實驗性腦血管痙攣兔基質金屬蛋白酶-9的變化研究

1、實驗性腦血管痙攣兔基質金屬蛋白酶-9的變化研究 【摘要】 觀察實驗性新西蘭白兔蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后腦血管痙攣血清基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）及血漿血管內皮生長因子（VEGF）濃度的動態(tài)變化，探討它們與腦血管痙攣的發(fā)生、發(fā)展及轉歸過程的關系，從而為臨床診斷及治療提供理論依據(jù)。方法 新西蘭白兔60只，隨機分為假手術組（n=30）及模型組（n=30）。采用枕大池二次注血法進行蛛網(wǎng)膜下腔腦血管痙攣模型的制作。分別將兩組實驗動物于第1、3、5、7、9、14天采取兔空腹血，應用酶聯(lián)免疫、雙抗體夾心法化驗血清中的MMP-9及血漿VEGF的濃度，同時進行經顱多普勒（TCD）檢測基底動脈最大流速判定腦

2、血管痙攣。結果 假手術組血清MMP-9的濃度及血漿VEGF的濃度無明顯變化，在模型組中血清MMP-9及血漿VEGF濃度于注血后24開始升高，至57天達高峰，以后逐漸減退，14天時接近正常。結論 血清MMP-9及VEGF的濃度變化可以預測蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的發(fā)作，判斷其發(fā)展及預后，從而為臨床治療提供依據(jù)。 【關鍵詞】 基質金屬蛋白酶-9 血管內皮生長因子 腦血管痙攣 經顱多普勒 Study of serum matrix metalloproteinase-9 in rabbit with cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage

3、Abstract Objective To observe the change of the level of serum matrix Metalloproteinase-9 （MMP-9）and plasm vascular endothelial growth factor（VEGF） in experimental after cerebral vasospasm（CVS） with subarachnoid hemorrhage（SAH） in New Zealand rabbit model，and discuss the relation of the change about

4、 serum MMP-9 and VEGF after SAH，then provide the basic theory for clinical diagnosis and treatment.Methods 60 adult New Zealand rabbits were randomly divided into two groups: control group and model group.The rabbit SAH model was constructed by blood injection into cisterna magnum twice.Both the two

5、 groups were venipunctured at the 1st,3rd,5th,7th,9th and 14th day.All the rabbits were fasted before the blood were drawn.Serum MMP-9 and plasm VEGF were detected by the enzyme-linked immunospecific assay.And basilar artery blood fluid speed was examined by transcranial Doppler（TCD） at the same tim

6、e.Results There was little change of serum MMP-9 and plasm VEGF in the control group.But in the model group，the level of them increased progressively at the 24th hour after operation，the peak was at the 5th7th day，and decreased to the normal state at 14th day.Conclusion The change of the level of MM

7、P-9 and VEGF could be used to predict the onset，progress and the prognosis of CVS after SAH，and provide the basic theory for the clinical diagnoses and treatment. Key words matrix metalloproteinase-9；vascular endothelial growth factor；cerebral vasospasm；transcranial Doppler 腦血管痙攣（cerebral vasospasm，

8、CVS）是蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）患者致死和致殘的主要原因1。腦血管痙攣以死亡率高、腦血流和腦灌注降低為特征，是一種可通過血管造影術證實、能產生神經功能障礙或者致死的程度不同的動脈收縮。動脈造影顯示動脈瘤蛛網(wǎng)膜下腔出血患者中，50%伴有腦血管痙攣的患者將發(fā)展成腦梗死。因此腦血管痙攣嚴重影響著蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的預后，盡管相關研究已有了很多，但是其發(fā)病機制尚不明了。研究表明血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）能增加血管的通透性，特異性的促進內皮細胞增殖、加速新生血管形成，改善血管張力，基

