[免疫學(xué)]實(shí)驗(yàn)1

1、1.免疫血清的制備與應(yīng)用（一）：家兔皮內(nèi)注射羊紅細(xì)胞懸液免疫血清的制備與應(yīng)用（一）：家兔皮內(nèi)注射羊紅細(xì)胞懸液2.吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)3.免疫器官的組織免疫器官的組織結(jié)構(gòu)觀察結(jié)構(gòu)觀察 分組、組長(zhǎng) 課代表聯(lián)系方式實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)室規(guī)則1上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，穿好隔離衣。上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，穿好隔離衣。2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要保持肅靜和秩序，不得談笑或隨處走動(dòng)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要保持肅靜和秩序，不得談笑或隨處走動(dòng)，少說(shuō)、少說(shuō)、 多做、多想多做、多想。3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食和吸煙，關(guān)閉通訊工具。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食和吸煙，關(guān)閉通訊工具。4用過(guò)的實(shí)驗(yàn)材料，放于指定地點(diǎn)，不得隨意拋置。用過(guò)的實(shí)驗(yàn)材料，放于指定地點(diǎn)，不得隨意拋置。5注

2、意節(jié)約實(shí)驗(yàn)試劑，愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材（顯微鏡、組織切片的使注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)試劑，愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材（顯微鏡、組織切片的使用）。用）。6易燃物品（如酒精等）不準(zhǔn)接近火源。易燃物品（如酒精等）不準(zhǔn)接近火源。7實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，以小組為單位將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理清潔，值日同學(xué)打?qū)嶒?yàn)結(jié)束后，以小組為單位將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理清潔，值日同學(xué)打掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、電等開關(guān)是否關(guān)好，離開實(shí)驗(yàn)室要關(guān)掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、電等開關(guān)是否關(guān)好，離開實(shí)驗(yàn)室要關(guān)好門窗。好門窗。養(yǎng)成良好的習(xí)慣養(yǎng)成良好的習(xí)慣Part I 免疫血清的制備與應(yīng)用免疫血清的制備與應(yīng)用（一一）：）：免疫注射免疫注射【原理原理】 將適當(dāng)?shù)目乖镔|(zhì)注入動(dòng)物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間將適當(dāng)?shù)目乖镔|(zhì)注

3、入動(dòng)物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，動(dòng)物血清中可以產(chǎn)生大量的特異性抗體，這種含后，動(dòng)物血清中可以產(chǎn)生大量的特異性抗體，這種含有特異性抗體的血清稱為免疫血清。有特異性抗體的血清稱為免疫血清。 優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生，主要取決于優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生，主要取決于抗原的純度抗原的純度和和免疫原性免疫原性，以及，以及動(dòng)物的應(yīng)答能力動(dòng)物的應(yīng)答能力。此外，尚需考慮免。此外，尚需考慮免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時(shí)間間隔、有無(wú)佐劑疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時(shí)間間隔、有無(wú)佐劑等因素。等因素。抗體（抗體（Ab、溶血素）、溶血素）漿細(xì)胞漿細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞流程：流程：制備抗原制備抗原免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物采血、分離血清采血、分離血清純化

4、、鑒定純化、鑒定分裝、保存分裝、保存【步驟步驟】1.備皮：家兔背部剪毛。備皮：家兔背部剪毛。2.消毒：碘酒、酒精。消毒：碘酒、酒精。3.抽取抽取0.51.0mL綿羊紅細(xì)胞懸液。綿羊紅細(xì)胞懸液。4.針頭斜面向上，刺入針頭斜面向上，刺入皮內(nèi)皮內(nèi)后平行進(jìn)針使針頭沒入，推注后平行進(jìn)針使針頭沒入，推注0.1ml羊紅細(xì)胞懸液。羊紅細(xì)胞懸液。56點(diǎn)注射。點(diǎn)注射。5.注射器以及消毒棉球棄掉，將家兔放回籠子。注射器以及消毒棉球棄掉，將家兔放回籠子。Part II 吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè) 【原理原理】： 機(jī)體內(nèi)的吞噬細(xì)胞具有吞噬大顆粒異物的特性，受到趨化機(jī)體內(nèi)的吞噬細(xì)胞具有吞噬大顆粒異物的特性，

5、受到趨化因子的趨化作用可以到達(dá)炎癥部位，對(duì)細(xì)菌等異物進(jìn)行吞噬和因子的趨化作用可以到達(dá)炎癥部位，對(duì)細(xì)菌等異物進(jìn)行吞噬和消化。消化。巨噬細(xì)胞：大吞噬細(xì)胞（長(zhǎng)壽）巨噬細(xì)胞：大吞噬細(xì)胞（長(zhǎng)壽）中性粒細(xì)胞：小吞噬細(xì)胞（短壽）中性粒細(xì)胞：小吞噬細(xì)胞（短壽）1.動(dòng)物：小白鼠。動(dòng)物：小白鼠。2.試驗(yàn)器材：剪刀、鑷子、注射器、解剖板、瑞氏染試驗(yàn)器材：剪刀、鑷子、注射器、解剖板、瑞氏染液、載玻片、顯微鏡等。液、載玻片、顯微鏡等。3.抗原：白葡菌菌液。抗原：白葡菌菌液?！静牧喜牧稀縈ouse handling and manual restraintIntraperitoneal injection of mous

