分子生物學常用儀器介紹 (2)ppt課件

1、研究生實驗技能培訓研究生實驗技能培訓分子生物學實驗常用儀器介紹分子生物學實驗常用儀器介紹實驗中心實驗中心 1.Biometra梯度PCR儀2工作原理工作原理 多次重復(fù)多次重復(fù)“變性解鏈變性解鏈退火退火合合成延伸成延伸”的循環(huán)的循環(huán) 3主要用途主要用途 用于用于DNA的擴增的擴增 梯度梯度PCR儀特別適用于最適反應(yīng)儀特別適用于最適反應(yīng)條件的摸索，在一次條件的摸索，在一次PCR反應(yīng)中反應(yīng)中可檢驗多至可檢驗多至12個反應(yīng)溫度，從而個反應(yīng)溫度，從而輕松得出最適反應(yīng)溫度。輕松得出最適反應(yīng)溫度。4Mullis開車的時候開車的時候, 瞬間感覺兩排路燈就是瞬間感覺兩排路燈就是DNA的兩條鏈，自己的車和對面的兩

2、條鏈，自己的車和對面開來的車象是開來的車象是DNA聚合酶，面對面地合成著聚合酶，面對面地合成著DNA， 5 基因、基因、DNA片段的克隆片段的克隆 人工基因構(gòu)建人工基因構(gòu)建 DNA序列測定序列測定 基因定點突變基因定點突變 基因型（突變）檢測，基因型（突變）檢測， SNP分析，遺傳背景分析分析，遺傳背景分析 生物物種鑒定，系統(tǒng)進化研究生物物種鑒定，系統(tǒng)進化研究 基因表達量研究基因表達量研究（real-time PCR） / 基因表達譜研究基因表達譜研究（ DNA chip, SAGE）6 疾病基因檢測疾病基因檢測 / 遺傳病的產(chǎn)前診斷遺傳病的產(chǎn)前診斷 致病病原體的檢測致病病原體的檢測 腫瘤治療

3、中癌基因的檢測腫瘤治療中癌基因的檢測 DNA指紋、個體識別、親子關(guān)系鑒別、指紋、個體識別、親子關(guān)系鑒別、法醫(yī)物證法醫(yī)物證 7樣品樣品正對照正對照 負對照負對照標準分子量標準分子量污染是污染是PCRPCR實驗的常見問題。只要實驗室里曾經(jīng)擴增過某個實驗的常見問題。只要實驗室里曾經(jīng)擴增過某個片段，就有可能以后的實驗中發(fā)生污染。片段，就有可能以后的實驗中發(fā)生污染。8 三個水浴鍋，三個水浴鍋， 用手移動用手移動 （Mullis等人當時用的）等人當時用的） 電加熱塊電加熱塊 自來水冷卻自來水冷卻 （PE，1988） 電加熱塊電加熱塊 內(nèi)置循環(huán)液冷卻內(nèi)置循環(huán)液冷卻 （PE，1989） 三個加熱塊三個加熱塊

4、機械手機械手 （Stratagene，1994） 半導(dǎo)體制冷和加熱半導(dǎo)體制冷和加熱 （MJ, PE, BioMetra, Eppendrof） 溫度梯度溫度梯度, 熒光檢測熒光檢測 (如如 Roche的的Lightcycler) 風加熱風加熱 Lab-on-chip式的式的PCR儀儀(所謂的芯片所謂的芯片PCR)1991年出現(xiàn)三個水浴鍋年出現(xiàn)三個水浴鍋+機械手的原始機械手的原始PCR儀（華美，復(fù)日等）儀（華美，復(fù)日等）現(xiàn)在以半導(dǎo)體（現(xiàn)在以半導(dǎo)體（Peltier板）制冷式為主（杭州博日板）制冷式為主（杭州博日,上海天呈上海天呈, 廈門廈門安普利等）安普利等）9PCR儀的種類 總體來說可以分為兩大

