U74006F對缺血前高血糖大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作用的研究

1、    U74006F對缺血前高血糖大鼠局部腦缺血 再灌注損傷保護作用的研究        【摘要】目的探討U74006F對缺血前高血糖大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作 用。方法線栓法建立腦缺血再灌注模型。大鼠缺血前30分鐘注射50%葡萄 糖，使之處于高血糖狀態(tài)，再 灌注前靜注U74006F(6 mg/kg)。另設(shè)枸櫞酸鹽組與對照組。然后比較3組大鼠梗死面積、神 經(jīng)功能缺損癥狀和腦組織病理改變。結(jié)果U74006F組梗死面積較枸櫞酸鹽 組平均縮小64%(P<0.0

2、1)，神經(jīng)功能評分顯著降低(P<0.05)，病理改變明顯減輕 。對照組損傷程度也顯著輕于枸櫞酸鹽組(P<0.05)。結(jié)論 高血糖可加重腦缺血再灌注損傷。U74006F對高血糖狀態(tài)下大鼠缺血再灌注損傷有明顯保護 作用?！娟P(guān)鍵詞】U74006F局部腦缺血再灌注損傷高血糖 The protective effects of U74006F on focal cerebral ischemic re perfusive injury in preischemic hyperglycemic ratsSun Shenggang Liang Zhihou Mei Yuanwu（Departme

3、nt of Neurology, Union Hospital of Tongji Med ical University, Wuhan 430022）【Abstract】ObjectiveTo explore the protective effect of U7 4006F on focal cerebral ischemic reperfusive injury in preischemic hyperglycemic rats.MethodsUsing thread embolism method to make the model of cerebral ischemic reper

4、fusion in rats. 50% glucose was injected 30 min prior to ischemia,and U74006F (6 mg/kg) was injected before reperfusion. In addition,cit rate acid group and control group were set.Then compared with infarct size, neur ological dysfunction and the pathological change among the rats in three groups. R

5、esults The infarct size in U74006F group was narrower than the citrate acid group 64% (P<0.01) and neurological function score reduced si gnificantly (P<0.05),the pathological change lightened significantly.The in jury degree was more mild in the control group than in the ci-trate acid one ( P

6、0.05).ConclusionsPreischemic hyperglycemia could au gment the focal cerebral ischemic reperfusive injury. U74006F had obvious protec tive effect on focal ischemic reperfusive injury in preischemic hyperglycemic ra ts.【Key words】U74006FFocal cerebral ischemiaReperfusion inj uryHyperglycemia 近幾年來有關(guān)缺血前

7、高血糖可加重腦缺血再灌注損傷的問題，備受人們關(guān)注，其主要機理 可能與脂質(zhì)過氧化損傷密切相關(guān)1。U74006F被認為是一種較為理想的脂質(zhì)過氧化 抑制劑。為此我們應(yīng)用U74006F治療缺血前已處于高血糖狀態(tài)的大鼠，觀察其是否對腦缺血 再灌注損傷有保護作用。1材料和方法1.1材料健康雄性成年Sprague-Dawley大鼠36只，血糖正常（血糖<6 mmol/L），體重 240270 g，隨機分為U74006F組（美國Upjohn公司贈送）；枸櫞酸鹽組；對照組 。每組均12只。1.2方法1.2.13組大鼠可逆性大腦中動脈閉塞模型(RMCAO)參考Yuji(1995)的方法2，稍 加改進制作。1

8、.2.2U74006F組、枸櫞酸鹽組大鼠術(shù)前30分鐘按3 g/kg腹腔注射50%葡萄糖，對照組大鼠 注射等容積復(fù)方氯化鈉溶液。腦缺血2小時，在再灌注前1分鐘經(jīng)股靜脈分別給予U74006F組 0.6%U74006F(6 mg/kg)、枸櫞酸鹽組等容積枸櫞酸鹽液；對照組等容積復(fù)方氯化鈉溶液。1.2.3神經(jīng)功能缺損體征評分參照Longa(1989)3標準。分別在大腦中動脈閉塞 后2小時再灌注2小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天進行雙盲評定。1.2.4分別在葡萄糖注射前、缺血30分鐘、再灌注24小時用Advantage微量血糖分析儀（美 國寶靈曼公司）測量鼠尾血血糖濃度。1.2.5RMCA

