血管生成與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的相關(guān)性研究分享

1、真誠為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當(dāng)之處，請(qǐng)指正。摘要】 目的 探討微血管密度 (MVD) 和血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF) 在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)及在NSCLC預(yù)后中的價(jià)值。方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法研究43例NSCLC石蠟切片中MVD和 VEGF 的表達(dá)。結(jié)果 43例NSCLC石蠟標(biāo)本中，VEGF陽性率為53.5%(23/43)，且與MVD計(jì)數(shù)具有相關(guān)性。MVD計(jì)數(shù)與NSCLC組織學(xué)分化程度、T NM臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性。單因素生存分析顯示MVD、VEGF陽性表達(dá)的NSCLC患者術(shù)后生存期(OS)縮短(P<0.01);多因素 COX回歸分析顯示：MVD是NS

2、CLC患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。MVD高表達(dá)患者手術(shù)后死亡的相對(duì)危險(xiǎn)度是MVD低表達(dá)患者的34.247倍(似然比檢驗(yàn)，P<0.01)。結(jié)論 VEGF 對(duì)NSCLC腫瘤的血管生成可能起重要作用;MVD與NSCLC的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能是較強(qiáng)的獨(dú)立預(yù)后因子，MVD高的NSCLC患者預(yù)后不良。 【關(guān)鍵詞】 肺腫瘤;微血管密度;血管內(nèi)皮生長因子Relationship between angiogenesis and prognosis of nonsmall cell lung cancerHUANG LiNian, XIAO Wei, CHEN YuQing.Department of Resp

3、iratory, Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China【Abstract】 Objective To investigate the relation between microvessel density (MVD) and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and the value of MVD and VEGF expression in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). Methods MVD and VEGF e

4、xpression in tumor tissue from 43 cases of NSCLC were examined by immunohistochemistry methods. Results The positive expression of VEGF in 43 patients with NSCLC was 53.5%(23/43)，and it was significantly correlated with MVD count. MVD count had obvious relationship with NSCLC histology differentiati

5、on, TNM phage, lymphatic metastasis. The positive expressions of VEGF and MVD predicated shorter overall survival (OS). MVD was an independent prognostic factor of clinical outcome in NSCLC by multivariate analyses. The risk ratio of death was 34.247 fold of patients with MVD high expression compare

6、d with MVD lower expression (P<0.01). Conclusions VEGF might play an important role in NSCLC angiogenesis. MVD is closely correlated with NSCLC metastasis and might be an independent prognostic factor, the higher MVD，the worse prognosis.【Key words】 Lung cancer;Microvessel density;Vascular endothe

7、lial growth factor 肺癌的預(yù)后受多種因素的影響，傳統(tǒng)的TNM分期不能完全準(zhǔn)確地預(yù)測肺癌患者的預(yù)后，尋找新的判斷預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)是目前研究的熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移是一個(gè)依賴于血管生成的過程，腫瘤新生血管的形成與腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前公認(rèn)的腫瘤血管生成最重要的刺激因子，在多種實(shí)體腫瘤中存在高表達(dá)1，2。但腫瘤血管生成和血管浸潤在肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后中的作用國內(nèi)外報(bào)道不一37。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法觀察非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中微血管密度(MVD) 和VEGF的表達(dá)及其相關(guān)性，探討MVD和VEGF與NSCLC生物

8、學(xué)行為的關(guān)系及對(duì)NSCLC預(yù)后的影響。1 對(duì)象與方法1.1 對(duì)象 43例NSCLC標(biāo)本取自蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1996年1月至1999年1月之間的手術(shù)標(biāo)本，術(shù)前未行放、化療。其中男性36例，女性7例;年齡4076歲，平均(58.9±8.75)歲;鱗癌33例，腺癌10例。依據(jù)1981年WHO制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行肺癌組織學(xué)分型，按1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)修訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分類和分期。TNM臨床分期：期16例，期15例，期12例。每位患者自手術(shù)日開始計(jì)算生存期至5年或至死亡(不滿5年者)，時(shí)間最短者為3個(gè)月，最長為60個(gè)月，中位時(shí)間27個(gè)月，其中1例因搬遷情況不明。1.2 方法1.2.