5、類：總體來說可以分為兩大類： PCR擴增儀和實時熒光定量擴增儀和實時熒光定量PCR儀儀 普通的普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度擴增儀又衍生出帶梯度PCR功功能的梯度能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原儀、和帶原位擴增功能的原位位PCR儀等。儀等。 1996年由年由ABI公司首先推出將擴增和檢測公司首先推出將擴增和檢測融為一體的實時熒光定量融為一體的實時熒光定量PCR儀，此后很儀，此后很多公司如多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量等等都先后推出不同款式的定量PCR儀，儀， 10PCR儀的主要參數(shù)儀的主要參數(shù) 溫度控制要精確度溫度控制要精確度

6、升降溫的速度升降溫的速度 更快的升降溫速度，可以縮短反應(yīng)進行的更快的升降溫速度，可以縮短反應(yīng)進行的時間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、時間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時間，能提高反應(yīng)的時間，能提高PCR反應(yīng)特異性。反應(yīng)特異性。 ABI早就有升降溫速度高達早就有升降溫速度高達5C eppendorf也推出了升降溫速度可達到也推出了升降溫速度可達到6/秒和秒和4.5/秒秒 11 現(xiàn)在的現(xiàn)在的PCR儀如儀如ABI，Eppendorf的一的一般具有兩種溫控模式，即模塊溫控模般具有兩種溫控模式，即模塊溫控模式（式（Block-control）和反應(yīng)管溫控模式）和反應(yīng)管溫控模式）（tube-co

7、ntrol）。）。 模塊溫控模式適用于長時間的靜態(tài)孵模塊溫控模式適用于長時間的靜態(tài)孵育（如連接、酶切、去磷酸化等）。育（如連接、酶切、去磷酸化等）。 試管溫控更為準確試管溫控更為準確 12梯度梯度PCR儀儀 “摸條件摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。一度是讓人很頭疼的問題。 梯度梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問的出現(xiàn)部分解決了一些問題題在反應(yīng)過程中在反應(yīng)過程中每個孔每個孔的溫度的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出最適合的反應(yīng)條件。索出最適合的反應(yīng)條件。 13原位原位PCR擴增擴增 在在PCR儀上增加原位

8、儀上增加原位PCR模塊就模塊就可以在玻片上進行原位可以在玻片上進行原位PCR擴增，擴增， 14多槽式高通量多槽式高通量PCR儀儀 隨著基因組高通量研究的需求的提高隨著基因組高通量研究的需求的提高 MJ有一種一拖四，就是有一種一拖四，就是1個主機帶個主機帶4個擴增槽，個擴增槽，每個槽可以獨立控溫，一次可以作每個槽可以獨立控溫，一次可以作96x4個樣品的個樣品的PCR，不過一旦出現(xiàn)問題，不過一旦出現(xiàn)問題4個都不能用了。個都不能用了。 ABI則在原來的則在原來的9700的基礎(chǔ)上推出了雙的基礎(chǔ)上推出了雙384孔的孔的基座，一次完成基座，一次完成384x2個樣品，使得個樣品，使得9700的功能的功能又擴

9、展到高通量領(lǐng)域而無需購買新的機器，可惜又擴展到高通量領(lǐng)域而無需購買新的機器，可惜兩個兩個384槽不能獨立控溫。槽不能獨立控溫。 eppendorf則有一個控制面板，可以控制則有一個控制面板，可以控制5個獨立個獨立的的PCR儀，每臺機器可以聯(lián)合，而且互不影響，儀，每臺機器可以聯(lián)合，而且互不影響，但是比較浪費空間。但是比較浪費空間。15儀器的功能性和人性化設(shè)計儀器的功能性和人性化設(shè)計 熱蓋熱蓋現(xiàn)在的現(xiàn)在的PCR儀一般均配備儀一般均配備熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為105，使樣品，使樣品管頂部的溫度達到管頂部的溫度達到105左右，蒸發(fā)左右，蒸發(fā)的反應(yīng)液就不會產(chǎn)生凝集在管蓋上的反應(yīng)液就不會產(chǎn)生凝

