第10章 經(jīng)典液相色譜法ppt課件

1、 經(jīng)典液相色譜法 藥物分析教研室 本章內(nèi)容本章內(nèi)容第第1 1節(jié)節(jié) 液液- -固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法 第第2 2節(jié)節(jié) 液液- -液分配柱色譜法液分配柱色譜法 第第3 3節(jié)節(jié) 離子交換色譜法離子交換色譜法 第第4 4節(jié)節(jié) 空間排阻色譜法空間排阻色譜法 第第5 5節(jié)節(jié) 薄層色譜法薄層色譜法 第第6 6節(jié)節(jié) 紙色譜法紙色譜法 要求要求 1.掌握液相色譜技術(shù)的掌握液相色譜技術(shù)的基本原理?；驹?。 2.熟悉吸附等溫線。熟悉吸附等溫線。 3.了解液相色譜技術(shù)的了解液相色譜技術(shù)的基本操作?；静僮鳌?概概 述述定義定義 分類分類 按操作形式按操作形式 按分離機(jī)理按分離機(jī)理 按分離效率按分離效率定義：定

2、義：以液體為流動相的色譜法以液體為流動相的色譜法稱為液相色譜法。稱為液相色譜法。 柱色譜法操作形式 平面色譜法 吸附色譜法 分配色譜法分離機(jī)理 離子交換色譜法 空間排阻色譜法 經(jīng)典液相色譜法分離效率 現(xiàn)代液相色譜法 經(jīng)典液相色譜法：經(jīng)典液相色譜法： 是在常壓下靠重力或毛細(xì)作用輸是在常壓下靠重力或毛細(xì)作用輸送流動相的色譜方法。送流動相的色譜方法。 經(jīng)典柱色譜法經(jīng)典柱色譜法 平面色譜法。平面色譜法。 經(jīng)典與現(xiàn)代的區(qū)別主要在：經(jīng)典與現(xiàn)代的區(qū)別主要在： 輸送流動相方式輸送流動相方式 固定相規(guī)格固定相規(guī)格 分離效能分離效能 分析速度分析速度 檢測靈敏度檢測靈敏度 第第1節(jié)節(jié) 液液-固吸附柱色譜法固吸附柱

3、色譜法 一一. 基本原理基本原理 二二. 吸附劑吸附劑 三三. 色譜條件的選擇色譜條件的選擇 四四. 操作方法操作方法 吸附色譜法：一種溶質(zhì)基于吸吸附色譜法：一種溶質(zhì)基于吸附現(xiàn)象而獲得分離的液附現(xiàn)象而獲得分離的液-固色譜固色譜分析方法。分析方法。 用于分離分析極性至弱極性的用于分離分析極性至弱極性的化合物，不適用于分離分析強(qiáng)化合物，不適用于分離分析強(qiáng)極性的物質(zhì)。極性的物質(zhì)。 經(jīng)典的液經(jīng)典的液固吸附色譜固吸附色譜LSC）：）： 以吸附劑為固定相，有機(jī)溶劑為流動以吸附劑為固定相，有機(jī)溶劑為流動相，利用不同組分在吸附劑上吸附性能相，利用不同組分在吸附劑上吸附性能的差異，進(jìn)行分離分析的方法。的差異，進(jìn)

4、行分離分析的方法。 柱色譜法：柱色譜法： 將固定相裝于柱管內(nèi)就構(gòu)成色譜柱，將固定相裝于柱管內(nèi)就構(gòu)成色譜柱，色譜過程在柱內(nèi)進(jìn)行的一類色譜方法。色譜過程在柱內(nèi)進(jìn)行的一類色譜方法。 根據(jù)根據(jù) 吸附過程的兩個規(guī)律：吸附過程的兩個規(guī)律： 1 )吸附劑對不同物質(zhì)的吸附吸附劑對不同物質(zhì)的吸附行為有差異。行為有差異。 2 ) 吸附過程是可逆的，存吸附過程是可逆的，存在著吸附在著吸附 解吸附的動態(tài)解吸附的動態(tài)平衡。平衡。 一一.基本原理基本原理（一吸附與吸附平衡（一吸附與吸附平衡（二吸附等溫線（二吸附等溫線（一吸附與吸附平衡（一吸附與吸附平衡流動相通過固定相時，吸附劑表面流動相通過固定相時，吸附劑表面的活性中心

5、吸附流動相分子，當(dāng)組的活性中心吸附流動相分子，當(dāng)組分分子進(jìn)入柱子時，會趕走流動相分分子進(jìn)入柱子時，會趕走流動相分子而占據(jù)吸附劑的活性中心位，分子而占據(jù)吸附劑的活性中心位，即組分被吸附。即組分被吸附。反之，溶劑分子也可把溶質(zhì)分子趕反之，溶劑分子也可把溶質(zhì)分子趕走，即解吸附。走，即解吸附。 吸附平衡常數(shù)吸附平衡常數(shù)K Cs為溶質(zhì)在固定相的濃度為溶質(zhì)在固定相的濃度 Cm為溶質(zhì)在流動相中的濃度。為溶質(zhì)在流動相中的濃度。 吸附平衡常數(shù)吸附平衡常數(shù)K是與組分的性是與組分的性質(zhì)、吸附劑和流動相的性質(zhì)與質(zhì)、吸附劑和流動相的性質(zhì)與溫度有關(guān)的一個常數(shù)。溫度有關(guān)的一個常數(shù)。mms sC CC C溶質(zhì)在流動相中的濃度