9、質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）與腦水腫有關。 本項研究旨在通過研究實驗性SAH新西蘭兔在不同病情變化階段血清MMP-9及血漿VEGF濃度的變化，探討它們與腦血管痙攣的關系，分析它們的作用機制，可為臨床SAH患者病情變化的掌握以及并發(fā)癥預防與治療起到指導性作用，從而降低致殘率以及死亡率，提高治療效果，促進病情康復。 1 材料與方法 1.1 實驗動物及分組 成年新西蘭白兔60只，雌雄各半，體重（2.000.20）kg，均由大連醫(yī)科大學動物實驗室提供。隨機分為對照假手術組及SAH組，兩組各30只。 1.2 模型制作 采用枕大池二次注血法進行模型制

10、作。應用3%戊巴比妥1 ml/kg對新西蘭白兔耳緣靜脈注射麻醉，枕部剃毛，俯臥位固定，消毒后于枕部中線做一直切口，長2.5 cm，銳性分離直達寰枕筋膜，充分顯露寰枕部，用18 G套管針與軀體成角約30穿刺枕大池，退出針芯，此時可見清亮腦脊液流出，放出約2.5 ml后，取自體股動脈的非抗凝血2.5 ml，緩慢注入枕大池內。退出套管針，局部壓迫后，縫合切口。取側臥頭低位30放置30 min，使血液集積在腦基底池，首次注血后48 h，由兔耳中央動脈取血2.5 ml，按上述方法，再次注入枕大池內。假手術組僅行穿刺注入等量生理鹽水。 1.3 實驗方法 兩組實驗動物分別于術前1天及術后第1、3、5、7、9

11、、14天采取兔空腹耳中動脈血4 ml，分為2管，其中一管3.28%的枸櫞酸鈉抗凝處理后，30 min內常溫下離心20 min（2 000 r/min），取血漿置于-70 液氮罐中保存用于測定血漿VEGF濃度。另一管待血液自凝后，2 000 r/min離心20 min，留取血清用于測定血清MMP-9濃度。按說明書采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法測定血漿VEGF及血清MMP-9濃度（采集樣本低溫-20 儲藏3個月內進行），試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。同時應用經顱多普勒分別于術前1天及術后第1、3、5、7、9、14天對其檢查，記錄基底動脈最大流速的動態(tài)變化，來判斷腦血管痙攣的程度

12、。 1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS統(tǒng)計程序以及Microsoft Excel程序進行計算、統(tǒng)計分析及圖表繪制。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)標準差（xs）表示，均數(shù)的比較用t檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P0.05為差異無統(tǒng)計學意義。實驗相關指標間相關性采用Pearson積差相關性分析。 2 結果 2.1 動物模型組變化 有4只實驗兔表現(xiàn)為嗜睡及反應差，其血管痙攣出現(xiàn)得早且程度較其他兔明顯，分別在SAH后第3、7天死亡，均已除外。對它們進行解剖發(fā)現(xiàn)，于枕葉、橋腦區(qū)域有大片出血的血凝塊?；讋用}的形態(tài)學改變包括外膜的炎性細胞浸潤，肌層水腫和壞死、內膜增生。 2.2 假手術組血清MMP-9及血

13、漿VEGF濃度無明顯變化規(guī)律 模型組血清MMP-9濃度及血漿VEGF濃度于術后1天開始升高，57天達到高峰，至14天逐漸恢復正常。見表1。 2.3 假手術組TCD檢查基地動脈最大流速無明顯變化規(guī)律 模型組基底動脈最大流速于術后1天開始升高，57天達到高峰，至14天逐漸恢復正常。見表2。 2.4 模型組血清MMP-9濃度的動態(tài)變化與血漿VEGF濃度的動態(tài)變化相關性分析 Pearson積差相關假設檢驗表明，在=0.01的顯著水平上，模型組血清中MMP-9濃度動態(tài)變化與血漿VEGF濃度動態(tài)變化存在高度相關性（r=0.979，P0.01），呈正相關。見圖1。 2.5 模型組血清MMP-9濃度動態(tài)變化與

14、TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化的相關性分析 Pearson積差相關假設檢驗表明，在=0.01的顯著水平上，模型組血清中MMP-9濃度動態(tài)變化與TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化存在高度相關性（r=0.985，P0.01），呈正相關。見圖2。 2.6 模型組血漿VEGF濃度動態(tài)變化與TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化的相關性分析 Pearson積差相關假設檢驗表明，在=0.01的顯著水平上，血漿VEGF濃度動態(tài)變化與模型組TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化存在高度相關性（r=0.974，P0.01），呈正相關。見圖3。 表1 兔血漿VEGF及血清MMP-9濃度變化規(guī)律