10、集在管蓋上而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無需而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無需再向反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少再向反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少后繼反應(yīng)的麻煩。后繼反應(yīng)的麻煩。 過松過松 過緊過緊 16 樣品基座樣品基座PCR反應(yīng)多在反應(yīng)多在0.2或者或者0.5的的管子中進行，多數(shù)管子中進行，多數(shù)PCR儀也配備了不同的儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。可更換樣品槽適配不同的樣品管。 eppendorf有一個有趣的設(shè)計，一個槽內(nèi)有一個有趣的設(shè)計，一個槽內(nèi)帶有帶有0.2和和0.5兩種不同樣品孔，不需更換兩種不同樣品孔，不需更換基座就可以分別使用兩種不同的反應(yīng)管基座就可以分別使用兩種不同的反應(yīng)管 AB

11、I的的9700就可以更換不同的樣品槽就可以更換不同的樣品槽 17 軟件軟件新的新的PCR儀都比較注儀都比較注重程序編寫的簡易性。大屏幕，重程序編寫的簡易性。大屏幕，顯示實時信息，倒計時，記憶顯示實時信息，倒計時，記憶存儲多個程序、自動斷電保護存儲多個程序、自動斷電保護等都有助于實驗室中的復(fù)雜環(huán)等都有助于實驗室中的復(fù)雜環(huán)境使用。境使用。 18Biophotometer生物分光光度計生物分光光度計19技術(shù)參數(shù)技術(shù)參數(shù) 光學系統(tǒng)：吸收單光束分光光度計，配有光學系統(tǒng)：吸收單光束分光光度計，配有基準光束基準光束 光源：氙燈光源：氙燈 波長：氙波長：氙230 nm; 260 nm; 280 nm; 320

12、 nm; 562 nm; 595 nm 光譜帶寬：光譜帶寬：5 nm：230 nm320 nm，7 nm：562 nm 595 nm 光度計測定范圍：光度計測定范圍：0000 到到 3000 A20Biophotometer 生物分光光度計使用常見問答生物分光光度計使用常見問答21 答：答：DNA 的在的在Biophotometer 上能測定的最高濃度并上能測定的最高濃度并 沒有一個絕對的值，這是因為這個濃度跟使用的比色沒有一個絕對的值，這是因為這個濃度跟使用的比色皿光程和樣品的稀釋比例有關(guān)的。皿光程和樣品的稀釋比例有關(guān)的。 Biophotometer 測定的最大吸光度是測定的最大吸光度是3.

13、0。 當測定的當測定的DNA 樣品吸光度大于樣品吸光度大于2.5時，建議采用時，建議采用2 mm 的比色皿光程替代的比色皿光程替代10 mm。 10 mm光程下測定的光程下測定的A260=2.5 時，相當于時，相當于125 g/ml 濃濃度的雙鏈度的雙鏈DNA，1.25 g/ml 的的1:10 稀釋。稀釋。 如果是在如果是在2 mm 光程光程6.25 g/ml 的的1:10 稀釋。稀釋。22 答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能夠測定的最下能夠測定的最小吸光度是小吸光度是0.05，這個吸光度值相當于濃度為，這個吸光度值相當于濃度為2.5 g/ml 的雙鏈的雙鏈DNA 的吸

14、光度（約的吸光度（約125 ng 雙雙鏈鏈DNA 溶解在溶解在50 l 溶液中），請確保核酸樣溶液中），請確保核酸樣品的吸光度必需大于品的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收，其值常會對光有一定吸收，其值0.1。23 答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能夠測定的最下能夠測定的最小吸光度是小吸光度是0.05，這個吸光度值相當于濃度為，這個吸光度值相當于濃度為2 g/ml 的的RNA的吸光度（約的吸光度（約100 ng 雙鏈雙鏈DNA 溶解在溶解在50 l

