芽孢桿菌常用培養(yǎng)基配方

1、芽孢桿菌常用培養(yǎng)基配方（按理說(shuō)，該實(shí)驗(yàn)的所有培養(yǎng)基都在這了，后紅字更為清楚些。摘自百度）一、 肉湯瓊脂培養(yǎng)基： 蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸餾水1000ml ，瓊脂18g 。 調(diào)節(jié)PH7.2,0.1MPA20min 滅菌。如果用液體做培養(yǎng)基，則去掉瓊脂即可。100 mL/組，其中20 mL液體培養(yǎng)基/250 mL中（內(nèi)裝玻璃珠10顆）；50 mL固體斜面培養(yǎng)基分裝在試管中：5mL/支，10支。2、 或是 （J-瓊脂培養(yǎng)基： 胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸氫二鉀3g,葡萄糖2g, 瓊脂20g, 蒸餾水1000ml。調(diào)節(jié)PH7.37.5Mpa 30min滅菌。）二、 過(guò)

2、氧化氫酶測(cè)定1、 試劑：3-10%過(guò)氧化氫2、 接種與培養(yǎng)：一般將測(cè)試菌種接種于肉湯瓊脂斜面上，30度下培養(yǎng)1-2天。3、 試驗(yàn)方法：取一干凈載玻片，在上面加一滴3-10%的雙氧水，挑取1環(huán)1-2天的的菌苔，在雙氧水溶液中涂抹，如有氣泡出現(xiàn)（O2），作為過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性，無(wú)泡為陰性。也可以將過(guò)氧化氫液直接加入斜面上，觀察氣泡的產(chǎn)生。三、 需氧性測(cè)定1、 培養(yǎng)基：酪素水解物20g,葡萄糖10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,瓊脂15g,蒸餾水1L。調(diào)節(jié)PH7.2，分裝試管，0.06Mpa，30min滅菌，培養(yǎng)基不擺斜面。2、 接種與觀察：用一小環(huán)的肉湯菌液，

3、穿刺接種到上述培養(yǎng)基中（穿刺管底），一般與30 度 培養(yǎng)3-7天觀察結(jié)果。若芽孢桿菌在瓊脂柱表面生長(zhǎng)為好氧菌，沿穿刺線生長(zhǎng)則為厭氧菌。四、 酪素水解（用于檢測(cè)不同種類(lèi)的芽孢桿菌是否具有分解酪素的特點(diǎn)）1、 培養(yǎng)基（1） 脫脂牛奶制備 取新鮮牛奶，煮沸后去掉上層油脂，再經(jīng)離心脫脂（3000r/min,10min）,除去上層油脂，即為脫脂牛奶。（2） 牛奶平板的制備 取50ml的脫脂牛奶放入一只三角瓶中，另外稱1.5g瓊脂置于含有50ml蒸餾水的另外3只三角瓶中，然后將兩液分開(kāi)滅菌，0.06Mpa-20min，帶冷至45-50攝氏度時(shí)，速將兩液混勻倒平板，即為牛奶平板。將平板倒置過(guò)夜，使表面水分干

4、燥。2、 接種與觀察將測(cè)試菌種以三點(diǎn)法點(diǎn)接在牛奶平板上，一般于30度培養(yǎng)1,3,5,7和14天，如菌落周?chē)拖旅娉释该?，表明酪素已被分解。培養(yǎng)基1.1可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/LMgSO4 0.1g/L PH 7.47.6 （富集用）1.2 肉湯（NA）培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)瓊脂）：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.27.4（保存計(jì)數(shù)或分離純化用）營(yíng)養(yǎng)瓊脂：麥芽汁培養(yǎng)基=1：1混合使用，菌落不易擴(kuò)散，形態(tài)特征典型1.3蛋白胨 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO

5、4 0.5g/L MgSO4 3g/L MnSO4 25mg/L PH 7.27.4（分離純化用）1.4產(chǎn)淀粉酶菌株篩選培養(yǎng)基：可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.27.4（用于淀粉酶產(chǎn)生菌分離篩選）1.5產(chǎn)蛋白酶菌株篩選培養(yǎng)基1.5.1酪素培養(yǎng)基：2.1.5.1.1葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L 蒸餾水1000ml， pH7.0-7.2。另：葡萄糖0.5g/L，酪素10g/L，NaCl 5g/L K2HPO4 0.5g/L，KH2PO4 0.5

6、g/L，瓊脂20g/L pH7.2-7.42.1.5.1.2牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L PH7.27.4先將酪素用少量2%氫氧化鈉潤(rùn)濕，玻棒攪動(dòng)，再加適量的蒸餾水，在沸水浴中加熱攪拌至完全溶解（10-15min），補(bǔ)足1000mL蒸餾水，加入其他成分，調(diào)PH分裝滅菌。2.1.5.1.3酵母膏0.05g/L 酪素4g/L KH2PO4 0.36g/L Na2HPO4 1.1g/L MgSO4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO4 0.002g/L CaCl2 0.002g/L ZnCl2 0.014g/L pH6.5-7.04酪素母液制

