大鼠失血性休克復(fù)蘇期損傷及ω-3多不飽和脂肪酸的保護(hù)作用要點

1、中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,September 2016, Vol.33,No.9 2133 中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,September 2016, Vol.33,No.9 2133 實驗研究中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,September 2016, Vol.33,No.9 2133 中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,September 201

2、6, Vol.33,No.9 2133 大鼠失血性休克復(fù)蘇期損傷及a)-3 多不飽和脂肪酸的保護(hù)作用童波朱承良作者單位：312003浙江省紹興市人民醫(yī)院急診外科通信作者：童波,Email ：389568364 qq. comDOI ：10. 3760/cma. j. issn. 1001 -9030. 2016.09. 021【搞要】目的觀察33多不飽和脂肪酸(PUFA)通過抗炎抗氧化作用對出血性休克復(fù)蘇期 損傷的保護(hù)作用。方法 取雄性SD大鼠80只，均分為對照組，模型組以及3-3PUFA低 (10 mg/kg)、中(30甸kg)、高劑呈組(100 mg/kg)，除對照組外其他各組大膩建立岀血

3、性休克模型，待 進(jìn)入復(fù)蘇期后記錄各組大鼠的心率、平均動脈血圧和血氧飽和度,并檢測致炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子 a(TNE-a)、門細(xì)胞介素(讓)邛和內(nèi)漫索水平，以及氧化應(yīng)激相關(guān)的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)和體過氧化物酶體(MPO)等氧化應(yīng)澈指標(biāo)的變化。結(jié)果 在復(fù)蘇期30 min(0-3PUFA高劑最組 大鼠的平均動脈壓、心率和動脈血毓分壓分別為105.1 mmHgd mmHg = 0.133 kPa)、319.2次/分和 69. 4 mmHg,顯著高于模型組的69.6 mmHg、310. 5次/分和38. 1 mmHg；3-3PUFA可以升高大鼠在失 血性休克后復(fù)蘇期的平均動脈壓

4、和動脈血氧分壓指標(biāo);同時,3-3PlJFA還可以顯箸降低失血性休克 復(fù)蘇期TNF-aJL-13.MDA.MPO和內(nèi)秦索的含量，增加SOD的含量。結(jié)論 3<?PUFA對大鼠失血 性休克復(fù)蘇期具有良好的保護(hù)作用，其機制與其抗炎及抗氧化應(yīng)激有關(guān)。【關(guān)鍵詞】妙3多不飽和脂肪酸；出血性休克；復(fù)蘇；炎性因子；氧化應(yīng)激The protective effect and mechanism of 3 - 3 polyunsaturated fatty acid on rat model of hemorrhagic shock in resuscitation period Tong Bo. Zhu C

5、hngUangDepartment of Emergency Surgery t Shaoxing People * s Hospital, Shaoxing 312000, China Corresponding author: Tong Bo, Email；389568364(fq. comAbstract Objective This study tests the hypothesis that treatment with - 3 polyunsaturated fatty acid (o - 3PUFA ) will attenuat e iiiflatniuatory irMpo

6、iibe and slsibilize lienivdyTiajnic Methods Male SD rats were randomly divided into 5 groups： controlt model with hemorrhagic shock/resuscitation (HS/R) and co - 3PUFA low, medium and high dose group, each agent was administered before resuscita- lion. The model was performed and fish oil ( 10, 30,

7、100 mg/kg) was infused through caudal vena at 30 minutes after shock Half of each group was killed at 30 minutes and at 2 hours after resuscitation Then several kinds of inflammation and oxidative stress indicators such as interleukin (IL) - lpf myeloperoxi dase ( MPO), tumor necrosis factor - a ( T

8、NF - a) , endotoxin and superoxide dismutase (SOD) were (eated. Results The mean anerial pressure ( MAP) and arterial partial pressure of oxygen ( PaO7) of high dose 3 -3PUFA group was 105. 1 mmH月(1 mmHg = 0. 133 kPa) and 69. 4 mmHg, significantly higher than model group (69. 6 mmHg, 3& 1 mmHg,