15、溶液中），請確保核酸樣品的吸溶液中），請確保核酸樣品的吸光度必需大于光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因為樣，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會對品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收，其值光有一定吸收，其值0.1。請注意，這。請注意，這個值跟儀器無關(guān)，核酸的吸光度必需大于個值跟儀器無關(guān)，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的有效和可靠，因為樣品中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收，其值干擾通常會對光有一定吸收，其值3.0A，請檢查，請檢查 1 比色皿是否被完全壓入比色皿槽內(nèi)，出現(xiàn)加比

16、色皿是否被完全壓入比色皿槽內(nèi)，出現(xiàn)加號有可能是比色皿的基座擋住了光線的通路。號有可能是比色皿的基座擋住了光線的通路。 2 您使用的比色皿的中心高度是否在您使用的比色皿的中心高度是否在8.5 mm ？ 3 比色皿中是否加入了足夠量的空白對照溶液？比色皿中是否加入了足夠量的空白對照溶液？26 答：答：A230 產(chǎn)生負值主要是由于在很低產(chǎn)生負值主要是由于在很低DNA 濃濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。 在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，A230 的負值會被校正。的負值會被校正。 同時需要注意的是同時需要注意的

17、是A260 的讀數(shù)也必需大于的讀數(shù)也必需大于0.1 才能保證可靠的結(jié)果。才能保證可靠的結(jié)果。27 答：答：Bradford 方法中使用的試劑在和塑料長期方法中使用的試劑在和塑料長期接觸后會使塑料發(fā)生損傷，這種試劑不可以在接觸后會使塑料發(fā)生損傷，這種試劑不可以在塑料比色皿中放置超過塑料比色皿中放置超過5 分鐘，測定值的波動分鐘，測定值的波動是由于試劑與塑料表面發(fā)生反應(yīng)后，導(dǎo)致吸光是由于試劑與塑料表面發(fā)生反應(yīng)后，導(dǎo)致吸光度發(fā)生變化而產(chǎn)生的，在使用這個方法時，建度發(fā)生變化而產(chǎn)生的，在使用這個方法時，建議使用玻璃比色皿。議使用玻璃比色皿。28核酸與蛋白的電泳分析核酸與蛋白的電泳分析瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖

18、凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中可用于科研及檢測分析可用于科研及檢測分析29.電泳槽電泳槽 水平平板水平平板 垂直平板垂直平板30垂直電泳系統(tǒng)垂直電泳系統(tǒng)31凝膠濃度選擇凝膠濃度選擇瓊脂糖濃度瓊脂糖濃度(%)線型線型DNA分子的分離范圍分子的分離范圍(Kb)0.35600.61200.70.8100.90.571.20.961.50.2312.00.12瓊脂糖凝膠的濃度與瓊脂糖凝膠的濃度與DNA分離范圍分離范圍32電泳緩沖液電泳緩沖液 常用三種緩沖液常用三種緩沖液 Tris-硼酸（硼酸（TBE） Tris-乙酸（乙酸

19、（TAE） Tris-磷酸（磷酸（TPE） TBE與與TPE：緩沖容量高，：緩沖容量高，DNA分離分離效果好，但效果好，但TPE在在DNA片段回收時含片段回收時含磷酸鹽濃度高，容易使磷酸鹽濃度高，容易使DNA沉淀沉淀 TAE：緩沖容量低，但價格較便宜，：緩沖容量低，但價格較便宜，因而推薦選用因而推薦選用TAE。緩沖液中的。緩沖液中的 EDTA 可螯合二價陽離子，從而抑制可螯合二價陽離子，從而抑制DNA酶的活性，防止酶的活性，防止PCR擴增產(chǎn)物降擴增產(chǎn)物降解解33核酸電泳的指示劑核酸電泳的指示劑 指示劑：指示劑： 溴酚蘭溴酚蘭 二甲苯青二甲苯青 溴酚蘭：在堿性液體中呈紫蘭色溴酚蘭：在堿性液體中呈