6、溶質(zhì)在流動相中的濃度溶質(zhì)在固定相中的濃度溶質(zhì)在固定相中的濃度K K 不同溶質(zhì)不同溶質(zhì)K值不同，值不同，K值決定色譜值決定色譜特性。特性。 K值大，吸附牢移動速度慢，較后值大，吸附牢移動速度慢，較后洗出；洗出； K=0，不被固定相吸附。，不被固定相吸附。 在進(jìn)行色譜條件選擇的時候，要在進(jìn)行色譜條件選擇的時候，要盡量使混合組分的盡量使混合組分的K值相差較大，值相差較大，混合樣品就可以達(dá)到分離?；旌蠘悠肪涂梢赃_(dá)到分離。 （二吸附等溫線（二吸附等溫線 1. 定定 義義 2. 應(yīng)應(yīng) 用用 3. 分分 類類1. 定定 義義指在一定溫度下，某一組分在指在一定溫度下，某一組分在固定固定相和流動相之間達(dá)到平衡時

7、，相和流動相之間達(dá)到平衡時，組分組分在固定相中的濃度在固定相中的濃度Cs對組分在對組分在流動流動相中的濃度相中的濃度Cm作圖得到的曲作圖得到的曲線，用線，用函數(shù)描述為函數(shù)描述為Cs=fCm）。）。2.特性特性等溫線形狀是重要色譜特性之等溫線形狀是重要色譜特性之一。一。反映一定溫度下，吸附劑對溶反映一定溫度下，吸附劑對溶液中某一組分的吸附能力。液中某一組分的吸附能力。描述組分在兩相中濃度間的關(guān)描述組分在兩相中濃度間的關(guān)系。系。對某一體系，組分的分布取決對某一體系，組分的分布取決于吸附等溫線。于吸附等溫線。3. 分分 類類 直線型直線型理想理想等溫線類型等溫線類型 凸型凸型多多數(shù)數(shù) 非線型非線型

8、凹型凹型低濃度時，每種等溫線均呈線低濃度時，每種等溫線均呈線型型高濃度時，等溫線會發(fā)生彎曲，高濃度時，等溫線會發(fā)生彎曲，呈凸型或凹型。呈凸型或凹型。 吸附等溫線的形狀和色譜特性圖吸附等溫線的形狀和色譜特性圖（1線型吸附等溫線線型吸附等溫線 定義：達(dá)到平衡時，組分在固定義：達(dá)到平衡時，組分在固定相中的濃度定相中的濃度Cs與其在流動相中與其在流動相中濃度濃度Cm成正比，直線斜率為成正比，直線斜率為KCs/Cm，其吸附等溫線為線型。，其吸附等溫線為線型。 特點：特點：a.組分移動速度依賴于組分移動速度依賴于K的大小，分離時移動速度不變，的大小，分離時移動速度不變，K越大移動速度越慢越大移動速度越慢

9、。b. 流出曲流出曲線呈對稱形。線呈對稱形。c.前不伸舌，后不前不伸舌，后不拖尾。拖尾。 （2凸型吸附等溫線 定義： K值隨組分濃度增加逐漸減小，其吸附等溫線呈凸型。 特點：隨著流動相中組分濃度增大相對吸附量緩慢減小，tR變小，色譜流出峰的極大值偏向譜帶前沿，導(dǎo)致峰形拖尾。 原因之一：吸附劑表面活性中原因之一：吸附劑表面活性中心的不均一性。心的不均一性。 溶質(zhì)在不同吸附點位上溶質(zhì)在不同吸附點位上K不同。不同。溶質(zhì)分子總是先占據(jù)吸附力強(qiáng)的溶質(zhì)分子總是先占據(jù)吸附力強(qiáng)的點位點位K值大），再占據(jù)吸附力值大），再占據(jù)吸附力弱的點位弱的點位K值?。?，所以值?。?，所以K值值會在強(qiáng)吸附力點位被飽和后隨著會在強(qiáng)

10、吸附力點位被飽和后隨著溶質(zhì)濃度的增加而逐漸減小，使溶質(zhì)濃度的增加而逐漸減小，使吸附等溫線呈凸型吸附等溫線呈凸型 。 防止拖尾的方法：防止拖尾的方法： 在色譜分析中控制組分的量，使在色譜分析中控制組分的量，使其在一定的線性范圍。其在一定的線性范圍。 在流動相中加入水、醇等極性緩在流動相中加入水、醇等極性緩和劑，擴(kuò)大吸附劑的線性范圍。和劑，擴(kuò)大吸附劑的線性范圍。（ 降低吸附劑的活性，使吸附劑降低吸附劑的活性，使吸附劑表面活性中心趨于均勻。）表面活性中心趨于均勻。） 在吸附劑表面進(jìn)行化學(xué)改性如在吸附劑表面進(jìn)行化學(xué)改性如鍵合）鍵合） 。（3凹型吸附等溫線凹型吸附等溫線 定義：定義： K值隨組分濃度增加