9、P < 0. 05, respectively) ； 3 - 3PUFA could increase the MAP and PaO2 in hemorrhagic shock in resuscitation period In additiont 3 - 3PUFA could significantly reduce the levels of TNF - a, IL - 1(5, malondialdehyde ( MDA ), MPO and endotoxin in serum and increase SOD level Conclusion 3 - 3PUFA pret

10、reatmenl before fluid resuscitation showed a beneficial effect to the hemodynamic stabilization through anti - inflammation and anti - oxidase in HS/R rat model Key wordsa)-3 polyunsaturated fatly acid； Hemorrhagic shock； Resuscitation: Cytokine；Oxidative stress中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J E

11、xp Surg,September 2016, Vol.33,No.9 2133 中華實驗外科朵志 2016 年 9 月第 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,September 2016, Vol.33,No.9 2133 出血性休克是臨床上常見的一種危急綜合征，表 現(xiàn)為快速、大量的血容量不足，引起血壓下降、組織灌 注減少，體液和蛋白丟失等一系列休克綜合病癥，最終 引發(fā)多器官功能障礙綜合征（MODS）。盡管現(xiàn)今的急 救治療可以有效恢復(fù)患者的血容最，維持血壓在正常 水平,但是出血性休克的病死率仍然較高（。心3多 不飽和脂肪酸（PUFA）為人體必需脂肪酸，作為一種 營養(yǎng)物質(zhì)具有降低

12、炎性類花生四烯酸、活性氧產(chǎn)生，減 少炎性因子、黏附因子表達(dá)的作用。本研究旨在探 討失血性休克大鼠在靜脈給予3-3PUFA以后,在復(fù)蘇 期內(nèi)的保護(hù)作用及其機制C.材料與方法1. 材料:SD大鼠80只，雄性，體巫200 220 g,由 浙江大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(浙) 2012-001 0大鼠飼養(yǎng)環(huán)境溫度保持在2025兀，濕度 保持在55% -65%, f由飲水，按時添加飼料,光照時 間為7：00 19：00c(0-3魚油脂肪乳注射液(商品名: 10%尤文/Omegaven )，上海華瑞制藥右限公司；戊巴 比妥鈉,Sigma-Aldrich科技有限公司，批號：8110254； 肝

13、素鈉注射液，匕海第一生化醫(yī)藥股份有限公司，批 號：2013I009；M方乳酸鈉林格氏液，民生藥業(yè)集團(tuán)有 限公司生產(chǎn)，批號:20140928；所有生化檢測試劑盒均 購自南京建成生物工程研究所；所有酶聯(lián)免疫吸附試 驗(ELISA )試劑盒均購自美國eBioscience公司； M 1)3000生物信號采集系統(tǒng)購自安徽淮北止華實驗儀 器有限公司J-STAT血氣分析儀購自美國雅培公司。2. 實驗方法:將80只大鼠平均分為對照組(生理 鹽水)，模型組(生理鹽水)以及(0-3PCFA低劑呆組 (10 mg/kg )、中劑雖(30 mg/kg )和高劑量組 (100mg/kg),每組16只。除正常對照組，腹

14、腔注射戊 巴比妥鈉(60 mg/kg)麻醉大鼠,仰位固定厲分離左側(cè) 股靜脈及股動脈，使用PE-20管分別進(jìn)行靜、動脈插 管，并將M 1)3000生物信號采集系統(tǒng)連接至股動脈，監(jiān) 測大區(qū)的血壓以及心率,根據(jù)收縮斥和舒張壓計算平 均動脈壓(MAP)，手術(shù)開始后每隔15 min對以上指標(biāo) 進(jìn)行一次采集。將200 lU/kg肝索經(jīng)股靜脈插管注入 大鼠體內(nèi)，3 min后，經(jīng)股靜脈導(dǎo)件緩慢放血15 min (5 ml),并將各相應(yīng)時段的血液盛于EP管中保存?zhèn)?用，然后使大鼠MAP保持在35 40 mmHg( 1 mmHg = 0. 133 kPa)持續(xù)1 ho各組大鼠在放血開始45 min時, 各組大鼠靜

