丹參酚酸B的熒光特性研究

1、丹參酚酸B的熒光特性研究【摘要】 目的 研究 丹酚酸B的熒光性質(zhì)。 方法 采用大孔樹(shù)脂吸附和醋酸乙酯萃取，自丹參藥材中分離丹酚酸B，采用熒光掃描確定其激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，考察pH、溫度及光照時(shí)間對(duì)其熒光強(qiáng)度的 影響 。結(jié)果丹酚酸B的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為394 nm和501 nm。pH酸性、提高溫度和延長(zhǎng)光照時(shí)間可提高丹酚酸B的熒光強(qiáng)度。結(jié)論丹酚酸B在酸性條件下穩(wěn)定，溫度和光照可加強(qiáng)其熒光效應(yīng)。 【關(guān)鍵詞】 丹酚酸B； 熒光光譜； 穩(wěn)定性Fluorescence Properties of Salvianolic Acid B in Root of Salvia miltiorrhiza B

2、ge.Abstract：ObjectiveTo research the fluorescence properties of salvianolic acid B. MethodsTo separate salvianolic acid B from the root of Salvia miltiorrhiza Bge.by macro-reticular resin adsorption and acetyl ester extraction, scan its excitation and emission wavelength by fluorescence spectrophoto

3、meter, inspect the effect of pH, temperature and illumination time on its fluorescence intensity. ResultsIts excitation and emission wavelength were respectively 394 nm and 501 nm. Acid, heating and illumination promoted its fluorescence intensity. ConclusionSalvianolic acid B was stable in acid con

4、dition, heating and illumination were helpful to its fluorescence effect.Key words：Salvianolic acid B; Fluorescence spectrum; Stability 光動(dòng)力療法（Photodynamic Diagnosis &The rapy）是腫瘤診斷和 治療 的有效新方法，其中光敏劑的選擇是關(guān)鍵。 目前 臨床常用的光敏劑為多種卟啉類(lèi)衍生物混合物，給藥后需避光12個(gè)月，給患者帶來(lái)較大不便1。故從天然產(chǎn)物中尋找毒副作用小的新型光敏劑已成為研究的熱點(diǎn)。中藥含有多種活性化合物，已有 文獻(xiàn) 報(bào)道

5、補(bǔ)骨脂素、姜黃素、大黃素等具有光敏活性2。中藥丹參Salvia miltiorrhiza Bge.中有效成分有丹參酮和丹酚酸，前者的熒光性質(zhì)已有報(bào)道3。由于丹酚酸（Salvianolic acids）是水溶性有效成分，以丹酚酸B含量最高4。丹酚酸B是由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。分子結(jié)構(gòu)中存在較多共軛環(huán)，勢(shì)必對(duì)其光學(xué)活性產(chǎn)生一定影響。有關(guān)此方面的研究尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。為了探索丹酚酸B的光敏活性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其熒光性質(zhì)進(jìn)行了研究。1 材料與方法1.1 材料與試藥丹參藥材（湖北產(chǎn)，60減壓干燥后，粉碎過(guò)40目篩），HPD100（河北滄州寶恩化工有限公司）。1.2 儀器 F-450

6、0熒光光譜儀（日立公司），RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。1.3 方法1.3.1 丹酚酸B的分離純化 藥材粉100 g，加50%乙醇800 ml 60提取2 h，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至200 ml，用20%鹽酸調(diào)pH至3，離心（3 000 r/min，10 min）去沉淀。加入HPD100大孔樹(shù)脂30 g（預(yù)先用95%乙醇浸泡24 h，再用水洗凈），放置8 h，用50 ml水洗3次，再用70%乙醇100 ml分2次淋洗，收集乙醇液，減壓回收至干，加入醋酸乙酯50 ml提取，提取液回收溶劑至干，得固體物2.3 g。經(jīng)薄層鑒別，呈現(xiàn)一個(gè)丹酚酸B斑點(diǎn)。圖1 丹酚酸B分子結(jié)構(gòu)（略）1.