15、 注：與假手術組相比，*P0.05; 與其他各組比較，P0.01表2 兔基底動脈最大流速變化 注：與假手術組相比，*P0.05; 與其他各組比較，P0.01 圖1 模型組血清MMP-9濃度的動態(tài)變化與血漿VEGF濃度的動態(tài)變化相關性分析結果圖2 模型組血清MMP-9濃度的動態(tài)變化與TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化的相關性分析結果 圖3 模型組血漿VEGF濃度動態(tài)變化與TCD檢查模型組基底動脈最大流速動態(tài)變化的相關性分析結果 3 討論 迄今為止，有關SAH 后腦血管痙攣的機制仍不清楚，因此，建立可靠的動物實驗模型對其進行深入研究尤其重要。目前國內、外24多選用兔作為實驗對象，采用經枕大池

16、二次注血的方法建立SAH動物模型。在動物實驗中，檢測是否誘導出CVS是判斷模型成功的關鍵指標。目前檢測CVS的方法主要有腦血管造影及TCD檢測。腦血管造影顯像直觀，是目前診斷CVS最可靠的方法。但腦血管造影具有一定損傷性，使其不易重復，TCD技術能連續(xù)或間斷地監(jiān)測腦血流，既無創(chuàng)傷性，又可重復觀測血流變化。連續(xù)監(jiān)測CVS的發(fā)生與發(fā)展，在評估痙攣血管的自主調節(jié)方面具有較大的優(yōu)越性。根據(jù)血流動力學原理“血流速度與管腔面積成反比”。TCD技術可以測定某一血管內血流速度、血流方向，故可用TCD技術測量某一血管內血流速度的改變，來評價血管痙攣的范圍及狹窄的程度。Aaslid等5將此法用于SAH后腦血管痙攣

17、的診斷，并結合腦血管造影證實了其可靠性。Crommund等6報道TCD檢測CVS的敏感性高達80%，Sloan等1989年曾報道TCD對于中重度CVS敏感性為6l.1%，特異性為100%。所以，TCD監(jiān)測對CVS的演變過程有很大診斷價值。腦血流速度檢測是反映腦血管痙攣最直觀的一項參數(shù)7。本項實驗研究中應用TCD動態(tài)檢測兔SAH后基底動脈的平均血流速度變化，發(fā)現(xiàn)兔基底動脈血流速度在SAH后第1天升高，至SAH后第57天達高峰，至14天逐漸趨于正常。而對照組在第1、3、7、9天未出現(xiàn)血管痙攣的改變（P0.05）。因此本組實驗數(shù)據(jù)說明了腦血管痙攣于術后1天開始升高，57天達到高峰，至14天恢復正常。

18、 MMPs是一組鋅、鈣離子依賴性蛋白水解酶家族，是細胞外基質（extracellular matrix，ECM）降解和重構的重要介質，存在于正常人體，參與多種生理和病理過程，有助于創(chuàng)傷愈合和血管生成；同時在動脈粥樣硬化、關節(jié)炎、腫瘤細胞的發(fā)生及轉移和多發(fā)硬化等許多疾病的病理過程中起重要作用8。其中MMP-9是92kD的型膠原酶（又稱明膠酶B），可降解ECM中的型膠原。有多種細胞參與MMP-9的合成和分泌，如星形細胞、內皮細胞、小膠質細胞、神經細胞、間質細胞、T細胞、巨噬細胞、嗜酸粒細胞和中性粒細胞等。在正常腦內，微血管內皮細胞可分泌MMP-9，小膠質細胞在炎性因子存在下，受刺激可產生MMP-9

19、9，10。MMPs在體內的表達受受到許多層因子的調控，其中包括特異性和非特異性調控因子11。非特異性的如腫瘤壞死因子- （tumor necrosis factor，TNF-）、白細胞介素-1（ Interleukin-1，IL-1）、白細胞介素-2（IL-2）及前列腺素抑制劑可使MMP-9的表達增強。而白細胞介素-2（IL-2）及脫乙?；改芤种芃MP-9的表達12。此外還受其特異性組織抑制劑即基質金屬蛋白酶抑制因子（Tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）的調節(jié)13。TIMP分為四型，分別命名為TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TI