11、而逐值隨組分濃度增加而逐漸增加，其吸附等溫線呈凹型。漸增加，其吸附等溫線呈凹型。 特點：溶質(zhì)在低濃度時不易被吸特點：溶質(zhì)在低濃度時不易被吸附，到一定濃度后吸附能力明顯增附，到一定濃度后吸附能力明顯增強(qiáng)，強(qiáng)，tR變大，色譜流出峰極大值偏變大，色譜流出峰極大值偏向譜帶的后部，導(dǎo)致峰形伸舌。向譜帶的后部，導(dǎo)致峰形伸舌。 二二. 吸附劑吸附劑1.對吸附劑的要求對吸附劑的要求2.常用吸附劑常用吸附劑3. 吸附劑的活性吸附劑的活性1.對吸附劑的要求對吸附劑的要求1要有一定的細(xì)度且粒度要要有一定的細(xì)度且粒度要均勻均勻2具有較大的吸附表面積和具有較大的吸附表面積和一定的吸附能力一定的吸附能力3與洗脫劑、樣品不

12、起化學(xué)與洗脫劑、樣品不起化學(xué)反應(yīng)，且不溶于洗脫劑中反應(yīng)，且不溶于洗脫劑中2. 常用吸附劑常用吸附劑 有機(jī)類：有機(jī)類： 活性炭、淀粉、蔗糖等、活性炭、淀粉、蔗糖等、 吸附劑吸附劑 聚酰胺、大孔樹脂。聚酰胺、大孔樹脂。 無機(jī)類：無機(jī)類： 氧化鋁、硅膠、硫酸鈣、氧化鋁、硅膠、硫酸鈣、 滑石粉、硅藻土等?；?、硅藻土等。 1硅硅 膠膠SiO2xH2O)優(yōu)點：適用于各類樣品的分離優(yōu)點：適用于各類樣品的分離吸附能力：取決于骨架表面的硅吸附能力：取決于骨架表面的硅羥基羥基吸附機(jī)理：硅膠表面羥基作為質(zhì)吸附機(jī)理：硅膠表面羥基作為質(zhì)子給予體，通過氫鍵形式將溶質(zhì)子給予體，通過氫鍵形式將溶質(zhì)吸附在硅膠表面。吸附在硅

13、膠表面。硅膠具有弱酸性，可選擇性地保硅膠具有弱酸性，可選擇性地保留胺類和其它堿性化合物。留胺類和其它堿性化合物。活化溫度：活化溫度：1051102） 氧化鋁氧化鋁優(yōu)點：分離能力強(qiáng)、活性可控優(yōu)點：分離能力強(qiáng)、活性可控分類：酸性、中性、堿性，以中分類：酸性、中性、堿性，以中性氧化鋁使用較多。性氧化鋁使用較多。用處：分離生物堿、揮發(fā)油、萜用處：分離生物堿、揮發(fā)油、萜類、甾體、蒽醌以及在酸堿中不類、甾體、蒽醌以及在酸堿中不穩(wěn)定的苷類、醌、內(nèi)酯等化合物。穩(wěn)定的苷類、醌、內(nèi)酯等化合物。活化溫度：活化溫度：2004003 3聚酰胺聚酰胺 常用：聚己內(nèi)酰胺，常用：聚己內(nèi)酰胺， 作用機(jī)理：形成氫鍵作用機(jī)理：形成

14、氫鍵（1 1酰胺基中的羰基與酚類、黃酮類、酰胺基中的羰基與酚類、黃酮類、酚類中的羥基或羧基形成氫鍵；酚類中的羥基或羧基形成氫鍵；（2 2酰胺基中的氨基與醌類、硝基類酰胺基中的氨基與醌類、硝基類中的醌基、硝基形成氫鍵而產(chǎn)生吸附中的醌基、硝基形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用。作用。 4 4大孔吸附樹脂大孔吸附樹脂 一種不含交換基團(tuán)，具有大孔網(wǎng)狀結(jié)一種不含交換基團(tuán)，具有大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。構(gòu)的高分子吸附劑。 非極性和中等極性兩類。非極性和中等極性兩類。3 吸附劑硅膠、氧化鋁的活性吸附劑硅膠、氧化鋁的活性吸附劑的活性與含水量有一定的吸附劑的活性與含水量有一定的關(guān)系。關(guān)系。含水量愈高，其吸附活性愈低，含水