7、備：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氫氧化鈉溶液中，水浴溶解20min，溶解完畢后加入60-70熱水定溶到100mL.200mL培養(yǎng)基加20mL.2.1.5.2脫脂奶培養(yǎng)基：牛肉膏3g/L（酵母浸粉5g/L） 蛋白胨10g/L NaCl5g/L 脫脂奶粉10-12g/L，PH7.2（用于蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選）將脫脂奶（粉）加水溶解制成10溶液，于115加熱滅菌20-30min，與牛膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1：9混合均勻倒平板。2.1.6纖維素產(chǎn)生菌培養(yǎng)基：CMC-Na2g/L 蛋白胨 10g/L 酵母膏5g/L NaCl5g/L PH7.2-7.4 （用于纖維素產(chǎn)生菌的篩選）2.1.7促芽胞形

8、成培養(yǎng)基：土壤浸出液1000mL 蛋白胨5g/L 牛肉膏6g/L PH7.27.4蛋白胨 1g/L 酵母膏0.7g/L 葡萄糖1g/L (NH4)2SO40.2g/L MgSO40.2g/L K2HPO4 1g/L PH7.27.4 （分離純化用）產(chǎn)芽孢培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母膏0.1g/L PH7.27.4 2.1.8產(chǎn)蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基： 玉米粉30g/L 豆餅粉20g/L 麩皮10g/L 磷酸二氫鈉4g 磷酸二氫鉀0.3g/L 碳酸鈉1.0g/L PH7.47.6 八層紗布塞，牛皮紙?jiān)谩?.1.9產(chǎn)淀粉酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉

9、40g/L 豆餅粉20g/L 蛋白胨5g/L 硫酸銨4g/L 磷酸二氫鈉8g/L 磷酸二氫鉀3g/L PH7.47.6 八層紗布塞，牛皮紙?jiān)?。產(chǎn)酶培養(yǎng)基（蛋白淀粉酶）：蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖1g/L 可溶性淀粉5g/L 磷酸二氫鉀2g/L MgSO4 0.5g/L CaCl2 0.2g/L PH7.0-7.4 2.2分離純化（或復(fù)壯）2.2.1凍干管的活化及菌種復(fù)壯 ：活化：用無(wú)菌吸管吸取0.5mL無(wú)菌水滴入安管中，輕蕩使干菌體溶解成菌懸液，做梯度稀釋后取0.1-0.2mL涂布或直接劃線于肉湯（麥芽汁）培養(yǎng)基平皿，或轉(zhuǎn)接于斜面（活化）37 24-36h。復(fù)壯：挑取選擇生長(zhǎng)快

10、，菌落大的菌落于4.5mL無(wú)菌水試管中，振蕩搖勻后置于80水浴加熱15-20min，梯度稀釋后涂布于促芽胞形成培養(yǎng)基平皿或蘸取菌懸液直接劃線，37 24h。反復(fù)二至三次，選取平皿上菌落大而且生長(zhǎng)快的菌落轉(zhuǎn)接于斜面37 18-20h，4冰箱保存。2.2.2商品微生物制劑中菌種選育1g（1mL）商品制劑加入99mL無(wú)菌（生理鹽）水/250mL三角瓶（帶玻璃珠），置于搖床振蕩20-30min，80-85水浴加熱15-20min，進(jìn)行梯度稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，根據(jù)活菌含量選取兩至三個(gè)梯度進(jìn)行混菌或涂布35-37 24 h，挑取一環(huán)生長(zhǎng)快，菌落大的不同典型菌落分別轉(zhuǎn)接5

11、mL無(wú)菌水試管中，混合器混合5-10min，做成菌懸液梯度稀釋后混菌或涂布，或直接蘸取菌懸液直接劃線，37 18-20h。結(jié)合鏡檢直到菌落大小基本一致，轉(zhuǎn)接于斜面37 18-20h，于4冰箱保存?；?qū)⑻荻染?mL加入平板，然后分別注入淀粉和酪素培養(yǎng)基中，30-37 24-48h，挑取D/d大的（淀粉培養(yǎng)基加碘液，觀察透明圈）轉(zhuǎn)接于斜面?zhèn)溆没蛴脛澗€法進(jìn)行純化。并通過(guò)染色鏡檢觀察，從菌落形態(tài)和細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行鑒別。 2.2.3自然篩選2.2.3.1富集培養(yǎng)：取5g底泥或腸道內(nèi)溶物0.5g，加入45（50）mL無(wú)菌水/250mL三角瓶（帶玻珠）中，振蕩15-20min，取5mL菌懸液或5mL水樣加入45mL促芽培養(yǎng)基/250mL三角瓶中，75-80水浴15-20min，降至35-37 150-200r/min振蕩24h，染色鏡檢，連續(xù)兩至三次培養(yǎng)備用?；蛉?g底泥（土）置于20mL肉湯培養(yǎng)基/250mL三角瓶，八層紗布封口，75-80水浴處理15-20min，然后150-200r/min振蕩24h。鏡檢形成芽孢情況，挑取具有芽孢的菌落進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，獲得單菌落。2.2.3.2分離純化取富集菌液置于75-80水浴15-20min，梯度稀釋10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，選擇三個(gè)合適的梯度混菌或涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂麥芽汁培養(yǎng)基或