7、3.2 熒光光譜測(cè)定稱(chēng)取分離的丹酚酸B樣品0.2 g，加50 ml甲醇溶解，以此供試液進(jìn)行熒光掃描測(cè)定。2 結(jié)果2.1 丹酚酸B的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 以200700 nm掃描丹酚酸B的激發(fā)波長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)394 nm為其最大激發(fā)波長(zhǎng)。以該波長(zhǎng)激發(fā)，獲得其最大發(fā)射波長(zhǎng)為501 nm。如圖2所示，丹酚酸B的激發(fā)波譜范圍較窄，在380430 nm之間，但其發(fā)射波譜范圍較寬，在400600 nm之間，這歸因于分子結(jié)構(gòu)中分散的共軛體系。由于630 nm以上的光才具有較強(qiáng)的生物組織穿透力，丹酚酸B的激發(fā)波長(zhǎng)穿透能力較弱，只適于淺表腫瘤或血管內(nèi)照射進(jìn)行的光動(dòng)力治療。其發(fā)射波譜寬，對(duì)腫瘤的選擇性較差，但適用范圍廣，

8、因而也是一種具有潛在價(jià)值的光敏活性物質(zhì)。2.2 pH對(duì)丹酚酸B熒光強(qiáng)度的 影響滴加10%鹽酸和10%氫氧化鈉調(diào)節(jié)供試液的pH，結(jié)果表明，在酸性環(huán)境中，丹酚酸B的發(fā)射強(qiáng)度增加，最大發(fā)射光譜未發(fā)生改變，但在堿性條件下，發(fā)射強(qiáng)度降低，最大發(fā)射波長(zhǎng)藍(lán)移，為497 nm，并在397 nm處出現(xiàn)另一發(fā)射峰。這表明丹酚酸B在酸性條件下穩(wěn)定，但在堿性條件下發(fā)生了結(jié)構(gòu)破壞，可能引起解離，故產(chǎn)生了另一個(gè)發(fā)射峰，并導(dǎo)致原來(lái)發(fā)射熒光強(qiáng)度的降低。見(jiàn)圖3。圖2 丹酚酸B的激發(fā)光譜（左）和發(fā)射光譜（右）（略）2.3 光照對(duì)丹酚酸B熒光強(qiáng)度的影響將供試液置入密封可透光的玻璃容器中，放在 自然 光下（100 00 lux），每

9、隔一定時(shí)間測(cè)定其發(fā)射光譜。結(jié)果表明，丹酚酸B的最大發(fā)射波長(zhǎng)在光照下未發(fā)生移動(dòng)，熒光強(qiáng)度隨照射時(shí)間增加而增加。這說(shuō)明光照對(duì)丹酚酸B具有活化作用。見(jiàn)圖4。2.4 溫度對(duì)丹酚酸B熒光強(qiáng)度的影響將供試液置入恒溫水浴中保溫，設(shè)定溫度20, 30, 40, 50, 60，每溫度保溫30 min，測(cè)定其熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明隨溫度提高，丹酚酸B的熒光強(qiáng)度隨溫度提高有所增加，但增加的幅度不大，40后漸趨穩(wěn)定。說(shuō)明在60溫度范圍內(nèi)，丹酚酸B可保持較好的穩(wěn)定性。見(jiàn)圖5。圖3 不同pH條件下丹酚酸B熒光光譜的變化（略）圖4 光照時(shí)間與丹酚酸B熒光強(qiáng)度的關(guān)系（略）圖5 溫度與丹酚酸B熒光強(qiáng)度的關(guān)系（略）3 討論丹酚酸B是

10、中藥丹參中的主要活性成分之一，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌細(xì)胞、防心腦缺血損傷、抗血小板凝聚、抗肝纖維化、改善記憶、抗腫瘤等作用5。丹酚酸B具有熒光活性，利用此性質(zhì)，可進(jìn)行定性定量檢測(cè)，并可提高其對(duì)腫瘤部位的靶向作用，從而提高其作用效果。本實(shí)驗(yàn)考察了pH、溫度、光照對(duì)丹酚酸B熒光強(qiáng)度的影響。由于實(shí)驗(yàn)是在有機(jī)溶劑中密閉條件下進(jìn)行，故可避免條件改變導(dǎo)致氧化對(duì)丹酚酸B結(jié)構(gòu)的破壞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pH酸性、一定溫度和光照有利于丹酚酸B熒光強(qiáng)度的增加，不會(huì)導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)的破壞。至于丹酚酸B對(duì)腫瘤細(xì)胞的光敏殺傷作用有待進(jìn)一步探討?！?參考文獻(xiàn) 】1 王瑞平,李迎新.光動(dòng)力療法在腫瘤 治療 中的 應(yīng)用 J.國(guó)外醫(yī)學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè),1999,22(6):355.2 許川山, Albert Wing Lang Leung. 中藥光敏劑介導(dǎo)的光動(dòng)力療法J.激光雜志, 2004, 25(6): 92.3 李俊芬, 董 川,