15、量愈高，其吸附活性愈低，活性級數(shù)愈大，吸附力就愈弱?；钚约墧?shù)愈大，吸附力就愈弱。含水量愈低，其吸附活性愈高，含水量愈低，其吸附活性愈高，活性級數(shù)愈小，吸附力就愈強(qiáng)?；钚约墧?shù)愈小，吸附力就愈強(qiáng)。所以吸附劑在用前須先經(jīng)過活化所以吸附劑在用前須先經(jīng)過活化處理。處理。 活化：在一定溫度下，加熱除活化：在一定溫度下，加熱除去水分以增強(qiáng)活性的過程。去水分以增強(qiáng)活性的過程。 失活：在一定溫度下，加入一失活：在一定溫度下，加入一定量水分使吸附劑活性降低的定量水分使吸附劑活性降低的過程稱為失活。過程稱為失活。硅膠含水量()活性級別氧化鋁含水量()005315625103815三三. . 色譜條件的選擇色譜條件的

16、選擇在液在液- -固色譜中，除了正確選擇吸固色譜中，除了正確選擇吸附附劑外，還可以通過流動相的選擇劑外，還可以通過流動相的選擇來改變來改變K K值，或改變一對化合物的值，或改變一對化合物的K K值比，值比，從而從而使它們的使它們的K K值有最大的差別而達(dá)值有最大的差別而達(dá)到分離到分離. .流動相在色譜分析中除了起著溶流動相在色譜分析中除了起著溶質(zhì)通過質(zhì)通過色譜柱的作用，還影響著溶質(zhì)的色譜柱的作用，還影響著溶質(zhì)的分配系分配系數(shù)，所以在色譜分析中流動相的數(shù)，所以在色譜分析中流動相的選擇也選擇也很重要。很重要。 極性較大的化合物可以比較強(qiáng)的從溶液中被吸附劑吸附，需要極性較大的洗脫劑才能洗脫下來。常見

17、化合物按其極性由小到大常見化合物按其極性由小到大順序為：順序為：烷烴烯烴醚硝基化合物烷烴烯烴醚硝基化合物二甲胺酯類酮類醛類二甲胺酯類酮類醛類硫醇胺類酰胺類醇硫醇胺類酰胺類醇類酚類羧酸類。類酚類羧酸類。 常用溶劑的極性順序為：常用溶劑的極性順序為： 石油醚環(huán)己烷四氯化碳石油醚環(huán)己烷四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯烷乙醚氯仿乙酸乙酯丙酮正丁醇乙醇甲醇丙酮正丁醇乙醇甲醇水乙酸等。水乙酸等。選擇色譜分離條件時，必須從選擇色譜分離條件時，必須從吸附劑、被分離物質(zhì)、流動相吸附劑、被分離物質(zhì)、流動相三方面綜合考慮。三方面綜合考慮。 四四. 操作方法操作方法 1色譜柱的制備色

18、譜柱的制備 2加樣與洗脫加樣與洗脫 3檢出檢出第第2 2節(jié)節(jié) 分配柱色譜法分配柱色譜法基本原理基本原理載體載體固定相及其選擇固定相及其選擇流動相及其選擇流動相及其選擇操作方法操作方法優(yōu)點優(yōu)點吸附色譜主要適用于親脂性物質(zhì)吸附色譜主要適用于親脂性物質(zhì)的分離的分離, , 分配色譜即適用于親脂分配色譜即適用于親脂性物質(zhì)的分離，亦適性物質(zhì)的分離，亦適 用于親水用于親水性物質(zhì)的分離性物質(zhì)的分離有較好的重現(xiàn)性，可根據(jù)有較好的重現(xiàn)性，可根據(jù)K K值預(yù)值預(yù)示分離結(jié)果示分離結(jié)果分配等溫線多為直線型，峰形對分配等溫線多為直線型，峰形對稱稱流動相易于選擇流動相易于選擇 一一. . 基本原理基本原理一種基于不同組分在流

19、動相和一種基于不同組分在流動相和固定相之間分配系數(shù)的差異而固定相之間分配系數(shù)的差異而使之分離的色譜分析方法。使之分離的色譜分析方法。( (固定相：載體加固定液固定相：載體加固定液將某種溶劑涂布在吸附劑顆粒將某種溶劑涂布在吸附劑顆粒表面或紙纖維上，形成一層液表面或紙纖維上，形成一層液膜，稱為固定液，吸附劑顆粒膜，稱為固定液，吸附劑顆?；蚣埨w維稱為支持劑或載體、或紙纖維稱為支持劑或載體、擔(dān)體。擔(dān)體。) ) u亦有三種分配等溫線，但以直線亦有三種分配等溫線，但以直線型等溫線最普遍。型等溫線最普遍。u分配作用的描述采用溶劑極性分配作用的描述采用溶劑極性“類似類似 相溶相溶”u適用于各類型化合物，尤其是

20、極適用于各類型化合物，尤其是極性大的組分性大的組分mms sD DC CC C溶質(zhì)在流動相中的濃度溶質(zhì)在流動相中的濃度溶質(zhì)在固定相中的濃度溶質(zhì)在固定相中的濃度K K 物理意義：當(dāng)達(dá)到平衡時，溶質(zhì)從物理意義：當(dāng)達(dá)到平衡時，溶質(zhì)從一種溶劑進(jìn)入另一種溶劑的速度與一種溶劑進(jìn)入另一種溶劑的速度與由另一種溶劑中出來的速度相等。由另一種溶劑中出來的速度相等。 分配等溫線在較大濃度范圍內(nèi)呈分配等溫線在較大濃度范圍內(nèi)呈線性，即分配色譜中以直線型分線性，即分配色譜中以直線型分配等溫線最普遍，其洗脫峰峰形配等溫線最普遍，其洗脫峰峰形對稱而尖銳。對稱而尖銳。 在分配色譜中，用溶劑極性來描在分配色譜中，用溶劑極性來描述