9、O術(shù)后7日將大鼠斷頭取腦，經(jīng)視交叉嘴側(cè)和尾側(cè)橫斷。中段標本2%TTC(EMK )生理鹽水染色，標本照相，采用MIAPS-500多媒體像分析儀行像分析。前段與后段標 本作常規(guī)石蠟包埋，并將前段蠟塊尾面與后段蠟塊前面行HE染色。1.2.6統(tǒng)計學(xué)分析方法所有檢測指標均用均數(shù)±標準差(±s)表示，血糖 值與梗死面積采用單因素方差分析。神經(jīng)功能缺損評分采用Wilocoxon秩和檢驗。2結(jié)果2.13組大鼠缺血再灌注前后血糖變化見表1。葡萄糖注射前3組大鼠血糖值均在正常范 圍內(nèi)。葡萄糖注射后腦缺血30分鐘時U74006F組、枸櫞酸鹽組血糖值較對照組顯著升高(P <0.05)。腦缺血

10、2小時再灌注24小時后各組血糖值均恢復(fù)正常。表1 各組大鼠缺血前后血糖值變化(±s, mmol/L,n=12)組別葡萄糖注射前缺血30 min再灌注24 hU74006F組4.80±1.1613.00±1.05*#4.76±1.12枸櫞酸鹽組4.92±0.6912.95±1.53*#4.87±0.67對照組4.60±0.635.98±1.184.63±0.63 與葡萄糖注射前相比*P<0.05；與對照組相比#P<0.05 2.23組大鼠缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損評分見1。13組大鼠缺血

11、再灌注后神 經(jīng)功能缺損評分改變?nèi)毖?小時3組大鼠均出現(xiàn)不同程度偏癱。再灌注24小時開始至再灌注1周，對照組與U 74006F組神經(jīng)功能缺損評分均顯著低于枸櫞酸鹽組（P<0.05）。2.33組大鼠腦梗死面積比較見表2。U74006F組與對照組梗死灶面積顯著小于枸櫞酸鹽組 （P<0.05）。大體標本比較見24。表2 各組大鼠梗死面積比較(±s) 組別例數(shù)視交叉嘴側(cè)橫斷面視交叉尾側(cè)橫斷面U74006F組128.23%±3.46%*9.20%±2.97%*枸櫞酸鹽組1221.41%±6.50%28.47%±9.40%對照組1213.30%

12、±5.16%*15.96%±6.95%*與枸櫞酸鹽組比較*P<0.05；與枸櫞酸鹽 組比較*P<0.01 2.43組大鼠腦組織病理改變U74006F組腦組織切片基本正常，對照組腦組織切片見大量 炎性細胞浸潤梗死灶；枸櫞酸鹽組腦組織切片見大片無結(jié)構(gòu)區(qū)域，浸潤的炎細胞少(見5) 。枸櫞酸鹽組大鼠腦組織缺血壞死程度明顯重于U74006F組及對照組。3討論近年來，大量資料提示缺血前高血糖可加劇全腦或局部腦缺血再灌注損傷4。我 們的實驗結(jié)果表明無論梗死面積、神經(jīng)功能缺損評分、病理改變均證實缺血前高血糖具有顯 著加重缺血再灌注損傷的作用。目前多數(shù)學(xué)者認為缺血前高血糖加重腦缺

