(zhuǎn)歸與肝損傷因素是否持續(xù)存在有關，如果得到及時徹底治療，肝損傷停止發(fā)展，則肝纖維化多可逆轉(zhuǎn)；病情如不斷發(fā)展則可能導致肝硬化甚至肝癌2。因此，肝纖維化的防治在臨床上具有十分重要的意義。黃根Prismatomeris tetrandra，為壯醫(yī)用藥，具有軟堅散結(jié)、利濕退黃等功效3，廣西民間多用其治療慢性肝炎4。本研究采用四氯化碳(

9、CCl4)所致慢性大鼠肝纖維化模型，探討黃根醇提物對肝纖維化的影響。本文實驗尚屬首次。1  器材1.1  藥品谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）試劑盒（批號 20060620），超氧化物歧化酶（SOD）測試盒（批號 20060610），丙二醛（MDA）測試盒（批號 20060615），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH）測試盒和考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒（批號 20060620），以上試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。秋水仙堿，為昆明制藥藥品銷售有限公司產(chǎn)品，批號 20060418。四氯化碳(CCl4，分析純)，為重慶川江化學試劑廠產(chǎn)品，批號  20050426

10、，實驗時用花生油配成0.08%四氯化碳溶液。黃根，由廣西藥材站購進，經(jīng)廣西中醫(yī)學院藥用植物教研室韋松基副教授鑒定為茜草科植物三角瓣花Prismatomeris tetrandra（Rox -b.） K. Schum. 的根。1.2  動物清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，體重160200 g。由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK桂20030003。1.3  黃根醇提物的制備將黃根粉碎成粗粉，用乙醇加熱回流提取兩次，合并提取液，濾過，濃縮至無醇味，加水稀釋致所需濃度，于4冰箱保存?zhèn)溆谩?.4  儀器Biofuge strutos型高速低溫離心機（Ken

11、dro Laboratory products）。JY92-2D型超聲波細胞粉碎機（寧波新芝科器研究所）。YKH-I型液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠）。Agilent8453紫外分光光度計。ZFQ-85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海安亭電子儀器廠）。2  方法52.1  造模采用CCl4造成大鼠肝纖維化模型，除正常組外，其余各組每只大鼠首次于背部皮下注射純CCI4 5 ml/kg，以后皮下注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，每周注射2次，共8周。2.2  分組與給藥將大鼠隨機分為6組，每組各16只，即正常組，模型組，陽性組，黃根醇提物高、中、低劑量組。造模與

12、給藥同時進行。各組每天灌胃（ig）給藥，給藥容量為20 ml·(kg-1·d-1)，連續(xù)8周。正常組和模型組給予蒸餾水，陽性組給予秋水仙堿0.2 mg/kg，高、中、低劑量組分別灌胃黃根醇提物12，6，3 g 生藥/kg。股動脈取血，常規(guī)分離血清，大鼠處死前禁食不禁水24 h。2.3  檢測指標檢測血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性及其總蛋白（TP）、白蛋白(ALB)的含量，計算白蛋白與球蛋白的比值（A/G）；并檢測血清中的肝纖維化四項指標，即檢測型前膠原(Procollagen,PC)、IV型膠原（Collagen Type IV，CIV）、透明質(zhì)酸(Hyaluronicacid,HA)和層粘連蛋白(Laminin,LN)的含量。取肝臟、脾臟稱量，計算肝指數(shù)、脾指數(shù)；并用肉眼觀察大鼠肝臟的外形、體積、顏色、質(zhì)地的改變，一部分肝臟用生理鹽水制成10%的肝勻漿，用于檢測肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、羥脯氨酸（Hyp）的含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH）的水平。2.4  數(shù)據(jù)處理各組實驗數(shù)據(jù)均以±s表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行組間t檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學意義。3  結(jié)果3.1