20、紫蘭色 二甲苯青：水溶液呈蘭色二甲苯青：水溶液呈蘭色 電泳時，其遷移速率與雙鏈線性電泳時，其遷移速率與雙鏈線性DNA大致相當大致相當34載樣緩沖液載樣緩沖液 指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成組成載樣緩沖液載樣緩沖液 作用：作用： 增加樣品密度，使其比重增加，以確保增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)均勻沉入加樣孔內(nèi) 在電泳中形成肉眼可見的指在電泳中形成肉眼可見的指示帶，可預(yù)測核酸電泳的速度和位置示帶，可預(yù)測核酸電泳的速度和位置 使樣品呈色，使加樣操作更方便使樣品呈色，使加樣操作更方便35核酸電泳的染色劑核酸電泳的染色劑 最常用的染色劑最

21、常用的染色劑溴化乙錠溴化乙錠銀染色銀染色36蛋白電泳的染色劑蛋白電泳的染色劑 最常用的染色劑最常用的染色劑考馬斯亮藍考馬斯亮藍G 考馬斯亮藍考馬斯亮藍 R 37 溴化乙錠（溴化乙錠（ethidium bromide，EB） 是一種熒光染料，是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出鏈的堿基對之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光紅色熒光 可在凝膠電泳液中加入終濃度為可在凝膠電泳液中加入終濃度為0.5ug/ml的的EB，有時亦可在電泳后，將凝膠浸入，有時亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色該濃度的溶液中染色1015min 瓊脂糖凝膠瓊脂糖凝膠EB染

22、色，肉眼可見核酸電泳染色，肉眼可見核酸電泳帶，其帶，其DNA量一般量一般5ng 溴化乙錠太多，凝膠染色過深，核酸電泳溴化乙錠太多，凝膠染色過深，核酸電泳帶看不清時，可將凝膠放入蒸餾水浸泡帶看不清時，可將凝膠放入蒸餾水浸泡30min后再觀察后再觀察38 銀染色：銀染色液中的銀離子銀染色：銀染色液中的銀離子(Ag+)可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，然后用還原劑如甲醛使然后用還原劑如甲醛使Ag+還原成還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染色黑銀顆粒，可把核酸電泳帶染色黑褐色褐色 主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色，也用于瓊脂糖凝膠染色色，也用于瓊脂糖凝膠染色 靈敏

23、度比靈敏度比EB高高200倍，但銀染色倍，但銀染色后，后，DNA不宜回收不宜回收3940BIO-PROFIL凝膠成像分析系統(tǒng)凝膠成像分析系統(tǒng)41主要用途主要用途 瓊脂糖電泳，聚丙烯酰胺電泳，瓊脂糖電泳，聚丙烯酰胺電泳，DNA、RNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)1D2D電泳凝膠，電泳凝膠，Southern Northern和和Western印跡膜；印跡膜；點雜交膜；薄層層析板、點雜交膜；薄層層析板、TCL放射自放射自顯影膠片、菌落等樣品的圖像采集和顯影膠片、菌落等樣品的圖像采集和分析，可對核酸、蛋白質(zhì)的凝膠電泳分析，可對核酸、蛋白質(zhì)的凝膠電泳條帶進行分子量大小及含量分析。條帶進行分子量大小及含量分析。42基

24、本組成基本組成 密閉型機箱：密閉型機箱：一體化全封閉暗箱，設(shè)計精巧；最大程度上避一體化全封閉暗箱，設(shè)計精巧；最大程度上避免紫外線對人體的傷害。免紫外線對人體的傷害。 紫外透射臺：紫外透射臺：紫外光源波長紫外光源波長254/306/365nm，紫外透射面積，紫外透射面積20 x25cm。 白光板（可選）：白光板（可選）：透射面積透射面積20 x25cm 相機：相機： 帶積分功能高清晰黑白攝像頭；高分辨率數(shù)碼帶積分功能高清晰黑白攝像頭；高分辨率數(shù)碼相機；高分辨率專業(yè)數(shù)字黑白相機；高分辨率專業(yè)數(shù)字黑白CCD攝像頭。攝像頭。 鏡頭：鏡頭： 電動電動/自動鏡頭。自動鏡頭。43主要用途（主要用途（1） 圖

