防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則

1、防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥靶動物安全性和有效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則一、概述（一）目的為指導(dǎo)研發(fā)單位開展抗微生物藥防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎的安全性和有效性研究，特制定本指導(dǎo)原則。（二）適用范圍適用于治療奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物。（三）術(shù)語臨床子宮內(nèi)膜炎（Clinical endometritis）：在產(chǎn)后21天或以后發(fā)生，從陰道中排出子宮黏液膿性或膿性分泌物，但無全身癥狀。二、防治臨床子宮內(nèi)膜炎產(chǎn)品的靶動物安全性試驗(yàn)（一）概述研發(fā)單位應(yīng)證明擬上市的防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎產(chǎn)品對靶動物的安全性。下述安全性試驗(yàn)用于證明受試藥物對靶動物的安全性。另外，在療效試驗(yàn)期間，藥物發(fā)生的任何不良反應(yīng)也應(yīng)予以

2、報(bào)告。（二）受試動物選擇10頭產(chǎn)后無臨床子宮內(nèi)膜炎的健康奶牛，對每一受試動物的描述應(yīng)說明年齡、泌乳階段、生產(chǎn)次數(shù)以及日產(chǎn)奶量情況。（三）受試藥物擬用于治療臨床奶牛子宮內(nèi)膜炎的制劑。（四）藥物處理1. 處理前期在處理前，應(yīng)采用直腸觸診、陰道檢查和/或B超診斷評價(jià)奶牛子宮狀態(tài)，并進(jìn)行評分（見表1）。2. 藥物處理以推薦劑量和給藥方案給藥。3. 處理后期給藥后3周（下一個生殖周期）或2130日（下一個生殖周期不發(fā)情奶牛），應(yīng)采用直腸觸診、陰道檢查和/或B超診斷評價(jià)奶牛子宮狀態(tài)，并進(jìn)行評分（見表1）。（五）數(shù)據(jù)收集與結(jié)果評價(jià)藥物處理前、處理期間及處理后期的資料應(yīng)包括動物身份的識別信息、試驗(yàn)地點(diǎn)、試驗(yàn)動

3、物數(shù)、觀察日期、試驗(yàn)天數(shù)，每頭牛的奶產(chǎn)量和體溫。根據(jù)收集的上述數(shù)據(jù)及臨床檢查結(jié)果確定防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎產(chǎn)品對靶動物的安全性。三、防治臨床子宮內(nèi)膜炎產(chǎn)品的藥物有效性研究（一）一般性原則1對于防治奶牛臨床子宮內(nèi)膜炎的藥物，其用藥條件是：在產(chǎn)后21日以后，奶牛至少應(yīng)存在一種入侵子宮的病原體感染和存在奶牛陰道排出非正常的子宮分泌物的癥狀。2在臨床研究中，子宮內(nèi)膜炎致病菌的分布情況將用于確定標(biāo)簽療效的說明，因此在研究中要有足夠數(shù)量（不少于2類菌種共計(jì)不少于60株）的主要子宮內(nèi)膜炎的致病菌以證明其療效，同時對分離的致病菌進(jìn)行擬申請獸藥活性成分的藥敏試驗(yàn)。3收集的數(shù)據(jù)應(yīng)來自具有代表性的牛群。為此，應(yīng)對靶

4、牛群中所有奶牛進(jìn)行檢查，所有符合條件的奶牛都應(yīng)包括在試驗(yàn)中。應(yīng)提交牛群/奶牛的一般性描述數(shù)據(jù)，包括整個成年牛群的大小、當(dāng)前泌乳的奶牛數(shù)、牛群整體的受孕率，每頭奶牛的大致年齡及品種、日產(chǎn)奶量。4微生物學(xué)分離培養(yǎng)上，治療前子宮分泌物中分離出的病原體在治療后的檢測樣本中應(yīng)不能再分離到。如果治療前未分離到某種病原體，則治療后的樣本中同樣不應(yīng)分離到同種病原體。5來自III期臨床的子宮內(nèi)膜炎病原體分離情況將被用于確定標(biāo)簽的療效說明。例如：對化膿隱秘桿菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌等所致子宮內(nèi)膜炎有效的抗微生物藥物適應(yīng)證是：“用于治療由化膿隱秘桿菌、大腸桿菌和鏈球菌屬如溶血性鏈球菌引起的子宮內(nèi)膜炎”。（二）臨床

5、試驗(yàn)1子宮內(nèi)膜炎II期臨床試驗(yàn)初步評價(jià)擬申請的治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的新獸藥對奶牛子宮內(nèi)膜炎的防治作用和安全性，確定合理的給藥劑量方案。試驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容如下：（1）試驗(yàn)動物及入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)動物選用自然感染病例，均應(yīng)經(jīng)執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師臨床診斷確證發(fā)生子宮內(nèi)膜炎后方可進(jìn)行臨床試驗(yàn)。試驗(yàn)動物每組不能低于10頭。奶牛入選標(biāo)準(zhǔn)：入選奶牛體況評分應(yīng)大于2.5分且至少在產(chǎn)后3周以上。奶牛剔除標(biāo)準(zhǔn)：體況評分小于2.5分；剖腹產(chǎn)、胎衣不下、陰道損傷等有臨床可見產(chǎn)科系統(tǒng)疾病和其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病的奶牛不能入選；入選15日前經(jīng)全身給藥治療或產(chǎn)后21日之前經(jīng)子宮注入抗菌藥物或生殖激素的奶牛不能入選。（2）試驗(yàn)材料受試藥物及來源：

