培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證方案

1、編號: FA/06-31-B培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案計(jì)數(shù)培養(yǎng)基甘肅佛仁制藥科技有限公司培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案標(biāo)題培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案編 號FA/06-31-B頁 碼共5頁、第1頁執(zhí) 行200 年 月 日頒發(fā)部門GMP綜合辦公室分發(fā)部門行政管理辦公室分發(fā)數(shù)起草人起草日期審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期目 錄1. 概述.22. 驗(yàn)證目的23. 驗(yàn)證的范圍24. 驗(yàn)證人員及職責(zé)25. 驗(yàn)證程序和方法26. 驗(yàn)證可接受的標(biāo)準(zhǔn)37. 驗(yàn)證步驟38. 結(jié)果分析及評價(jià)：49. 驗(yàn)證報(bào)告510. 建議.511. 最準(zhǔn)批準(zhǔn).512. 所使用的記錄.61. 驗(yàn)證目的：細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查

2、。本次驗(yàn)證的目的是確認(rèn)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基適合細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測定。2. 參照標(biāo)準(zhǔn)：2010版中國藥典二部附錄XI J微生物限度檢查法。3. 驗(yàn)證項(xiàng)目：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。4.驗(yàn)證小組人員及職責(zé)：4.1驗(yàn)證小組人員:小組人員職務(wù)姓 名所在部門職 務(wù)組 長連學(xué)仁質(zhì)量部經(jīng) 理組 員黃志康質(zhì)量部QC主任組 員郭萍珍質(zhì)量部檢驗(yàn)員4.2驗(yàn)證人員職責(zé)及要求4.3驗(yàn)證中各部門的職責(zé)5. 合格標(biāo)準(zhǔn)：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。6. 試驗(yàn)材料：6.1. 被驗(yàn)證產(chǎn)品：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊

3、脂培養(yǎng)基6.2. 儀器設(shè)備：6.3. 驗(yàn)證用培養(yǎng)基 名稱生產(chǎn)廠家批號營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基6.4. 驗(yàn)證用菌株：(第 代驗(yàn)證菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）大腸埃希菌營養(yǎng)肉湯30351824金黃色葡萄球菌營養(yǎng)肉湯30351824枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯30351824白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)基23282448黑曲霉菌改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基232857（天）7. 菌液制備 7.1. 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824

4、小時(shí)。取經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時(shí)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-610-7約為50100cfuml的菌懸液備用。28培養(yǎng)2448小時(shí)。取經(jīng)2328培養(yǎng)2448小時(shí)的白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfuml的菌懸液備用。28培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液制

5、成每1ml含孢子數(shù)50100cfuml的菌懸液備用。8.菌液計(jì)數(shù)：（每種菌液接種2個(gè)平皿）大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽孢桿菌分別取1ml接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，置3035培養(yǎng)48小時(shí)；白色念珠菌、黑曲霉分別取1ml接種至玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置2328培養(yǎng)72小時(shí)。菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（2個(gè)平皿計(jì)數(shù)取平均值）見下表菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（cfuml）試驗(yàn)次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋123123123大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉9.適用性檢查： 9.1.取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培

6、養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置2328培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)。9.2取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置2328培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)。 9.3. 結(jié)果見附表10. 結(jié)論：附表1：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證記錄試驗(yàn)時(shí)間 年 月 日 完成時(shí)間 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號供試品組cfuml對照培養(yǎng)基組cfuml回收率%應(yīng)70%大腸埃希菌(培養(yǎng)3