25、像獲取圖像獲取 圖像獲取容易圖像獲取容易 可以以多種格式存儲可以以多種格式存儲 獲取粘貼板上的圖像、與其它軟獲取粘貼板上的圖像、與其它軟件交換圖像資源件交換圖像資源 圖像復(fù)制功能，對所獲取的原始圖像復(fù)制功能，對所獲取的原始圖像進行剪切、復(fù)制圖像進行剪切、復(fù)制 44主要用途（主要用途（2） 圖像處理圖像處理 彩色圖像轉(zhuǎn)換為黑白灰度圖像彩色圖像轉(zhuǎn)換為黑白灰度圖像 圖像的鏡像和旋轉(zhuǎn)圖像的鏡像和旋轉(zhuǎn) 圖像反色、即負片效果圖像反色、即負片效果 圖像的對比度亮度調(diào)整圖像的對比度亮度調(diào)整 圖像的均勻化、平整區(qū)域、背景校正圖像的均勻化、平整區(qū)域、背景校正 圖像的銳化、柔化、羽化、強化物體圖像的銳化、柔化、羽化

26、、強化物體邊緣邊緣45主要用途（主要用途（3） 圖像分析圖像分析 條帶定位：提取圖象中的條帶信息，確定泳道中條帶定位：提取圖象中的條帶信息，確定泳道中是否有條帶存在并定位是否有條帶存在并定位 分子量計算：在輸入分子量計算：在輸入Mark泳道中各條帶的已知分泳道中各條帶的已知分子量后，由計算機求出指定未知條帶的分子量和子量后，由計算機求出指定未知條帶的分子量和bp值（堿基對數(shù)）。值（堿基對數(shù)）。 密度掃描：對指定泳道進行掃描，繪出掃描曲線，密度掃描：對指定泳道進行掃描，繪出掃描曲線，并計算出該泳道中各條帶的密度積分和峰高并計算出該泳道中各條帶的密度積分和峰高 背景去除：多種去背景的方法，并可對掃

27、描曲線背景去除：多種去背景的方法，并可對掃描曲線進行去背景后矯正進行去背景后矯正4647 離心機離心機48Avanti J-301高速冷凍離心機主要附件：主要附件：8*50ml角轉(zhuǎn)（角轉(zhuǎn)（Max 30000rpm） 10*100 ml角轉(zhuǎn)（角轉(zhuǎn)（Max 18000rpm）6*38.5 ml水平轉(zhuǎn)頭（水平轉(zhuǎn)頭（Max 24000rpm）49冷凍超速離心機 主要附件：主要附件：10*2ml角轉(zhuǎn)（角轉(zhuǎn)（Max 130000rpm） 8*8 ml角轉(zhuǎn)（角轉(zhuǎn)（Max 80000rpm）50工作原理工作原理離心機離心機:利用慣性離心力分離液態(tài)非均相混合物的機械。利用慣性離心力分離液態(tài)非均相混合物的機械。根

28、據(jù)分離方式可分為：根據(jù)分離方式可分為：過濾式過濾式 分離式分離式沉降式。沉降式。若被處理的物料為懸浮液就稱為離心沉降；若被處理的物料為懸浮液就稱為離心沉降；若被處理的物料為乳濁液稱為離心分離。若被處理的物料為乳濁液稱為離心分離。 51主要用途主要用途 主要用于各種生物大分子的分離、純主要用于各種生物大分子的分離、純化、濃縮（如對病毒、生物大分子、化、濃縮（如對病毒、生物大分子、高聚化合物沉降等）高聚化合物沉降等） 同時還可進行相對分子量的測定等。同時還可進行相對分子量的測定等。52轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子 固定角轉(zhuǎn)子固定角轉(zhuǎn)子 水平轉(zhuǎn)子水平轉(zhuǎn)子 離離心力公式：心力公式： G (xg) = 11.18 (rpm