15、脈注射相應(yīng)的藥物,對照組和模型組大鼠 給予等容雖生理鹽水，1 h后對大鼠進(jìn)行出血創(chuàng)傷復(fù) 蘇術(shù)，將收集到的血液以0. 5 ml/min的速度經(jīng)股靜脈 插管分別重新輸冋各個大鼠體內(nèi)，同時給予林格氏液 0. 5 ml/mino監(jiān)測大鼠MAP,當(dāng)其恢復(fù)到90%時即可 停止輸液。實行復(fù)蘇術(shù)30 min時在各組隨機選取8 只大鼠處死，收集血液樣本，ELISA檢測丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化卿(SOD)和髓過氧化物購體 (MPO)、以及白細(xì)胞介索(山)-出、腫瘤壞死因子a (TNF-a)、內(nèi)毒素等相關(guān)指標(biāo)，在復(fù)蘇期2 h結(jié)束時再 取血并處死毎組剩余的8只大鼠，檢測與之前相同的 指標(biāo)。分別于術(shù)薊、給藥前、

16、進(jìn)入復(fù)蘇期、復(fù)蘇30 min 以及2 h取血監(jiān)測動脈血鐵分壓(PO2)。正常對照組 大限全程麻醉及血壓、心率的監(jiān)測，不進(jìn)行放血及回輸 等操作，但是和其他組大鼠同時取血檢測指標(biāo)。3.統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS 19. 0統(tǒng)計軟件分析，結(jié) 果以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±.s)表示,組間比較采用單因素 方差分析(One-way ANOVA)后Dunnel I檢驗,或雙因 素重復(fù)分析(Two way repeated ANOVA)，以 P < 0. 05 為差異右統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié) 果1.3-3PUFA對失血性休克大K.心率、平均動脈壓 以及動脈血氧分壓的影響：失血性休克模型大鼠的 MAP均在股靜脈

17、放血15 min后產(chǎn)生急劇卜降,在隨后 的I h內(nèi)基本保持在一致水平，即35 40 mmllg.iF常 組大鼠MAP保持不變。但在復(fù)蘇期,<o-3PLFA給藥 組的大鼠的MAP相對于模型組均有升再，而(o3PUFA 高劑區(qū)組則差異右統(tǒng)計學(xué)意義(P<0. 05),表明 3-3PUFA可以顯著改善出血性休克后恢復(fù)期的平均動 脈壓，且呈劑牡依賴性。各給藥組大鼠在復(fù)蘇期心率 較模型組略有改變但差異無統(tǒng)汁學(xué)意義(P>0. 05)o 除了正常組大訊,其他各組大鼠的動脈血氧分壓均在 休克期15 min時急劇下降至大約40 mmHg左右。在 復(fù)蘇期,o)3PUFA給藥組大鼠的P02相對于模型

18、組均 右升高，而33PUFA高劑屋組則差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P V 0.05),表明心3PUFA可以改善出血性休克后恢 復(fù)期的動脈較分壓。2.(0-3PUFA對失血性休克復(fù)蘇期30 min和2 h時 MDA、SOD、MPO及IL1 B、TNF-a.內(nèi)毒素等指標(biāo)的影 響:實行復(fù)蘇術(shù)后30 min，模型組與正常對照組比較, SOD水平顯著降低,MDA和MPO含量則就著升高，同 時炎性因子TNF-a JL-lp以及內(nèi)毒素含量也顯著升 髙，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(PV0.05)。而不同劑量的 3-3PUFA可以劑址依賴性的降低MDA和MPO,減少 TNF-a JL-Ip和內(nèi)毒素水平，同時增加SOD的含量, 與