6、受試藥物應(yīng)與擬上市的制劑完全一致、同一劑型，有完整的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有符合規(guī)定格式的說明書。受試藥物應(yīng)來源于同一批號，由申報(bào)單位自行研制并在符合GMP條件下的車間生產(chǎn)，并提供中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或其他獸藥檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。對照藥物及來源：對照藥物應(yīng)是已經(jīng)在我國批準(zhǔn)上市，與受試藥物作用相似、適應(yīng)證相同的藥物。來源也可為國外市場或由申報(bào)單位提供，并提供合法來源證明和產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。分離菌株：用于測定對受試藥物和對照藥物的敏感性。（3）試驗(yàn)分組臨床試驗(yàn)均應(yīng)采用隨機(jī)原則分組。具體要求如下：根據(jù)受試藥物的藥物的性質(zhì)和體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果初步確定給藥劑量，一般設(shè)高、中、低3個劑量組，并設(shè)藥物對照組

7、（陽性對照組）。如果受試藥物是復(fù)方制劑，藥物對照組應(yīng)根據(jù)組方中各主要成分分別設(shè)單方臨床推薦劑量對照組。（4）感染和病例的確診通過臨床癥狀、直腸觸診、陰道檢查、B超診斷、致病菌的分離和鑒定等確診為試驗(yàn)所需致病菌感染的發(fā)病奶牛才能作為試驗(yàn)病例，各組試驗(yàn)病例的發(fā)病嚴(yán)重程度應(yīng)基本一致。（5）給藥方案根據(jù)藥物的性質(zhì)和疾病的特點(diǎn)選擇擬推薦的給藥方案，包括開始給藥時間、給藥劑量、時間間隔和持續(xù)時間等。一般要求在病因確診后開始給藥。（6）觀察時間和指標(biāo)觀察時間：治療試驗(yàn)在停止給藥后繼續(xù)觀察不得少于7天。觀察臨床癥狀：應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄試驗(yàn)開始后給藥前、給藥后3周（下一個生殖周期）或2130日（下一個生殖周期不發(fā)

8、情奶牛）后各組奶牛的一般臨床癥狀和特殊癥狀的表現(xiàn)以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和消失情況，并盡量用定量指標(biāo)來評估。臨床癥狀評分可參考下表進(jìn)行，也可修改但須進(jìn)行說明。表1 子宮內(nèi)膜炎評分標(biāo)準(zhǔn)診斷方法臨床癥狀評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評分直腸觸診子宮有彈性，正常大小0子宮腫脹，子宮壁增厚1子宮腫脹明顯，子宮壁厚薄不均2陰道檢查無黏液或清澈的黏液，子宮無腫脹0黏液含有白色或灰白色絮片樣或干酪狀物質(zhì)（膿片）1子宮分泌物中含50%呈白色或灰白色黏液/黏膿性物，有異味的分泌物2子宮分泌物中含50%呈白色或灰白色黏液/黏膿性物，有嚴(yán)重異味的分泌物3子宮拭子細(xì)菌分離無特定病原菌0細(xì)菌分離有特定病原菌1B超診斷宮腔無回聲，子宮頸&#

9、216; 02.5cm0宮腔內(nèi)有線狀無回聲，子宮頸Ø 02.5cm1宮腔內(nèi)有無回聲液性暗區(qū)，內(nèi)膜邊緣不規(guī)則，子宮頸Ø 2.55cm2宮腔增大，宮腔內(nèi)有回聲液性暗區(qū)，子宮頸Ø >5cm3根據(jù)所采用的診斷方法設(shè)置的分值范圍，將臨床子宮內(nèi)膜炎分類為輕度、中度和重度。若4種診斷方法全部采用，可參考以下分類：表2 子宮內(nèi)膜炎臨床分類臨床分類0分子宮內(nèi)膜正常13分輕度子宮內(nèi)膜炎46分中度子宮內(nèi)膜炎78分重度子宮內(nèi)膜炎臨床有效率、治愈率計(jì)算試驗(yàn)開始后詳細(xì)觀察和記錄各組奶牛給藥前和用藥后臨床癥狀評分和發(fā)病程度，分為恢復(fù)正?；虬Y狀好轉(zhuǎn)，按如下公式計(jì)算各組奶牛的有效率和治愈率，