21、分配作用的。述分配作用的。 二二. .載體載體 在分配色譜法中載體只在分配色譜法中載體只起負(fù)載固定相的作用。起負(fù)載固定相的作用。1. 1.對載體的要求對載體的要求2.2.常用的載體常用的載體 1. 對載體的要求對載體的要求:化學(xué)惰性化學(xué)惰性對固定液有較強(qiáng)吸附性，但對對固定液有較強(qiáng)吸附性，但對組分無吸附性組分無吸附性顆粒大小均勻，純真。顆粒大小均勻，純真。（1硅膠：它可以吸收相當(dāng)于本身硅膠：它可以吸收相當(dāng)于本身重量的重量的50%以上的水仍不顯濕狀。以上的水仍不顯濕狀。（2硅藻土：是現(xiàn)在應(yīng)用最多的載硅藻土：是現(xiàn)在應(yīng)用最多的載體，由于硅藻土中氧化硅性質(zhì)較為體，由于硅藻土中氧化硅性質(zhì)較為致密，幾乎不發(fā)

22、生吸附作用。致密，幾乎不發(fā)生吸附作用。（3纖維素：是紙色譜的載體，也纖維素：是紙色譜的載體，也是分配柱色譜常用的載體。是分配柱色譜常用的載體。此外，還有淀粉，近幾年來有采用此外，還有淀粉，近幾年來有采用有機(jī)載體，如微孔聚乙烯粉等。有機(jī)載體，如微孔聚乙烯粉等。 1. 分配色譜法的分類分配色譜法的分類 2. 正相與反相的比較正相與反相的比較 3. 固定相及其選擇固定相及其選擇1. 分配色譜法的分類分配色譜法的分類正相分配色譜：正相分配色譜： 固定相的極性大于流動相。固定相的極性大于流動相。反相分配色譜：反相分配色譜： 固定相的極性小于流動相。固定相的極性小于流動相。正相色譜法與反相色譜法的比較 （

23、1在正相分配色譜法中，固定相在正相分配色譜法中，固定相有水、各種緩沖劑、稀硫酸、甲醇、有水、各種緩沖劑、稀硫酸、甲醇、甲酰胺、丙二醇等強(qiáng)極性溶劑及它甲酰胺、丙二醇等強(qiáng)極性溶劑及它們的混合液等。們的混合液等。（2在反相分配色譜中，常以硅油、在反相分配色譜中，常以硅油、液體石蠟等極性較小的有機(jī)溶劑作液體石蠟等極性較小的有機(jī)溶劑作為固定液。為固定液。 正相色譜法常用的流動相：石油醚、正相色譜法常用的流動相：石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵代烷類、苯醇類、酮類、酯類、鹵代烷類、苯等或它們的混合物。等或它們的混合物。 反相色譜法常用的流動相則為正相色反相色譜法常用的流動相則為正相色譜法中的固定液如：水、各種

24、水溶譜法中的固定液如：水、各種水溶液包括酸、堿、鹽及緩沖液）、液包括酸、堿、鹽及緩沖液）、低級醇類等。低級醇類等。 1固定液的涂布與裝柱固定液的涂布與裝柱 2加樣和洗脫加樣和洗脫 3應(yīng)用應(yīng)用 u定義：定義：u 以離子交換劑為固定相，用水或與水混以離子交換劑為固定相，用水或與水混合的溶劑為流動相，根據(jù)離子交換劑對各合的溶劑為流動相，根據(jù)離子交換劑對各組分離子親合力的不同而使其分離的方法組分離子親合力的不同而使其分離的方法稱為離子交換色譜法稱為離子交換色譜法(ion exchange chromatography)。u目前應(yīng)用最多的目前應(yīng)用最多的-離子交換樹脂離子交換樹脂u包括基體離子和可交換離子

25、包括基體離子和可交換離子u分類：陽離子交換樹脂，含分類：陽離子交換樹脂，含-SO3H-COOHu 陰離子交換樹脂，含陰離子交換樹脂，含-NH2，NHRu規(guī)律：組分離子對基體離子的親合力越大，規(guī)律：組分離子對基體離子的親合力越大，即交換能力越強(qiáng)，就越易交換到離子交換即交換能力越強(qiáng)，就越易交換到離子交換劑上，保留時間就越長。劑上，保留時間就越長。u除去干擾離子除去干擾離子-如水的純化如水的純化u鹽類的測定鹽類的測定 ：H+R-+M+A- M+R-+H+A-交換下來的交換下來的H+用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定，用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定，如無機(jī)做過的如無機(jī)做過的Ksp(PbCl2)u痕量元素的富集：如牛奶中的含銅量測定痕