20、MP-414。不同類型的TIMPs抑制底物也不同。TIMP-1是MMP-9的特異性抑制劑。自1974年Sopata和Dancewize提純MMP-9以來，其與腦血管病的關系已引起了人們的廣泛關注。我們通過腦梗死患者的研究發(fā)現(xiàn)MMP-9、VEGF、vWF在腦梗死早期相互伴隨、促進，表現(xiàn)為三種因子血漿濃度呈正相關，因此這三種因子可以作為判斷梗死灶大小的輔助指標15。近年來大量的研究表明腦缺血早期即出現(xiàn)MMP-9表達升高，并參與腦缺血引發(fā)的一系列生理病理改變如腦血管通透性增加16、炎性反應、血腦屏障（brain-blood barrier，BBB）破壞及腦水腫形成等17。BBB的基底膜是包繞腦微血管

21、內皮細胞的一種特殊形式的ECM，主要由型膠原、層粘連蛋白及纖粘連蛋白等構成18。MMP-9的病理作用是破壞ECM19，而ECM是維持腦微血管完整性的重要因素，在有BBB破壞的神經系統(tǒng)疾病中MMP-9表達明顯升高20。 血管內皮生長因子（VEGF）是1989年Ferrara等21在牛垂體星形膠質細胞體外培養(yǎng)液中分離并純化出的一種糖蛋白，可特異地促進血管內皮細胞生長，同時具有增加血管通透性的作用。無論在胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷修復等生理情況下，還是在缺血、缺氧、炎癥、腫瘤等病理情況下，它均能作用于血管內皮細胞的特異受體，誘導內皮細胞增殖，促進血管形成22。研究表明，VEGF在中樞神經系統(tǒng)中的作用主要通過：（

22、1）誘導內皮細胞的增生、移動和抑制其凋亡；（2）調整血管的滲透性及后來發(fā)生的腦組織水腫23；（3）直接發(fā)揮神經保護作用和刺激神經組織再生24。它在胚胎發(fā)育和創(chuàng)傷修復等生理情況下以及炎癥、視網(wǎng)膜病、腫瘤生長及某些缺血性疾病等病理情況下，VEGF都與血管的發(fā)生和生長有密切關系。近年來發(fā)現(xiàn)它在神經系統(tǒng)有刺激神經元、膠質細胞、軸突的生長和成活的作用，并涉及中風、神經變性疾病、腦和脊髓損傷，糖尿病的神經病變等多種神經系統(tǒng)疾病，它在神經系統(tǒng)的血管和神經保護作用越來越多地受到關注。 本項實驗采用枕大池二次注血法制作蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，模擬人體SAH后病情發(fā)展及轉歸的變化，并在不同時間點動態(tài)觀察基底動脈最大流

23、速及血清MMP-9、血漿VEGF濃度變化。研究發(fā)現(xiàn)，模型組血漿VEGF濃度及血清MMP-9濃度，于術后第1天開始升高，57天達到高峰，至14天時逐漸恢復正常。與基底動脈最大流速的動態(tài)變化有高度相關性，呈正相關。此結果顯示SAH后促使血清MMP-9及血漿VEGF濃度的升高，并且雖病情而出現(xiàn)規(guī)律的變化。這是因為SAH后機體發(fā)生了一系列結構、代謝及功能的改變。腦血管痙攣時動脈壁外膜、中層及內膜的形態(tài)學變化在人類和動物模型已被觀察到。Ecker等25于1951年進行腦血管造影發(fā)現(xiàn)SAH患者出現(xiàn)CVS，CVS雖經病理、病理生理、生化等多方面的研究，其發(fā)病機制仍未完全闡明。近來研究表明可能與氧合血紅蛋白（

