丹參抗肝纖維化作用機(jī)制的研究進(jìn)展

1、中國民族民間醫(yī)藥30Chinesejournalofethnomedicineandethnopharmacy藥物研究Themedicinestudy丹參抗肝纖維化作用機(jī)制的研究進(jìn)展賴文芳吳符火3陳興明福建中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,福建350108【摘要】:肝纖維化是各種慢性肝病的共同病理過程,表現(xiàn)為肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解失衡而導(dǎo)致其過度沉積,肝星狀細(xì)胞是細(xì)胞外基質(zhì)沉積的主要細(xì)胞來源。近年來,丹參及其有效成分在抗肝纖維化研究中取得了許多進(jìn)展,筆者就丹參抗肝纖維化的作用機(jī)制進(jìn)行綜述。【關(guān)鍵詞】:丹參;肝纖維化;機(jī)制【中圖分類號】R282171【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)0

2、2-0030-03肝纖維化是各種慢性肝病的共同病理過程,是向肝硬化發(fā)展的中間階段,其伴隨著肝臟形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變,從而導(dǎo)致肝臟結(jié)構(gòu)和代謝的異常1,表現(xiàn)為肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成與降解失衡而導(dǎo)致其過度沉積。許多研究證實(shí),肝星狀細(xì)胞(hapticstellatecel1,HSC)是肝臟病理情況下ECM沉積的主要細(xì)胞來源,在纖維化發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)變中處于中心細(xì)胞環(huán)節(jié)的地位2。肝纖維化屬中醫(yī)學(xué)“脅痛”、“黃疸”、“癥積”等范疇,而肝主疏泄、藏血,氣陰虧虛、瘀血阻絡(luò)是肝纖維化基本中醫(yī)病機(jī)3。近年來,在抗肝纖維化的眾多藥物中,4,其氣和清熱解毒類5。丹參為唇形科植物丹參Salviamiltiorr

3、hizaBge1的根,始載于神農(nóng)本草經(jīng),為常用中藥。丹參歸心、肝經(jīng),藥性微寒,味苦、無毒,具有活血祛瘀、安神寧心、止痛等功效,其具有多種藥理作用,包括抗炎、清除氧自由基及抗氧化等。丹參在臨床上可抑制或減輕肝細(xì)胞變性、壞死及炎癥反應(yīng);促進(jìn)肝細(xì)胞再生,并有抗肝纖維化的作用。其有效成分有水溶性和脂溶性兩大類,脂溶性部分主要為二萜醌類化合物(包括丹參酮、隱丹參酮等);水溶性部分主要為酚性酸類化合物(包括丹參素、原兒茶醛、丹酚酸等)610含量的增加是一種炎癥相關(guān)的應(yīng)激反應(yīng)。2清除氧自由基,抗脂質(zhì)過氧化損傷近年的研究認(rèn)為,在肝纖維化形成過程中氧自由基及其引起的脂質(zhì)過氧化具有重要作用。脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物不僅可活

4、化枯否氏細(xì)胞,分泌多種細(xì)胞因子,繼而激活HSC,介導(dǎo)HSC的分化、增殖和膠原合成?？寡趸瘎┠軌蛞种艸SC的活化、增殖和膠原的沉積11。丙二醛(MDA)是脂,。GSH與GSH-Px也。GSH為機(jī)體內(nèi)含量最多的含硫基三肽,對內(nèi)、外激性代謝產(chǎn)物有解毒作用,主要被GSH-Px氧化后對蛋白巰基有保護(hù)作用12。CCl4是目前誘導(dǎo)肝纖維化的常用化學(xué)毒物,所誘導(dǎo)的模型其病理特點(diǎn)主要與脂質(zhì)過氧化的損傷機(jī)制有關(guān),胡義揚(yáng)等13研究丹參提取物對CCl4和DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的影響時,從其生化檢測結(jié)果看,作為膠原蛋白獨(dú)特的氨基酸成分Hyp,在模型組中有較大幅度升高,而在丹參治療組中得到顯著性抑制。同時,模型組肝MD