26、量元素的富集：如牛奶中的含銅量測定u 先用離子交換柱吸附銅離子，再用洗脫先用離子交換柱吸附銅離子，再用洗脫劑洗脫劑洗脫u定義：定義：u 利用某些凝膠對不同組分因分子大小不同利用某些凝膠對不同組分因分子大小不同而阻滯作用不同的差異而進(jìn)行分離的方法稱而阻滯作用不同的差異而進(jìn)行分離的方法稱為分子排阻色譜法為分子排阻色譜法(gel chromatography)。u實質(zhì)：分子篩效應(yīng)實質(zhì)：分子篩效應(yīng)葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠瓊脂糖凝膠瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠LH-20聚苯乙烯凝膠聚苯乙烯凝膠親水性凝膠親水性凝膠親脂性凝膠親脂性凝膠u脫鹽脫鹽-蛋白質(zhì)的脫鹽蛋白質(zhì)的脫鹽u濃縮濃縮

27、 ：海水中濃縮少量的：海水中濃縮少量的VB12u去熱源：去除注射劑中的熱源去熱源：去除注射劑中的熱源u測定分子量及高聚物的分子量的分布情測定分子量及高聚物的分子量的分布情況：先作校正曲線況：先作校正曲線VR=K1-K2LogM 一、基本原理一、基本原理二、固定相二、固定相三、展開劑三、展開劑四、操作方法四、操作方法五、定性分析五、定性分析六、定量分析六、定量分析 1.基本原理基本原理1薄層色譜法薄層色譜法2比移值比移值Rf3相對比移值相對比移值(Rst) 4薄層色譜法的特點薄層色譜法的特點 1薄層色譜法薄層色譜法 將吸附劑或載體均勻地鋪在將吸附劑或載體均勻地鋪在玻璃板或塑料板、鋁箔、聚酯薄玻璃

28、板或塑料板、鋁箔、聚酯薄膜上，形成薄層，把要分離的樣膜上，形成薄層，把要分離的樣品點加在薄層上，然后用合適的品點加在薄層上，然后用合適的溶劑展開而達(dá)到分離、鑒定和定溶劑展開而達(dá)到分離、鑒定和定量的目的。量的目的。2比移值Rf 在薄層色譜法中，常用比移值Rf來表示各組分在色譜中的保留行為。c ca a原原點點至至溶溶劑劑前前沿沿的的距距離離原原點點至至斑斑點點中中心心的的距距離離R Rf f 在給定條件下，在給定條件下，Rf值為常數(shù)，其值值為常數(shù)，其值在在01之間。之間。 Rf為為0，表示化合物在薄層上不隨，表示化合物在薄層上不隨溶劑擴(kuò)散而移動，仍在原點位置；溶劑擴(kuò)散而移動，仍在原點位置； Rf

29、為為1，表示溶質(zhì)不進(jìn)入固定相，表示溶質(zhì)不進(jìn)入固定相，即表示溶質(zhì)和溶劑同步移動。即表示溶質(zhì)和溶劑同步移動。 一般要求一般要求Rf值在值在0.2 0.8之間，之間， 最佳范圍是最佳范圍是0.30.5。 解決方法：解決方法： 由于由于Rf值重現(xiàn)性差，進(jìn)行定性值重現(xiàn)性差，進(jìn)行定性困難的問題，可以采用相對比困難的問題，可以采用相對比移植移植Rst來定性。來定性。 3相對比移值相對比移值(Rst) ：是指試樣中某：是指試樣中某組分的移動距離與參照物移動距離之組分的移動距離與參照物移動距離之比。比。 參照物可以是另外加入的某一物質(zhì)的參照物可以是另外加入的某一物質(zhì)的純品，也可以是試樣混合物中的某一純品，也可以

30、是試樣混合物中的某一組分。組分。 Rf 與與Rst的取值范圍不同，的取值范圍不同， Rf值小于值小于1，而，而Rst值不一定小于值不一定小于l。的的距距離離原原點點到到參參照照物物斑斑點點中中心心心心的的距距離離原原點點到到樣樣品品組組分分斑斑點點中中stR4薄層色譜法的特點薄層色譜法的特點展開時間短，十幾到幾十分鐘；展開時間短，十幾到幾十分鐘；分離能力強(qiáng)，斑點集中；分離能力強(qiáng)，斑點集中；靈敏度高，用量幾至幾十微克；靈敏度高，用量幾至幾十微克；顯色方便；顯色方便；儀器簡單，操作方便。儀器簡單，操作方便。 200300目目 1.硅膠硅膠 硅膠硅膠H 硅膠硅膠HF254nm 硅膠硅膠G 硅膠硅膠G