24、OxyHb）、NO、內皮的損傷、平滑肌細胞內離子泵功能的紊亂和蛋白激酶C的激活、血管壁炎性反應以及血管細胞的增殖反應有關。目前氧合血紅蛋白被證實為較為肯定的致血管痙攣的物質。SAH后，蛛網(wǎng)膜下腔中紅細胞溶血釋放的OxyHb自動氧化并釋放超氧自由基、過氧化氫和單線態(tài)分子氧。體內過多的超氧自由基會對機體造成損傷，包括攻擊細胞膜上膜磷脂中的多鏈不飽和脂肪酸、對細胞蛋白質的損害及對DNA的毒害作用。并且在血紅蛋白中鐵的協(xié)同作用下，氧自由基可使脂質過氧化物（鐵依賴脂質過氧化物）的活性增加。脂質過氧化物已被證明可在體內外造成腦血管收縮和結構的損傷26。另外，在氧自由基啟動的脂質過氧化物反應中，細胞膜的通透

25、性增加，并在一系列酶的作用下產生多種血管收縮物質，如前列腺素C2、前列腺素H2以及血栓烷A2。血栓烷A2是一種強有力的血管收縮物質，可促進血小板的凝聚27。這些溶血產物可破壞內皮細胞，使內皮舒張因子減少，內皮收縮因子增加，血管平滑肌細胞受損使血管舒張功能障礙，打破了調節(jié)血管舒縮的平衡機制，因此促使了機體產生VEGF，促進內皮細胞增殖、加速新生血管形成。但同時又因它增加血管的通透性，因此可能又促使了腦水腫的形成，甚至加重腦水腫的程度，直到內皮細胞功能恢復，腦血管調節(jié)機制的改善以及腦水腫的減輕，血管痙攣才得以緩解，同時血漿VEGF濃度也出現(xiàn)了下降甚至恢復到正常水平。在本項實驗研究中血漿VEGF濃度

26、的動態(tài)變化充分證明了這一點。 研究報道，腦動脈周圍的血凝塊分解代謝產物促使CVS的發(fā)生，腦動脈壁繼發(fā)的免疫炎性反應為主的病理過程，使CVS程度進一步加重28。Nenl首次提出SAH 后CVS是血管發(fā)生病理改變的結果，其中一個重要證據(jù)是遲發(fā)性腦血管痙攣（DCVS）在SAH后數(shù)日內發(fā)生，持續(xù)約2周，這與炎癥發(fā)生的時相基本一致，也與本項實驗中通過TCD檢測基底動脈最大流速來判定腦血管痙攣的結論是一致的。SAH后痙攣血管壁發(fā)生了明顯的結構性改變，包括內皮細胞水腫，平滑肌細胞增生，空泡變性，微壞死和外膜的增厚，炎癥細胞浸潤，分子生物學所揭示的SAH后DCVS的發(fā)病機制表明免疫炎癥反應在其中的作用29，3

27、0。以上血管結構的變化引起腦血流的不足，導致血腦屏障的破壞，腦組織細胞缺血、缺氧，刺激炎性細胞、神經元、內皮細胞和膠質細胞，出現(xiàn)腦水腫，從而激活了MMPs系統(tǒng)，導致血清MMP-9的濃度升高。Zalewska等31通過凝膠酶譜分析證實，MMP-9的激活在空間上與層黏蛋白的降解有關。所以可以推斷腦血管痙攣后出現(xiàn)的腦水腫與BBB通透性增強有關，這與我們前期研究MMP-9在腦梗死中BBB的破壞起重要作用一致15。血清MMP-9過度升高通過對ECM分子成分的降解，使BBB的完整性受到破壞、血管通透性增加，大量水分子進入腦組織導致血管源性腦水腫，甚至出血性改變32。同時MMP-9可以降解緊密連接蛋白ZO-

28、1，使ZO-1蛋白下降，跨膜蛋白與細胞骨架之間的連接受損，內皮細胞間的緊密連接破壞，BBB的通透性增高，使腦水腫進一步加重33。隨著腦血管調節(jié)機制的恢復，腦血流的改善，腦水腫的減輕甚至消失，血清MMP-9濃度也逐漸減低甚至恢復正常值。這與本項實驗研究中血清MMP-9濃度隨著腦血管痙攣的變化而出現(xiàn)規(guī)律性變化的結論是相吻合的。 蛛網(wǎng)膜下腔積血是CVS的啟動因素，積血厚度與CVS嚴重程度直接相關，但其確切機制并未闡明3436。CVS常發(fā)生在動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血（aSAH）發(fā)病后314天35，57天為高峰期37。作為SAH最嚴重的并發(fā)癥，CVS的診斷和處理方面仍頗有爭議。因此準確預測和診斷腦血管痙攣

