Jab1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

1、Jab1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義 【摘要】 探討Jab1在喉鱗狀細(xì)胞癌(LSCC)中的表達(dá)及其與LSCC臨床病理和預(yù)后的關(guān)系。方法: 采用免疫組化SP法檢測(cè)23例正常喉黏膜(NLT)和72例LSCC組織中Jab1的表達(dá)。結(jié)果: 在54.17%的LSCC中Jab1呈現(xiàn)過(guò)表達(dá)，并且與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)，與患者的總生存率呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。結(jié)論: Jab1可能通過(guò)調(diào)節(jié)p27kip1蛋白的降解而參與LSCC的發(fā)生、發(fā)展, Jab1可以作為L(zhǎng)SCC的一個(gè)預(yù)后指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 喉腫瘤 癌 鱗狀細(xì)胞 免疫組織化學(xué) Jab1 AExpression of Jab1 in laryn

2、geal squamous cell carcinoma ABSTRACT Objective: To study the expression of Jab1(cJun activation domainbinding protein 1) in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) and its correlation with clinicopathologic variables and prognosis. Methods: Expression of Jab1 protein was determined by SP immunohis

3、tochemistry in 23 cases of normal laryngeal tissues and 72 cases of LSCC. Results: Jab1 overexpression was produced in 54.17% of LSCC and was significantly positively associated with clinicopathologic variables and lymph node metastasis. Survival analysis revealed that Jab1 overexpression was signif

4、icantly negatively associated with the overall survival (P0.05). Conclusions: Jab1 protein may contribute to the development and progression of LSCC by facilitating the degradation of p27kip1 and represents a novel prognostic indicator for LSCC. KEY WORDS Laryngeal neoplasms； Carcinoma， squamous cel

5、ls； Immunohistochemistry； Jab1 1996年，Claret等1用酵母雙雜交系統(tǒng)從人淋巴細(xì)胞cDNA文庫(kù)中篩選到一種蛋白，因這種蛋白可與cJun激活區(qū)結(jié)合，故命名為Jab1(cJun activation domainbinding protein 1)。隨后，在擬南芥中發(fā)現(xiàn)COP9信號(hào)復(fù)合物(COP9 signalosome,CSN)的一個(gè)亞單位是Jab1的同源體2，命名為COP9信號(hào)復(fù)合物第5亞單位(COP9 signalosome subunit 5, CSN5)3。Jab1能特異性地與p27kip1發(fā)生相互作用，使p27kip1由胞核穿梭移動(dòng)到胞漿，通過(guò)泛素-

6、蛋白酶體系統(tǒng)加速p27kip1的降解而降低細(xì)胞內(nèi)p27kip1的含量4,5。Jab1在人類(lèi)腫瘤中表達(dá)的研究最初是在卵巢癌6中。隨后，Jab1的表達(dá)在乳腺癌7、胰腺癌8、口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌9、惡性淋巴瘤10等其他腫瘤中被檢測(cè)到。本實(shí)驗(yàn)旨在研究Jab1在喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma， LSCC)中的表達(dá)及其與LSCC臨床病理和預(yù)后的關(guān)系。 1 資料與方法 1.1 組織標(biāo)本 標(biāo)本為經(jīng)臨床病理檢查均診斷為L(zhǎng)SCC的腫瘤組織，取自1998年7月至2000年9月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院LSCC手術(shù)標(biāo)本72例。所有病例術(shù)前均未行化療、放療及其他治療，均經(jīng)病理學(xué)

7、檢查確診。男59例，女13例，37 78歲，平均59歲。聲門(mén)上型27例，聲門(mén)型36例，聲門(mén)下型9例；據(jù)TNM分期(UICC分類(lèi)分期法，1997年)， 29例， 43例；中、高分化癌52例，低分化癌20例；頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性24例，陰性48例；隨訪(fǎng)5年以上69例(95.83%)，失訪(fǎng)3例。另外，選癌旁切緣2?cm以上正常喉黏膜(normal laryngeal tissues, NLT)標(biāo)本23例。 1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用SP染色方法，鼠抗人Jab1單克隆抗體、免疫組織化學(xué)染色試劑盒(SP盒)均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。 1.3