31、F254 硅膠硅膠HF254+366nm 2.氧化鋁氧化鋁 氧化鋁氧化鋁H 氧化鋁氧化鋁G 氧化鋁氧化鋁HF254 選擇原則同柱色譜選擇原則同柱色譜 選擇方法：圖解法、點滴實驗法選擇方法：圖解法、點滴實驗法 規(guī)律：規(guī)律：對酸性組分，加入一定比例的酸，對酸性組分，加入一定比例的酸，可防止斑點拖尾現(xiàn)象?？煞乐拱唿c拖尾現(xiàn)象。 在分離堿性物質(zhì)如某些生物堿時，在分離堿性物質(zhì)如某些生物堿時，多數(shù)情況是選用氧化鋁為吸附劑，選用中多數(shù)情況是選用氧化鋁為吸附劑，選用中性溶劑為展開劑。若采用硅膠為吸附劑，性溶劑為展開劑。若采用硅膠為吸附劑，則選用堿性展開劑為宜；某些堿性較弱的則選用堿性展開劑為宜；某些堿性較弱的生

32、物堿可使用中性展開劑。生物堿可使用中性展開劑。 四四. 操作技術(shù)操作技術(shù)操作步驟：操作步驟：選選 擇擇制制 板板點點 樣樣展展 開開檢視檢視定性定量定性定量 選選 擇擇 (1)(1)選選 板板 玻璃板玻璃板 表面光滑、平整清潔表面光滑、平整清潔 (2)(2)固定相吸附劑）固定相吸附劑） 粘合劑：粘合劑：CMC-NaCMC-Na、煅石膏、煅石膏、淀粉等淀粉等 (3)(3)流動相流動相( (展開劑展開劑) ) (4)(4)顯色劑顯色劑 制制 板板 薄層板的制備，就是將吸薄層板的制備，就是將吸附劑均勻地涂鋪在玻璃板附劑均勻地涂鋪在玻璃板上，使成薄層稱之為制板。上，使成薄層稱之為制板。 制板的步驟：制

33、板的步驟： (1)吸附劑的涂布吸附劑的涂布 (2)板的活化板的活化(1) 吸附劑的涂布吸附劑的涂布 硬板硬板(加粘合劑加粘合劑) 硅膠硅膠 薄板薄板 軟板軟板(不加粘合劑不加粘合劑) 氧氧化鋁化鋁硬板的涂鋪方法有以下幾種：硬板的涂鋪方法有以下幾種：傾注法傾注法 、平鋪法、涂鋪器、平鋪法、涂鋪器 、噴、噴霧法霧法硬板的涂鋪裝置示意圖硬板的涂鋪裝置示意圖具有薄層厚度調(diào)節(jié)器的滑行具有薄層厚度調(diào)節(jié)器的滑行玻璃板涂布器玻璃板涂布器Kirchner型）型）Stahl薄層涂布示意圖(2)板的活化板的活化鋪成的薄層，置于水平臺面上鋪成的薄層，置于水平臺面上晾干也可以熱風(fēng)吹干），晾干也可以熱風(fēng)吹干），再置烘箱中

34、于再置烘箱中于105110活活化化0.5小時活化小時活化1小時，即可。小時，即可。點點 樣樣 薄層分析時，一般使用微薄層分析時，一般使用微量注射器或毛細(xì)管點樣。量注射器或毛細(xì)管點樣。 點樣注意事項：點樣注意事項： （1溶劑應(yīng)易揮發(fā)，不要以水溶劑應(yīng)易揮發(fā)，不要以水為溶劑，否則會改變吸附劑的活為溶劑，否則會改變吸附劑的活度。度。 （2樣品濃度不能過高，否則樣品濃度不能過高，否則會產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象；濃度也不能過會產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象；濃度也不能過低，否則起始點會為空心點，導(dǎo)低，否則起始點會為空心點，導(dǎo)致色譜斑點畸形。一般對照品濃致色譜斑點畸形。一般對照品濃度易控制在幾個毫克每毫升。度易控制在幾個毫克每毫升。（3

35、點樣體積宜在點樣體積宜在20l以下，直以下，直徑以徑以3mm為宜，并需分次點加，為宜，并需分次點加，以免使原點擴(kuò)散，直徑太大。以免使原點擴(kuò)散，直徑太大。（4點加量一般為幾點加量一般為幾幾十微克，幾十微克，過多則斑點太大，形狀不良而使過多則斑點太大，形狀不良而使分離不好或拖尾；點樣量太少則分離不好或拖尾；點樣量太少則使斑點模糊或顯不出色。使斑點模糊或顯不出色。（5原點距離底邊、兩側(cè)邊及點原點距離底邊、兩側(cè)邊及點與點之間的距離均應(yīng)大于與點之間的距離均應(yīng)大于1.5cm。（6在進(jìn)行薄層定量時，要求原在進(jìn)行薄層定量時，要求原點直徑一致，點樣間距精確。這點直徑一致，點樣間距精確。這是保證定量精確度的關(guān)鍵。