19、模型組比較,3-3PUFA高劑量的作用差異冇統(tǒng)計學(xué) 意義(P<0.05)o結(jié)果見表1。在復(fù)蘇期2 h時,模熨 組大鼠MDA .JS過氧化物酶以及IL-lp JNF-a和內(nèi)毒 素水平與復(fù)蘇期30 min比較有所降低，但是顯著高于 對照組大鼠，同時其中SOD水平與復(fù)蘇期30 min比較 未見明顯變化，顯著低于對照組差異均冇統(tǒng)計學(xué)意義 (P < 0. 05 ) 0(D-3PUFA 可以降低 MDA.MPO 以及 TNE-aJL-lp利內(nèi)毒索水平并增加SOD的含量，且星 劑赧依賴性。與模型組比較,(d-3PUFA高劑量的作用 差異右統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。討 論由于局

20、部出血性休克會引起機體釋放大就促炎因2134中華實峻外科余志2016 年9 月笫 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,Sepiember 2016, Vol. 33,No.9表1 (O-3PLFA對復(fù)蘇期30 min大鼠1DA、SOD、TNF-a、lLJ0、MPO和內(nèi)旅索等指標(biāo)的影響(n = 16,x ±s)組別MI)A(gmol/L)SOD(NU/ml)TNFa(p“ml)13 B( pg/ml)MPOtjimol/L)內(nèi)毒素(EU/mi)對照組15.8 ±2.796.7±9.559. 5 ±15. 32I.7±2.826.6

21、±3.60. 22 ±0. 10模巾組52. 8 ±6. 2*12. 5 ±1.2-222.0 ±13. 2*122.0 ±17. V25& 0±12.2l.26±0. 20133PUFA低劑卅組49. 1 ±4. 119. 6 ±3. 1201.0 ±17.2110.0±ll.9243.0 ±27. 11.08±0. 20(0-3PIEA中劑址組37. 9 ±7.925. 1 ±4.9167.0 ±26.978.91

22、20. 1201.0 ±17. 70. 87 ±0. 2033PUFA爲(wèi)劑誡組23. 1 ±3.8k67. 1 ±9.7b97.0 ±16. 6b22. 3 ±2.4h172.0±18.3b0. 24 ±0. 10b注：3-3PlTA：3-3多不飽和脂肪酸;MDA：內(nèi)二fi?；SOD：超氣化物歧化；TNF-a：腫繼壞死因子-ajIL-ip：白細(xì)胞介索-10;MPO：髓過氣化物祈 體；與對照組比較今<0.05；與模型組比校."<0.05表2 3-3PUFA對復(fù)蘇期2 h大凱MBA .SOD.TN

23、F-a JL-ip.MPO和內(nèi)證素等指標(biāo)的影響(“ =16,% ±s)組別MDA( p.mol/L)SOD(NV/ml)TNK-a( pg/ml)IIB(P“ml)MPO( wnol/IJ內(nèi)様素(EU/ml)對照組15.2 ±2. 895. 1 ±7.560. 1 ±7.320. 5 ±6. 825.9 ±4. 10. 23 ±0. 10模型組54. 6 ±5. 6-23.5 ±9.91234.0 ±13. 2-123.0t2I.2-26L0±12.2al.23±0.40B(

24、0-3PUEA低劑球組49.4 ±4.9282±33201.0 ±19.9103.0 ±15. 1235.0 ±12. 1l.09±0. 30u>3PUFA中劑域組38. 2 ±4. 543. 1 ±4.9161.0±l6.277. 5 ±13. 1201.0 ±11. 20. 84 ±0. 203 3PUFA高劑就組23. 1 ±2. lb66. 9 ± 8.7b9&0 ±132b21.2±6.4hI71.0±