5、A含量顯著升高,而丹參治療組,可顯著降低MDA含量,這一作用為秋水仙堿所不具備。丹參酮A是一個天然的抗氧化劑,為一種有效的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物與DNA相互作用抑制劑,能消除心肌線粒體膜脂質(zhì)過氧化過程中產(chǎn)生脂質(zhì)自由基,從而保護(hù)線粒體的吸收功能14。劉永剛等15用丹參酮A治療CC14致大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)丹參酮A能明顯降低肝纖維化大鼠血清中異常升高的一氧化氮(NO)、MDA含量,從而推測丹參抗肝纖維化的作用可能與清除氧自由基,抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。陳連劍等16研究抗氧化劑丹參酮A對氧應(yīng)激所致HSC纖維化效應(yīng)的影響,結(jié)果顯示丹參酮A能明顯降低HSC培養(yǎng)液中異常升高M(jìn)DA和GSH的含量,同時提高SOD和

6、GSH-Px的活力。胡詠武等17研究丹參酮A對LPS等誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷,結(jié)果表明丹參酮A能明顯地使LPS和DGlaN損傷的肝細(xì)胞恢復(fù),反映在損傷肝細(xì)胞膜和胞漿釋放的酶水平和MDA含量下降。Shun-LinJiang等18?，F(xiàn)就丹參抗肝纖維化的作用機(jī)制進(jìn)行綜述,以期為丹參的進(jìn)一步研究和開發(fā)提供依據(jù)。1消除炎癥,減少細(xì)胞因子的釋放肝細(xì)胞損傷后,Kupffer細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞被激活,釋放多種細(xì)胞因子,促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的有絲分裂,使貯脂細(xì)胞及其他細(xì)胞合成膠原纖維增多。因此,消除炎癥,減少細(xì)胞因子的釋放,是抑制膠原合成、抗肝纖維化的重要途徑。近年來研究表明718,IL-6及IL-8主要由單核細(xì)胞和巨

7、噬細(xì)胞產(chǎn)生,與肝臟局部炎癥反應(yīng)有關(guān),參與炎性損傷過程。在中國人肝纖維化產(chǎn)生過程中,IL-6、IL-8水平升高,而IL-10則具有抑制肝纖維化作用。陳小囡等9研究丹參注射液對酒精性肝病的作用,結(jié)果提示丹參注射液可抑制IL-8的升高,從而防治酒精性肝損傷。郭偉強(qiáng)等10實(shí)驗(yàn)檢測了丹參酮A在刺激RAW26417細(xì)胞過程中,IL-10的含量變化,進(jìn)而揭示丹參酮A刺激IL-研究丹參抑制大鼠肝纖維化線粒體脂質(zhì)過氧化,揭示丹參抗肝纖維化作用主為通過抗脂質(zhì)過氧化機(jī)制,藥物研究Themedicinestudy中國民族民間醫(yī)藥Chinesejournalofethnomedicineandethnopharmacy

8、31其作用強(qiáng)度呈現(xiàn)明顯量效、時效關(guān)系,為丹參等活血化瘀中藥治療慢性肝病抗肝纖維化有效作用以及其機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。3改善肝臟血液循環(huán)5抑制肝星狀細(xì)胞活化,干預(yù)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)HSC活化后發(fā)生一系列表型改變,其中HSC通過自分泌細(xì)胞因子,包括轉(zhuǎn)化生長因子1(Transforminggrowth1,TGF-1)、血小板衍生生長因子factor(Plateletde2rivedgrowthfactor,PDGF)等對HSC活化的持久延續(xù)起重肝竇毛細(xì)血管化是肝纖維化的重要病理特征,以肝竇內(nèi)皮細(xì)胞失窗孔、內(nèi)皮下基底膜形成為特征,改善肝臟微循環(huán),對促進(jìn)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)有重要意義。已有的研究表明,丹參