9、1 主要試劑 VEGF單克隆抗體、CD34單克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶免疫組化染色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司。1.2.2 免疫組化 每塊石蠟標(biāo)本重新制備4 m厚切片4張，1張行HE染色，用以核實(shí)病理診斷;1張用于VEGF免疫組化染色;1張用于CD34免疫組化染色，1張用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知乳腺癌陽性切片作陽性對(duì)照。免疫組化染色(SP法)按常規(guī)操作規(guī)程進(jìn)行。1.2.3 MVD方法及結(jié)果判定 參照Weidner等8報(bào)道的方法。MVD 計(jì)數(shù)時(shí)先用低倍物鏡(10倍)觀察，尋找微血管最多的區(qū)域，然后用高倍物鏡(200倍)計(jì)數(shù)3個(gè)視野，取其平均值作為MVD。微血管可為單個(gè)或一

10、簇棕色的細(xì)胞，可有或無管腔。凡血管直徑大于8個(gè)紅細(xì)胞或血管壁帶有明顯肌層以及纖維硬化、炎癥及壞死區(qū)的微血管均不能計(jì)入總數(shù)。MVD閾值確定：參照文獻(xiàn)報(bào)道9，判斷MVD的閾值一般與該組的MVD均值基本一致，MVD閾值為“MVD高表達(dá)組”或“MVD+”，1.2.4 VEGF結(jié)果判定 參考Mattern10方法，從陽性染色深度(未著色0分，輕度著色1分，中度著色2分，重度著色3分)和每一組織切片中陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比(05% 為0分，6%25%為1分，26%50%為2分，> 50%為3分) 兩個(gè)方面判斷，兩者相加，得分02分判定為陰性表達(dá)，36分判定為陽性表達(dá)。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SP

11、SS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)、單因素方差分析。計(jì)量資料采用2 檢驗(yàn)。Kaplanmeier法分析生存期并經(jīng)Logrank檢驗(yàn);COX模型(似然比檢驗(yàn))用于多因素預(yù)后分析。2 結(jié) 果2.1 NSCLC中MVD分布和VEGF表達(dá)情況 43例NSCLC的MVD均值為(31.98±14.93)個(gè)/200倍視野，在癌組織內(nèi)及癌組織周圍均可見微血管分布，但以癌組織與正常組織交界處(即癌組織周圍的基質(zhì)) 血管密度最高。VEGF陽性顆粒定位于腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈棕黃色，在同一個(gè)癌巢中，VEGF 染色陽性細(xì)胞分布不均勻，其表達(dá)陽性腫瘤細(xì)胞主要位于腫瘤浸潤區(qū)域(圖1

12、)。NSCLC中VEGF陽性表達(dá)率為53.5% (23/43)。MVD及VEGF表達(dá)與NSCLC臨床病理關(guān)系見表1。2.2 NSCLC中MVD分布和VEGF表達(dá)的關(guān)系 VEGF陽性表達(dá)組MVD值為(42.83±11.915)個(gè)/200倍視野，VEGF陰性表達(dá)組MVD值為(19.50±5.726)/個(gè)200倍視野，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)。2.3 MVD、VEGF表達(dá)與預(yù)后 將患者年齡、性別、TNM臨床分期、MVD、VEGF表達(dá)等指標(biāo)進(jìn)行COX 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，顯示MVD是影響NSCLC預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，MVD高表達(dá)組患者手術(shù)后死亡的相對(duì)危險(xiǎn)度是MVD

13、低表達(dá)組患者的34.247倍(似然比檢驗(yàn)，P<0.01)。運(yùn)用KaplanMeier 法對(duì)隨訪資料分析，結(jié)果顯示NSCLC術(shù)后生存期除與TNM臨床分期、病理組織學(xué)分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小明顯相關(guān)外，NSCLC術(shù)后平均生存時(shí)間及中位生存期MVD高表達(dá)組明顯低于低表達(dá)組，VEGF陽性表達(dá)組明顯低于陰性表達(dá)組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2,表3。表1 MVD、VEGF表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系與腫塊直徑3 cm組比較：1)P<0.05，與組織分化、級(jí)比較：2)P<0.01，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組比較：3)P<0.01，、期之間兩兩比較：4)P<