10、并采用卡方（2）檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。臨床治愈率=恢復(fù)正常奶牛數(shù)/發(fā)病奶牛數(shù)；臨床有效率=癥狀好轉(zhuǎn)奶牛數(shù)/發(fā)病奶牛數(shù)；必要時，對細(xì)菌分離情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（7）結(jié)果判斷試驗(yàn)的可靠性：在整個試驗(yàn)中，藥物對照組須有效，否則選擇其它獸藥重做試驗(yàn)。可用有效率和治愈率進(jìn)行判斷，并與各對照組進(jìn)行比較及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)論：確定受試藥物對本適應(yīng)證的有效劑量和推薦劑量；并提出臨床應(yīng)用該獸藥的注意事項(xiàng)、不良反應(yīng)以及獸藥的相互作用等。2. 子宮內(nèi)膜炎III期臨床試驗(yàn)初步評價(jià)擬申請的治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的新獸藥對奶牛子宮內(nèi)膜炎的防治作用和安全性，確定合理的給藥劑量方案。試驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容如下：（1）試驗(yàn)動物及入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)動

11、物選用自然感染病例，均應(yīng)經(jīng)執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師臨床診斷確證發(fā)生子宮內(nèi)膜炎后方可進(jìn)行臨床試驗(yàn)。試驗(yàn)動物每組不能低于30頭。奶牛入選標(biāo)準(zhǔn)：入選奶牛體況評分應(yīng)大于2.5分且至少在產(chǎn)后3周以上。奶牛剔除標(biāo)準(zhǔn)：體況評分小于2.5分；有剖腹產(chǎn)、胎衣不下、陰道損傷等有臨床可見產(chǎn)科系統(tǒng)疾病和其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病的奶牛不能入選；入選15日前經(jīng)全身給藥治療或產(chǎn)后21日之前經(jīng)子宮注入抗菌藥物或生殖激素的奶牛不能入選。（2）試驗(yàn)材料受試藥物及來源：受試藥物應(yīng)與擬上市的制劑完全一致、同一劑型，有完整的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有符合規(guī)定格式的說明書。受試藥物應(yīng)來源于同一批號，由申報(bào)單位自行研制并在GMP驗(yàn)收合格的車間生產(chǎn)，并提供中國獸醫(yī)藥品監(jiān)

12、察所或其他獸藥檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。對照藥物及來源：對照藥物應(yīng)是已經(jīng)在我國批準(zhǔn)上市，與受試藥物作用相似、適應(yīng)證相同的獸藥。來源也可為國外市場或由申報(bào)單位提供，并提供合法來源證明和產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。分離菌株：用于測定對受試藥物和對照藥物的敏感性。（3）試驗(yàn)分組臨床試驗(yàn)應(yīng)采用隨機(jī)原則分組。依據(jù)II期臨床劑量篩選試驗(yàn)獲得的推薦劑量，一般設(shè)推薦劑量組和藥物對照組（陽性對照組），如確有必要可增設(shè)發(fā)病空白對照組（安慰劑處理組）。（4）感染和病例的確診通過臨床癥狀、直腸觸診、陰道檢查、B超診斷、致病菌的分離和鑒定等確診為試驗(yàn)所需致病菌感染的發(fā)病奶牛才能作為試驗(yàn)病例，各組試驗(yàn)病例的發(fā)病嚴(yán)重程度應(yīng)基本

13、一致。（5）給藥方案根據(jù)擬推薦的給藥方案，包括開始給藥時間、給藥劑量、時間間隔和持續(xù)時間等，在病因確診后開始給藥。（6）觀察時間和指標(biāo)觀察時間：治療試驗(yàn)在停止給藥后繼續(xù)觀察不得少于7天。觀察臨床癥狀：應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄試驗(yàn)開始后給藥前、給藥后3周（下一個生殖周期）或2130日（下一個生殖周期不發(fā)情奶牛）后各組奶牛的一般臨床癥狀和特殊癥狀的表現(xiàn)以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和消失情況，并盡量用定量指標(biāo)來評估。臨床癥狀評分可參考表1進(jìn)行，也可修改但須進(jìn)行說明。臨床有效率、治愈率計(jì)算試驗(yàn)開始后詳細(xì)觀察和記錄各組奶牛給藥前和用藥后臨床癥狀評分和發(fā)病程度，分為恢復(fù)正?；虬Y狀好轉(zhuǎn)，按如下公式計(jì)算各組奶牛的有效率和治愈率，并采用卡方（2）檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。臨床治愈率=恢復(fù)正常奶牛數(shù)/發(fā)病奶牛數(shù)；臨床有效率=癥狀好轉(zhuǎn)奶牛數(shù)/發(fā)病奶牛數(shù)；必要時，對細(xì)菌分離情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（7）結(jié)果判斷試驗(yàn)的可靠性：在整個試驗(yàn)中，藥物對照組須有效，否則選擇其他獸藥重做試驗(yàn)。可用有效率和治愈率進(jìn)行判斷，并與各對照組進(jìn)行比較及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)論：確定受試藥物推薦劑量給藥對本適應(yīng)證的有效性。臨床子宮炎（Clinical metritis）：未出現(xiàn)全身性癥狀，但子宮異常增大，自陰道中排出水樣紅褐色液體至灰白色膿性子宮分泌物。產(chǎn)后子宮炎：是一種通常發(fā)生在奶牛產(chǎn)后10日內(nèi)由子宮病原菌