8、 結(jié)果判定 所有切片采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)生獨(dú)立閱片，Jab1陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，部分胞漿也有陽(yáng)性表達(dá)，呈棕黃色，隨機(jī)觀(guān)察10個(gè)高倍視野并計(jì)數(shù)，每個(gè)視野至少計(jì)數(shù)1?000個(gè)細(xì)胞，取其平均值為該病例的細(xì)胞陽(yáng)性率，并據(jù)此對(duì)染色結(jié)果分級(jí)。Jab1陽(yáng)性率50%為陰性(-)，50%為陽(yáng)性(+)。 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 13.0處理，采用2檢驗(yàn)、KaplanMeier曲線(xiàn)及Logrank檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié) 果 2.1 Jab1蛋白的表達(dá)特征 Jab1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞胞核中，部分胞漿內(nèi)也有表達(dá)(圖1)，在NLT和LSCC中陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.04

9、%和54.17%(表1)，后者高于前者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 圖 1 Jab1在喉鱗狀細(xì)胞癌(LSCC)中的表達(dá) (400) 2.2 Jab1蛋白表達(dá)與LSCC臨床病理特征的關(guān)系 Jab1的過(guò)表達(dá)與腫瘤的大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)(P0.05)，見(jiàn)表1。 2.3 Jab1蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 全部病例均在術(shù)后進(jìn)行隨訪(fǎng)(截止時(shí)間為患者死亡或研究截止日期)，隨訪(fǎng)時(shí)間均在5年以上。Jab1陽(yáng)性患者的5年總生存率為47%，而陰性者為83%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表1 LSCC中臨床病理指標(biāo)和Jab1蛋白表達(dá)水平的關(guān)系 3 討 論 細(xì)胞有序地經(jīng)過(guò)細(xì)胞周期需要正負(fù)調(diào)節(jié)因子間的

10、精密平衡，平衡的任何變更可能導(dǎo)致異常的細(xì)胞增殖而具有致癌作用。人類(lèi)Jab1起初被定義為轉(zhuǎn)錄因子AP1(activator protein 1)的共活化物參與細(xì)胞增殖的控制，Claret等1通過(guò)免疫熒光研究發(fā)現(xiàn)，Jab1的免疫染色主要定位在胞核，通過(guò)選擇性地與Jun這類(lèi)轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白的作用，能特異地增強(qiáng)目的基因的活性。 我們檢測(cè)了72例LSCC組織中Jab1的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，Jab1主要定位在胞核，胞漿也見(jiàn)表達(dá)，陽(yáng)性率在癌組織中明顯高于正常組織，這些與既往在其他部位腫瘤中的相關(guān)研究結(jié)果相一致6,7,10。細(xì)胞周期主要由正負(fù)調(diào)控蛋白調(diào)控,細(xì)胞周期蛋白(cyclin)和細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶(cyclin

11、dependent kinases, CDKs)復(fù)合物具有正調(diào)節(jié)作用,而細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑(CKIs)則起負(fù)調(diào)節(jié)作用, 通過(guò)與cyclinCDK形成穩(wěn)定的復(fù)合物,抑制CDKs催化活性。在人類(lèi)腫瘤中細(xì)胞周期素依賴(lài)激酶抑制因子p27kip1的變異非常少見(jiàn)，細(xì)胞內(nèi)p27kip1的豐度主要在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)，Jab1能與p27kip1直接結(jié)合并通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑特異性誘導(dǎo)其下調(diào)4,5。據(jù)報(bào)道7，p27kip1水平在Jab1基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入乳腺癌細(xì)胞中后顯著降低。Jab1可能通過(guò)激活A(yù)P1轉(zhuǎn)錄蛋白促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，AP1復(fù)合物促進(jìn)細(xì)胞的侵襲1113。有研究表明14，p27kip1表達(dá)的降低與LSCC