29、/1000)2 x R R: radius rpm: round per minute53離心機的分類離心機的分類分離因數(shù)分離因數(shù)KC：離心力與重力之比（即離心力與重力之比（即U2T /Rg）根據(jù)根據(jù)KC 分為分為常速常速 KC 50000 （90000rpm)54離心機使用注意事項離心機使用注意事項 揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應(yīng)揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機腔或造成事故不外漏以免腐蝕機腔或造成事故 要等到轉(zhuǎn)速為零時才能打開離心要等到轉(zhuǎn)速為零時才能打開離心機蓋機蓋, ,取出樣品。取出樣品。55離心機的正確操作方法離心機的正確

30、操作方法 離心管的安放：平衡離心管的安放：平衡56離心速度的設(shè)定離心速度的設(shè)定 離心力與離心率離心力與離心率 離心速度必需根據(jù)離心樣品的平均離心速度必需根據(jù)離心樣品的平均密度確定密度確定 For Angle Rotor For Swing Rotor57使用后的維護與保養(yǎng) 注意腔底的周邊清潔注意腔底的周邊清潔58O O圈的作用圈的作用 密閉真空，防止樣品飛濺密閉真空，防止樣品飛濺 生物安全防護，阻止有害生物樣生物安全防護，阻止有害生物樣品外泄品外泄 增加蓋子與轉(zhuǎn)子體的阻尼，防止增加蓋子與轉(zhuǎn)子體的阻尼，防止蓋子松脫蓋子松脫59Thermo Forma高溫滅菌二氧化碳培養(yǎng)箱高溫滅菌二氧化碳培養(yǎng)箱6

31、0工作原理工作原理 通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細胞胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如：組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如： 恒定的酸堿度（恒定的酸堿度（pH值：值：7.2-7.4） 穩(wěn)定的溫度（穩(wěn)定的溫度（37C） 較高的相對濕度（較高的相對濕度（95%） 穩(wěn)定的穩(wěn)定的CO2水平（水平（5%） 來對細胞來對細胞/組織進行體外培養(yǎng)的一種裝置。組織進行體外培養(yǎng)的一種裝置。 61二氧化碳培養(yǎng)箱的基本的要求二氧化碳培養(yǎng)箱的基本的要求 一是能夠?qū)囟取⒍趸紳舛纫皇悄軌驅(qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供最精確穩(wěn)定的控制和濕度提供最精確穩(wěn)定的控制 二是能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污

32、二是能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進行有效的防范，并且能夠定染進行有效的防范，并且能夠定期消除污染期消除污染 62溫控系統(tǒng)溫控系統(tǒng) 溫度控制溫度控制 根據(jù)加熱方式分為氣套式和水套式根據(jù)加熱方式分為氣套式和水套式 具備相互獨立三重溫度控制功能的二氧具備相互獨立三重溫度控制功能的二氧化碳培養(yǎng)箱，即箱內(nèi)溫度控制、超溫報化碳培養(yǎng)箱，即箱內(nèi)溫度控制、超溫報警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。63二氧化碳濃度控制二氧化碳濃度控制 紅外傳感器（紅外傳感器（IR）或熱導(dǎo)傳感器）或熱導(dǎo)傳感器（TCD） 帶有帶有CO2測量系統(tǒng)自動校準功能測量系統(tǒng)自動校準功能64防污染設(shè)計和消毒滅菌系統(tǒng)防污染設(shè)計和消毒滅菌系統(tǒng) 紫外消毒紫外消毒 HEPA過濾器過濾器 高溫消毒高溫消毒 高溫干熱和高溫濕熱高溫干熱和高溫濕熱 65高壓消毒鍋高壓消毒鍋66相關(guān)概念介紹相關(guān)概念介紹 滅菌（滅菌（sterilization） 是指殺滅是指殺滅一切一切活的微生物?；畹奈⑸铩?消毒（消毒（disinfection） 是指殺滅是指殺滅病原病原微生物和其他有害微生微生物和其他有害微生 物，并不要求清除或殺滅所有微生物。物，并不要求清除或殺滅所有微生物。67方法方法 滅菌方法可分為四種：物理、機滅菌方