14、0.01表2 MVD與NSCLC生存期的關(guān)系對(duì)數(shù)秩和檢驗(yàn)：2=43.207，P<0.01表3 VEGF與NSCLC生存期的關(guān)系對(duì)數(shù)秩和檢驗(yàn)：2=41.131，P<0.013 討 論研究表明腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟過程，新生的微血管是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的第一站，隨著腫瘤MVD的增加，腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等惡性潛能也明顯增加。Wendum11等報(bào)告MVD可作為預(yù)測直腸癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的一項(xiàng)指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，MVD計(jì)數(shù)與NSCLC組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期相關(guān)，組織學(xué)分化級(jí)明顯高于、級(jí);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于非轉(zhuǎn)移組;TNM臨床分期愈晚，MVD計(jì)數(shù)愈高，說明腫瘤血管增生越活躍，越促進(jìn)癌細(xì)胞的合

15、成代謝，為腫瘤細(xì)胞的快速增長及物質(zhì)代謝提供物質(zhì)基礎(chǔ)，血管生成在NSCLC的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，MVD能較好的反映NSCLC 的惡性程度及轉(zhuǎn)移情況。VEGF是促血管活性因子，與受體結(jié)合后導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖、 遷移，促進(jìn)腫瘤新生血管形成12，13。本研究中43例NSCLC癌組織中VEGF的陽性表達(dá)率為53.5%，并且VEGF陽性表達(dá)與瘤體大小、TNM臨床分期顯著相關(guān)，瘤體大、TNM臨床分期晚，VEGF陽性表達(dá)率高，這可能是由于腫瘤體積愈大，臨床分期愈晚，腫瘤組織也愈缺氧，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)。VEGF陽性表達(dá)與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽性表達(dá)率高，提示具有

16、轉(zhuǎn)移發(fā)展趨向的腫瘤組織中VEGF表達(dá)明顯增高，VEGF 可促進(jìn)肺癌早期的浸潤轉(zhuǎn)移行為。在本研究中，VEGF陽性表達(dá)在不同NSCLC組織分化程度間未顯示顯著性差異，這或許和各期病例較少有關(guān)，還需進(jìn)一步證實(shí)。本研究也觀察到VEGF陽性表達(dá)與腫瘤組織中的MVD顯著增加，兩者存在顯著正相關(guān)，提示VEGF有促進(jìn)NSCLC 腫瘤血管形成的作用。本研究對(duì)43 例NSCLC患者隨訪5年進(jìn)行單因素的預(yù)后分析，結(jié)果顯示VEGF表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)與患者生存期均顯著相關(guān)。VEGF陽性組患者平均生存時(shí)間明顯低于VEGF陰性組，分別為17.4個(gè)月和55.5個(gè)月;MVD高表達(dá)組患者平均生存時(shí)間明顯低于MVD低表達(dá)組，分別為1

17、7.2個(gè)月和55.5個(gè)月;患者中位生存期VEGF陽性組明顯低于VEGF陰性組，分別為16.0個(gè)月60.0個(gè)月; MVD高表達(dá)組患者中位生存期明顯低于MVD低表達(dá)組，分別為16.0個(gè)月和60.0個(gè)月?；颊咂骄鏁r(shí)間與中位生存期在VEGF陽性組和陰性組、MVD高表達(dá)組和低表達(dá)組均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與文獻(xiàn)報(bào)道一致5，14。將年齡、TNM分期、MVD、VEGF等因素進(jìn)行COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，顯示MVD是影響NSCLC預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，MVD高表達(dá)組手術(shù)后死亡的相對(duì)危險(xiǎn)度是MVD低表達(dá)組的34.247倍。說明MVD較好地反映了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，與血管形成促進(jìn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的理論是相吻合的。

18、綜上所述，VEGF的表達(dá)與MVD相關(guān)，MVD和VEGF的表達(dá)均與NSCLC的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，VEGF表達(dá)水平及MVD的檢測可以成為NSCLC惡性程度與預(yù)后的重要指標(biāo)，有助于篩選出高?；颊撸瑢?duì)高表達(dá)者應(yīng)加強(qiáng)隨訪及術(shù)后綜合治療以提高其生存時(shí)間和生存質(zhì)量。【參考文獻(xiàn)】1 金倩;氯地酊聯(lián)合激光治療痤瘡158例療效觀察J;廣東醫(yī)學(xué);1997年10期 2 董新亭,李衛(wèi)莉,張隨學(xué);自擬粉刺消治療痤瘡126例J;中國中醫(yī)藥科技;1999年06期 3 查旭山,陳修飏;尋常痤瘡治療體會(huì)J;江西中醫(yī)藥;bbb:/aaayixue68aaa/xyfm/class/.2002年05期 4 張隨學(xué) ,譚正輝 ,孫葉梅 ,李

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