25、11.2b0.24 ±0. 20b注：3-3PlFA：33多不飽和脂肪製;MDA：丙二橋;SOD：超輒化物歧化隔;TNFy：腫卿壞死因f-a；II.-lp：白細(xì)胞介索0;MPO：髓過訊化物體；與對照組比較P<0.05；與模訊組比較,M <0.052134中華實峻外科余志2016 年9 月笫 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,Sepiember 2016, Vol. 33,No.92134中華實峻外科余志2016 年9 月笫 33 卷第9 期 Chin J Exp Surg,Sepiember 2016, Vol. 33,No.9子,導(dǎo)致全身性炎性反應(yīng)，因此

26、，臨床治療的藥物須以 減少過氧化物產(chǎn)生以及控制缺血等引起的炎性反應(yīng)為 原則c研究表明W-3PUFA具有較強的抗炎活性，能夠 通過減少炎性I対子釋放降低缺血/再灌注損傷。本 研究結(jié)果就示(O-3PUFA可以通過降低炎性因子的產(chǎn) 生,抑制氧化應(yīng)激從而對出血性休克復(fù)蘇期產(chǎn)生保護(hù) 作用。由于全身性的失血,平均動脈斥和動脈氧分壓在 出血性休克的早期和復(fù)蘇期都會出現(xiàn)很大的變化，直 接關(guān)系到身體器官功能的恢復(fù)。在本研究中，出血性 休克模型產(chǎn)生以后，MAP和P02均不斷下降, u)3PUFA高劑就組可以顯著升高出血性休克引起的 上述指標(biāo)的下降。而且，復(fù)蘇期結(jié)束時，MAP和P02 水平已經(jīng)與正常組大鼠基本接近，

27、表明高劑量 3PUFA對于出血性休克恢復(fù)期具有明顯的保護(hù)作 用本研究結(jié)果顯示,在大鼠出血性休克復(fù)蘇期,SOD 含雖顯著降低，而MDA.MPO含量則顯著升高。不同 劑城的3-3PUEA均可以降低MDA和MPO水平，提高 SOD含垃,表明3-3PUFA可以明顯拮抗氧化應(yīng)激引起 的損傷。1L-10和TNFg是兩種常見的致炎細(xì)胞因 子，他們在失血性休克以及復(fù)蘇期表達(dá)會大朮增 加化 本研究結(jié)果顯示，不同劑量的3-3PUFA均可以 降低1L1B和TNFp的水平。內(nèi)毒索是革蘭氏陰性細(xì) 菌細(xì)胞壁中的一種成分，只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解后才釋 放出來。3-3PUFA也可以顯著降低苴含就，表明 (O-3PUFA對內(nèi)毒素也

28、有很好的抑制作用。本研究結(jié)果顯示，失血性休克復(fù)蘇后會引起大鼠 全身大就氧自由基和炎性因子的釋放,在復(fù)蘇前給予 u)3PUFA可以顯著減輕大鼠全身的氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑 制炎性反應(yīng)和內(nèi)毒索產(chǎn)生，從而減輕出血性休克復(fù)蘇 期的器官損傷。參考文獻(xiàn)1 黎筆熙，陶軍朱水波.等鹽酸戊乙奎廉對失血性休克大鼠急性 肺損傷的彫響J 中華實驗外科雜志.2014.31(11):2486-2489.Li BX.TaoJ.Zhu SB.et al. Effects of penehyclidine hydrochloride on hemorrhagic shock-inducr<l acute lung injury

29、 in rats J Chin J Exp Surg.2014.3K H ):2486-2489.DOI： 10.3760/cma.j. issn. 1001 -9030 2014. 11.0402 黃曉雷陳岱莉齊曉非，等脂氧索受體激動劑BML.I11緩解大 風(fēng)失血性休克復(fù)蘇后肝臟損傷和炎性反AV JJ.中華實驗外科雜 志.2015.32(6):1329-1332.Huang XL.Chen DLtQi XFtd al. Effects of BML-111 on liver injury and inflaninator)* responses after hemorrhagic shock and resuscitation in ratsJ.Chin J Exp Surg.2015.32(6) ： 1329J332.DOI：10. 3760/cma. j. issn. 1001 -9030.2015.06.041.3 : Yang G,Ht Y,Peng X.el al. Hy,)o