13、血再灌注損傷的主要原因是乳酸酸中毒。無論是 全腦或局部缺血，缺血組織內(nèi)均可形成乳酸酸中毒。當(dāng)乳酸酸中毒后pH值下降超過“臨界” 水平時，促使自由基大量生成，從而加重腦缺血再灌注損傷1。實驗研究表明高 血糖大鼠短暫全腦缺血再灌注后靜脈血中脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量顯著增加 ，并且無論是缺血腦組織中鐵含量，還是缺血與再灌注過程中高血糖大鼠缺血組織內(nèi)二羥安 息香酸（DHBA）含量均顯著高于正常血糖組，提示高血糖可促進缺血組織羥自由基生成更多 ，鐵依賴性脂質(zhì)過氧化程度更重5。而U74006F為一種非糖皮質(zhì)激素類脂質(zhì)過氧化 抑制劑，它具有：增加膜穩(wěn)定性；清除過氧化基團；減少過氧化脂質(zhì)誘導(dǎo)的花

14、生四烯 酸 釋放；清除羥自由基并抑制羥自由基的形成；保持內(nèi)源性維生素E的水平等多方面作用 6。同時能促使缺血后ATP恢復(fù)7，降低固有一氧化氮合酶升高程度 8，促進缺血再灌注后血流量恢復(fù)6，減輕缺血后殼核、島葉皮質(zhì)、顳葉 與顳頂葉水腫9，減小持續(xù)性或短暫性缺血梗死灶面積10。本組資料提示缺血前給予50%葡萄糖，使之處于高血糖狀態(tài)，缺血后再灌注時立即用U74006 F治療，結(jié)果表明可縮小大鼠平均腦梗死面積達64%（P<0.01），再灌注后1天大鼠神經(jīng) 功能缺損評分即明顯低于未治療組。組織病理學(xué)觀察也支持此結(jié)果。說明U74006F具有保護 高血糖對缺血神經(jīng)元的損害作用。2U74006F組僅見不

15、明顯白色梗死灶（TTC染色）3對照組見明顯白色梗白色梗死灶（TTC染色）4枸椽酸鹽組見大范圍梗死灶（TTC染色）5枸椽酸鹽組腦組織切片，見大片無結(jié)構(gòu)區(qū)，炎性細胞較少，HE×100作者單位：孫圣剛（同濟醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié) 和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科430022）梁直厚（同濟醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié) 和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科430022）梅元武（同濟醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié) 和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科430022）參 考 文 獻1，Siesjo BK, Katsura K. Acidosis-related damage in: Siesjo BK and Wieloch T(Eds). Advances in Neurology: Cellu

16、lar and molecular mechanisms of ischemic brain damage. Lippicott-Raven Philadelphia,1996.2092，Yuji K, Kazuo M, Takenori Y, et al. Nylonmonfilament for intraluminal middle c erebral artery occlusion in rats. Stroke,1995,26:1655 3，Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral ar

17、tery oc clusion without craniectomy in rats. Stroke,1989,20:84 4，Wass CT, Lanier WL. Glucose modulation of ischemic brain injury: review and cl inical recommendations. Mayo Clin Proc, 1996,71:801 5，Wei J, Huang NC, Quast MJ. Hydroxyl radical formation in hyperglycemic rats du ing middle cerebral art

18、ery occlusion/reperfusion. Free Radic Biol Med,1997,23: 986 6，Hall ED. Inhibition of lipid peroxidation in central nervous system trauma and ischemia. J Neurol Sci, 1995,134(Suppl):79 7，Hoteak Kim, Raymond C, Koehler, et al. Amelioration of impaired cerebral metab olism after severe acidotic ischemia by tirilazad posttreatment in dogs. Stroke, 1996,27:114 8，F(xiàn)ernandez Rodriguez M, Belmonte A, Meizoso MJ, et al. Effect of tirilazad on b rain nitric oxide synthase activity during cerebral ischemia in rats. Pharmacolo gy, 1997,54:108 9，Boisvert DP, Hall ED. Tirilazad preventio