12、細(xì)胞的增殖活性和腫瘤的侵襲性相聯(lián)系，腫瘤細(xì)胞的增殖活性與LSCC的發(fā)展和預(yù)后相關(guān)。本研究中，54.17%的LSCCs中出現(xiàn)Jab1的過(guò)表達(dá)，并且與腫瘤的大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)。Jab1作為p27kip1的負(fù)調(diào)節(jié)物可能促進(jìn)LSCC的發(fā)生和發(fā)展。 Sui等8首先報(bào)道了Jab1的過(guò)表達(dá)與卵巢癌患者總生存率相關(guān)。Kouvaraki等9關(guān)于乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)， Jab1陽(yáng)性患者的5年總生存率為69%而Jab1陰性患者卻為100%。我們發(fā)現(xiàn)，Jab1過(guò)表達(dá)與患者的總生存率顯著相關(guān)，Jab1陽(yáng)性患者的5年總生存率為47%，而陰性者為83%，多變量分析亦表明，Jab1蛋白是總生存率的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)

13、。 綜上所述，本研究顯示了LSCC中Jab1明顯的過(guò)量表達(dá)，作為p27kip1的負(fù)性調(diào)解物，Jab1與LSCC的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)。如果我們的結(jié)果得到 1 ZK(#Claret FX, Hibi M, Dhut S, et a1. A new group of conserved coactivators that increase the specificity of AP1 transcription factorsJ. Nature, 1996, 383(6599):453457.2 Kwok SF, Solano R, Tsuge T, et al. Arabidopsis homo

14、logs of a cJun coactivator are present both in monomeric form and in the COP9 complex, and their abundance is differentially affected by the pleiotropic cop/det/fus mutationsJ. Plant Cell, 1998, 10(11): 17791790.3 Deng XW, Dubiel W, Wei N, et al. Unified nomenclature for the COP9 signalosome and its

15、 subunits: an essential regulator of developmentJ. Trends Genet, 2000, 16(7):289.4 Pagano M, Tam SW, Theodoras AM, et al. Role of the ubiquitinproteasome pathway in regulating abundance of the cyclindependent kinase inhibitor p27J. Science, 1995, 269(5224):682685.5 Tomoda K., Kubota Y, Kato J, et al

16、. Degradation of the cyclindependentkinase inhibitor p27Kip1 is instigated by Jab1J. Nature, 1999, 398(6723):160165.6 Sui L, Dong Y, Ohno M, et al. Jab1 expression is associated with inverse expression of p27(kip1) and poor prognosis in epithelial ovarian tumorsJ. Clin Cancer Res, 2001, 7(12): 41304

17、135.7 Kouvaraki MA, Rassidakis GZ, Tian L, et al. Jun activation domainbinding protein 1 expression in breast cancer inversely correlates with the cell cycle inhibitor p27(Kip1)J. Cancer Res, 2003, 63(11):29772981.8 Fukumoto A, Ikeda N, Sho M, et al. Prognostic significance of localized p27Kip1 and

18、potential role of Jab1/CSN5 in pancreatic cancerJ. Oncol Rep, 2004， 11(2):277284.9 Shintani S, Li C, Mihara M, et al. Skp2 and Jab1 expression are associated with inverse expression of p27(KIP1) and poor prognosis in oral squamous cell carcinomasJ. Oncology, 2003, 65(4):355362.10 ZK(#Ito Y, Yoshida H, Matsuzuka F, et al. Jun activation domainbinding protein 1 expression in malignant lymphoma of the thyroid: its linkage to degree of malignancy and p27 expressionJ. Anticancer Res, 2003, 23(5b):41214125.11 Smith LM, Wise SC, Hendricks DT, et al. Jun overexpression in MCF7 breast cancer