9、能改善肝內(nèi)微循環(huán)障礙,降低血液黏稠度,對肝損傷有保護(hù)作用,有利于肝細(xì)胞再生和修復(fù),刺激膠原酶活性,促進(jìn)膠原降解達(dá)到抗肝纖維化的作用19,20。研究還發(fā)現(xiàn)丹參可減輕肝血竇阻力,增加肝血流,促進(jìn)肝細(xì)胞功能恢復(fù)。因此,丹參可通過作用靶點(diǎn)改善實(shí)驗(yàn)動物的血液流變性,改變高黏滯血癥動物血液的黏、濃、聚、滯狀態(tài),保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,從而改善微循環(huán)21。4抑制膠原生成,促進(jìn)膠原的降解要作用,這些因子反饋?zhàn)饔肏SC,通過HSC表面的受體引起細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo),并不斷刺激自身的分裂增殖并大量合成和分泌膠原等各種ECM,結(jié)果使ECM成分在肝內(nèi)異常沉積,最終導(dǎo)致肝纖維化32。業(yè)已證實(shí)TGF-1是刺激HSC激活和分泌EC

10、M作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子,它在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用33。目前研究發(fā)現(xiàn),TGF-1主要通過HSC內(nèi)的TGF-1/TR/Smads信號途徑,發(fā)揮其促進(jìn)HSC合成-SMA和ECM的生物學(xué)效應(yīng)。德國學(xué)者BreitkopfK等34認(rèn)為,通過阻斷TGF-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(如阻斷TGF-1受體后作用,即通過干預(yù)SMAD來抑制TGF-1作用),可以阻止并逆轉(zhuǎn)肝纖維化。迄今為止,對TGF-1在細(xì)胞內(nèi)的Smad信號傳導(dǎo)通路研究得比較多。鄭磊等35研究表明,丹參素可下調(diào)HSC中Smad2、Smad3表達(dá)并上調(diào)Smad7mR2,-1/Smads信號通路肝纖維化是ECM過量沉積的不良結(jié)局,膠原是ECM的主要成分。肝纖維

11、化的肝臟含6倍于正常肝臟的膠原,其中I、形膠原的含量顯著增高,而細(xì)胞外基質(zhì)包括I、形膠原、蛋白多糖等,由此可見抑制/降解膠原無疑能延緩或逆轉(zhuǎn)肝纖維化。對ECM降解起主要作用的是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)子(TIMPs),活化的HSC是MMPs是一組鋅M1。蔡方剛等36研究,-1mRNA,以及I型膠原mRNA的,表明丹參對HSC有直接的抑制作用,而非簡單經(jīng)過肝細(xì)胞間接起作用,其抑制HSC活化的機(jī)制可能在于抑制細(xì)胞內(nèi)的TGF-1基因表達(dá),阻止細(xì)胞活化的持續(xù)放大,并可能通過TGF-1生成的減少,影響TGF-1細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo),從而下調(diào)細(xì)胞內(nèi)I型前膠原的基因轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而抑制I型膠原的產(chǎn)生,起到抑制肝纖維化

12、的作用。近來,有關(guān)絲裂原激活的蛋白激酶通路(mitogenac2tivatedproteinkinas,MAPK)參與TGF-1信號傳導(dǎo)的報(bào)分22,其中降解I、,在人類為MMP-l,大鼠則是MMP-1323。TIMPS是抑制MMPs的一組多功能因子家族,其中TIMP-1和TIMP-2在正常肝臟中低水平表達(dá),MMP-13主要受TIMP-1調(diào)控。Wasser等24發(fā)現(xiàn)丹參可提高肝纖維化大鼠肝組織MMPsmRNA表達(dá),抑制TIMP-1mRNA表達(dá)。丹參單體IH764-3在大鼠肝纖維化模型中,也通過抑制TIMP-1和道也逐漸增多,TGF-1可通過HSC內(nèi)的MAPK信號傳導(dǎo)通路介導(dǎo)HSC特異的生物學(xué)作用