29、導致的遲發(fā)性腦缺血，并及時干預以防止腦梗死發(fā)生，是動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者處理的一個關鍵問題。本項實驗研究顯示了血清MMP-9及血漿VEGF濃度可以預測SAH后腦血管痙攣病情發(fā)生、發(fā)展以及轉歸的變化，同時因簡單易行、無創(chuàng)傷性、可以反復檢查的特點，為臨床上SAH患者診斷與治療提供客觀依據(jù)。但是因其缺乏特異性，且SAH后CVS的機制尚未明了，所以有關SAH后CVS的發(fā)病機制以及預防診治還需 1 Janjua N，Mayer SA.Cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage.Curr Opin Crit Care，2003，9（2）：113-1

30、19.2 王政偉，尹彥玲，趙春平，等.腦血管痙攣后血管平滑肌細胞中c-fos基因表達及意義.中華神經外科疾病研究雜志，2002，1:173-175.3 劉相珍，李昌盛，江縛，等.764-3治療遲發(fā)性腦血管痙攣的實驗研究.中華神經外科雜志，1997，13：98-100.4 Bavbek M，Polin R，Kwan AL，et al.Monoclonal antibodies against ICAM-1 and CD18 attenuate cerebral vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage in rabbits，Stro

31、ke，1998，29：1930-1935.5 Cosention F，Katusic ZS.Does endothelin-1 play a role in the pathogenesis of cerebral vasospasm.Stroke，1994，25（4）：904.6 Grommund P，Seller RW，Aamid R，et al.Evaluation of cerebrovascular disease by combined extracranial and transcranial Doppler sonography.Stroke，1987，18：10-18.7 M

32、ursch K，Bransi A，Vatter H，et al.Blood flow velocities in middle cerebral artery branches after subarachnoid hemorrhage.J Neuroimaging，2000，10：157-161.8 Rosenberg GA.Matrix metalloproteinases in brain injury.J Neurotrauma，1995，883-842.9 Planas AM，Sole S，Justicia C，et al.Expression and activation of m

33、atrix metalloproteinase-2 and-9 in rat brain after transient focal cerebral ischemia.NeurobioIDis，2001，8（5）:833-846.10 Jiang X，Namnra S，Nagata I.Matrix metalloproteinase inhibitor KB-R7785 attenuates brain damage resulting from permeability focal cerebral ischemia in mice.NeurosciLett，2001，305（1）: 4

34、1-44.12 Reno F，Baj G，Surico N，et al.Exogenous prostaglandin E2 inhibits TPA induced matrix metalloproteinase-9 production in MCF-7 cells.Prostaglandins Other Lipid Mediat，2004，73（34）:237-247.13 Egi K，Conrad NE，Kwan J，et al.Inhibition of inducible nitric oxide synthase and superoxide production reduc

35、es matrix metalloproteinase-9 activity and restores coronary vasomotor function in rat cardiac allografts.Ear J Cardiothorac Surg，2004，26（2）:262-269.14 Karabudak，Kume A，Guc D，et al.Effect of interferon betala on serum matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 in r

36、elapsing remitting multiple sclerosis patients One year follow-up results.J Neurol，2004，251（3）:279-283.15 高寶山，白新學，金點石，等.腦梗死患者血漿血管性血友病因子等三種因子的測定及其臨床意義.中國腦血管病雜志，2006，3:365-368.16 黃曉曦，許東坡，王力群，等.MMP-2/MMP-9在乳腺癌組織中的表達及其與腫瘤浸潤轉移的關系.中國臨床康復，2004，8（11）:2190-2192.17 Planas AM，Sole S，Justicia C，et al.Estimation of gelatinase content in rat brain: effect of foc