36、并且是保證定量精確度的關(guān)鍵。并且所有原點應(yīng)在同一水平線上，斑所有原點應(yīng)在同一水平線上，斑點面積也盡可能一致。點面積也盡可能一致。（ 7 ）點樣時最好在密閉容器中）點樣時最好在密閉容器中或比較干燥的條件下完成，避免或比較干燥的條件下完成，避免薄板吸收水分降低活性，若在空薄板吸收水分降低活性，若在空氣中點樣，時間最好在氣中點樣，時間最好在10分鐘內(nèi)分鐘內(nèi)完成。點樣完畢后使斑點干燥，完成。點樣完畢后使斑點干燥，再選用適當(dāng)溶劑展開。再選用適當(dāng)溶劑展開。 展展 開開（1展開原理展開原理（2展開箱的分類展開箱的分類（3展開方式展開方式（4展開劑的選擇展開劑的選擇（5邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng)（1展開原理展開原理將薄

37、板一端浸入展開劑，點樣將薄板一端浸入展開劑，點樣處不可接觸展開劑，展開劑處不可接觸展開劑，展開劑借助毛細(xì)作用上升，帶動樣借助毛細(xì)作用上升，帶動樣品中組分的遷移。品中組分的遷移。（3展開方式展開方式l軟板只能進(jìn)行近軟板只能進(jìn)行近水平展開水平展開l硬板可以進(jìn)行近硬板可以進(jìn)行近水平、下行、上水平、下行、上行、徑向、雙向、行、徑向、雙向、多次展開，其中多次展開，其中以上行法展開最以上行法展開最為常用。為常用。（4展開劑的選擇展開劑的選擇首選單元溶劑，再選混合溶劑首選單元溶劑，再選混合溶劑由簡至繁）由簡至繁） 若二元溶劑系統(tǒng)還不夠理想，若二元溶劑系統(tǒng)還不夠理想，可考慮多元溶劑系統(tǒng)?？煽紤]多元溶劑系統(tǒng)。（

38、5邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng) 定義：點于同一薄層的同一定義：點于同一薄層的同一物質(zhì)的斑點，在色譜展開過物質(zhì)的斑點，在色譜展開過程中，靠薄層邊緣處斑點的程中，靠薄層邊緣處斑點的Rf值與中心區(qū)域斑點的值與中心區(qū)域斑點的Rf值值有所不同的現(xiàn)象，稱為邊緣有所不同的現(xiàn)象，稱為邊緣效應(yīng)。效應(yīng)。產(chǎn)生原因：在極性強(qiáng)弱不等產(chǎn)生原因：在極性強(qiáng)弱不等的混合溶劑展開系統(tǒng)中，展的混合溶劑展開系統(tǒng)中，展開劑揮發(fā)速率不同。開劑揮發(fā)速率不同。減少邊緣效應(yīng)的辦法：減少邊緣效應(yīng)的辦法：用較小體積的展開缸或?qū)⒈釉诟子幂^小體積的展開缸或?qū)⒈釉诟變?nèi)放置一定時間，待溶劑蒸汽達(dá)到內(nèi)放置一定時間，待溶劑蒸汽達(dá)到飽和后再展開；飽和后再展開；在展開缸

39、內(nèi)壁貼上浸濕展開劑的濾在展開缸內(nèi)壁貼上浸濕展開劑的濾紙條，效果也很好；紙條，效果也很好；采用采用3cm以下的狹小薄板，只點以下的狹小薄板，只點23個點時，也會減小邊緣效應(yīng)。個點時，也會減小邊緣效應(yīng)。 檢視檢視 （1物理檢出法光學(xué)）物理檢出法光學(xué)） （2化學(xué)檢出法顯色）化學(xué)檢出法顯色）（1 1物理檢出法物理檢出法日光檢出日光檢出254nm254nm或或365nm365nm光下看熒光斑點光下看熒光斑點熒光薄層展開，紫外燈下看暗斑熒光薄層展開，紫外燈下看暗斑優(yōu)點：方便，不改變化合物的性質(zhì)。優(yōu)點：方便，不改變化合物的性質(zhì)。注意：對光敏感的化合物要避光，注意：對光敏感的化合物要避光，并盡量縮短用紫外光照

40、射的時間。并盡量縮短用紫外光照射的時間。 （2化學(xué)檢出法化學(xué)檢出法顯色劑種類：顯色劑種類： 專屬型顯色劑專屬型顯色劑 通用型顯色劑通用型顯色劑五、定性分析五、定性分析（1用保留值定性用保留值定性Rf（2用多種溶劑系統(tǒng)定性用多種溶劑系統(tǒng)定性 （1斑點捕集后洗脫測定法斑點捕集后洗脫測定法（2薄層掃描法薄層掃描法七七.高效薄層色譜高效薄層色譜 在經(jīng)典薄層色譜法基礎(chǔ)上發(fā)在經(jīng)典薄層色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的更靈敏、精細(xì)的薄展起來的更靈敏、精細(xì)的薄層技術(shù)。層技術(shù)。吸附劑顆粒小而均勻，用噴霧吸附劑顆粒小而均勻，用噴霧法制備的薄層很均勻，分離法制備的薄層很均勻，分離效率比經(jīng)典薄層色譜提高三效率比經(jīng)典薄層色譜提高三倍。分離組分多，分析時間倍。分離組分多，分析時間短。短。第六章第六章 紙色譜法紙色譜法一定義一定義以紙作為載體，以濾紙纖維上以紙作為載體，以濾紙纖維上吸附的水