13、。薛冬英等37分別以TGF-1和血小板衍生生長因子BB(PDGFBB)刺激轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)蛋白的表達(dá)而產(chǎn)生抗纖維化作用25。有研究表明26,丹參能減少肝臟膠原蛋白含量并活化的HSC,觀察SAB對TGF-1和PDGFBB刺激的HSC中MAPK信號傳導(dǎo)的作用,從細(xì)胞分子生物學(xué)角度證使尿羥脯氨酸排出增多,顯示丹參有促進(jìn)已合成纖維再吸收及促進(jìn)纖維蛋白降解的作用。丹參素能有效改善肝臟炎癥、減輕細(xì)胞外基質(zhì)沉積和膠原蛋白表達(dá),具有較好的抗肝纖維化作用27明SAB對PDGF在HSC內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路的抑制作用在于抑制了HSC上PDGF受體的表達(dá),從而揭示了SAB通過下調(diào)HSC內(nèi)TGF-1和PDGF信號傳導(dǎo)

14、,阻止HSC增殖活化、分泌ECM的抗肝纖維化作用機(jī)制。FAK是分子量為125kD的一種非受體型酪氨酸激酶,。余世鋒28等以不同劑量丹參注射液治29療慢性乙型肝炎肝纖維化的患者,臨床研究結(jié)果表明,丹參注射液具有降低PCIII、HA和C作用。鄭元義等研究丹參素對大鼠免疫性肝纖維化的治療作用,研究結(jié)果表明,丹參素對HSC有明顯的增殖抑制作用,減少肝纖維化細(xì)胞外基質(zhì)沉積等。陳岳祥等30除參與整合素介導(dǎo)的信息傳遞外,在生長因子、氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖中同樣發(fā)揮重要作用,而且已經(jīng)有研究證實(shí)FAK的表達(dá)參與了MMPs及TIMP-1的表達(dá),抑制FAK可38以減少TlMP-1mRNA表達(dá)。劉麗等39通過細(xì)胞培養(yǎng)在

15、丹參單體IH7643抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn),IH7643可顯著減輕大鼠CCl4肝纖維化程度,能明顯降低肝羥脯氨酸和I、型mRNA含量,降低血清HA、LN水平,改善肝功能。同時,HsuYC等31技術(shù),應(yīng)用不同濃度的IH7643干預(yù)氧化應(yīng)激情況下的HSC,測定其分泌MMP-13以及TIMP-1的能力的改變,對丹參單體IH7643進(jìn)行臨床研究和動物實(shí)觀察過程中伴隨著FAK的變化發(fā)現(xiàn),IH7643作用于HSC2h后,MMP-13mRNA表達(dá)強(qiáng)度明顯上調(diào),隨著濃度的驗(yàn),結(jié)果表明其能夠增加膠原酶活性,具有明顯的抗肝纖維化作用。增加,MMP-13表達(dá)增加,存在劑量依賴關(guān)系;同時,中國民族民間醫(yī)藥32

16、ChinesejournalofethnomedicineandethnopharmacyDigestol,2002,10(11):1253-1256藥物研究ThemedicinestudyIH7643可以抑制TIMP-lmRNA表達(dá),呈明顯的量效關(guān)系,因此,其認(rèn)為抑制H2O2刺激的FAK表達(dá)是IH7643促進(jìn)膠原降解和抗肝纖維化的機(jī)制之一。綜上所述,丹參具有多種化學(xué)成分,這些成分又有多方面的藥理作用。丹參抗肝纖維化的研究作用機(jī)理為多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn),并已涉及多種細(xì)胞因子及細(xì)胞內(nèi)信號分子網(wǎng)絡(luò)。隨著基因治療、細(xì)胞因子生物學(xué)等研究的不斷深入,其作用機(jī)理研究也將步入到一個新的臺階。其發(fā)病機(jī)理的不

17、斷明確以及特異性、敏感性高指標(biāo)的不斷確定,也必將使中醫(yī)藥治療肝纖維化有一個質(zhì)的飛躍。參考文獻(xiàn)1ChunHui-Li,LiHui-Pan,ZongWei-Yang1Preventiveeffect0fQianggan-RongxianDecoction0nratlivefibrosisJ1WorldJournalofGastro2enterology,2008,14(22):3569357312梁增文,張國,王天才1大鼠肝纖維化中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶的作用J1世界華人消化雜志,2003111(6):730-73213陳園,陶艷艷,劉成海1當(dāng)歸補(bǔ)血湯及其單味藥抗肝纖維化研究進(jìn)展J1上海中醫(yī)藥雜志,2

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