6、e 1. 取已注射過(guò)淀粉肉湯的小白鼠一只，取白葡菌菌液取已注射過(guò)淀粉肉湯的小白鼠一只，取白葡菌菌液1ml注注入其入其左下腹腔左下腹腔，輕揉腹部。，輕揉腹部。2. 30min后，將小白鼠拉頸處死，固定，打開腹腔，用玻片后，將小白鼠拉頸處死，固定，打開腹腔，用玻片在暴露的腸管上印片，自然晾干。在暴露的腸管上印片，自然晾干。3. 滴加滴加3滴瑞氏染液于印片上，滴瑞氏染液于印片上，20秒秒后加等量蒸餾水，混勻后加等量蒸餾水，混勻染色染色3min（一直保持濕潤(rùn)）。自來(lái)水沖洗，濾紙吸干。（一直保持濕潤(rùn)）。自來(lái)水沖洗，濾紙吸干。4. 顯微鏡下觀察。顯微鏡下觀察。5. 交回實(shí)驗(yàn)器材，最后將小鼠，玻片棄掉。交回

7、實(shí)驗(yàn)器材，最后將小鼠，玻片棄掉。【步驟步驟】吞噬有細(xì)菌的吞噬細(xì)胞吞噬有細(xì)菌的吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞的百分率吞噬細(xì)胞的百分率100個(gè)吞噬細(xì)胞個(gè)吞噬細(xì)胞100吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)100個(gè)吞噬細(xì)胞中所吞噬的細(xì)菌總數(shù)個(gè)吞噬細(xì)胞中所吞噬的細(xì)菌總數(shù)1002.計(jì)算：計(jì)算：1. 巨噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象：油鏡下可見大量巨噬細(xì)胞，胞漿巨噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象：油鏡下可見大量巨噬細(xì)胞，胞漿內(nèi)數(shù)量不等的藍(lán)色細(xì)菌。淀粉肉湯已經(jīng)注射內(nèi)數(shù)量不等的藍(lán)色細(xì)菌。淀粉肉湯已經(jīng)注射23天，游走至天，游走至腸管外的中性粒細(xì)胞因?yàn)閴勖潭嘁阉劳觥Ｄc管外的中性粒細(xì)胞因?yàn)閴勖潭嘁阉劳??！窘Y(jié)果結(jié)果】1. 小鼠的抓法，拉頸處死手法，不能傷害動(dòng)物；小鼠的抓法，拉頸

8、處死手法，不能傷害動(dòng)物；2. 右側(cè)腹腔注射易傷及肝臟；開腹時(shí)正中皮膚剪開，沿腹白線，右側(cè)腹腔注射易傷及肝臟；開腹時(shí)正中皮膚剪開，沿腹白線，避免傷及血管避免傷及血管；印片時(shí)避免印到肝臟上；印片時(shí)避免印到肝臟上；3. 瑞氏染液與蒸餾水等量，染液完全覆蓋印跡，并瑞氏染液與蒸餾水等量，染液完全覆蓋印跡，并防止干片防止干片；4. 顯微鏡的使用。顯微鏡的使用。5. 用品放入指定地點(diǎn)用品放入指定地點(diǎn)，注意個(gè)人防護(hù)。，注意個(gè)人防護(hù)?！咀⒁馐马?xiàng)注意事項(xiàng)】瑞氏染色瑞氏染色 10 40瑞氏染色瑞氏染色 10 40Part 免疫器官的組織結(jié)構(gòu)觀察免疫器官的組織結(jié)構(gòu)觀察 免疫系統(tǒng)：機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答和免疫功能的重要系統(tǒng)。

9、免疫系統(tǒng)：機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答和免疫功能的重要系統(tǒng)。 免疫器官免疫器官 骨髓、骨髓、胸腺、淋巴結(jié)、脾臟胸腺、淋巴結(jié)、脾臟等；等； 免疫組織免疫組織 淋巴小結(jié)、彌散的淋巴組織等；淋巴小結(jié)、彌散的淋巴組織等； 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞 T細(xì)胞、細(xì)胞、B細(xì)胞、細(xì)胞、NK細(xì)胞等；細(xì)胞等； 免疫分子免疫分子 抗原、抗體、細(xì)胞因子等?？乖?、抗體、細(xì)胞因子等。免疫器官免疫器官法氏囊（法氏囊（Bursa of Fabricius）免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞1.胸腺（胸腺（Thymus）:位于胸腔縱隔上部、胸骨后方，分左右兩葉，青春期后開始緩位于胸腔縱隔上部、胸骨后方，分左右兩葉，青春期后開始緩慢退化。慢退化。胎兒胸腺胎兒胸腺成人胸

10、腺成人胸腺胸腺的結(jié)構(gòu)胸腺小葉胸腺的結(jié)構(gòu)胸腺小葉 皮質(zhì)皮質(zhì) 深皮質(zhì)區(qū)和淺皮質(zhì)區(qū)深皮質(zhì)區(qū)和淺皮質(zhì)區(qū) 胸腺細(xì)胞（未成熟胸腺細(xì)胞（未成熟T細(xì)胞）細(xì)胞） 8590% 胸腺上皮細(xì)胞（胸腺上皮細(xì)胞（TEC） 巨噬細(xì)胞（巨噬細(xì)胞（M ） 胸腺基質(zhì)細(xì)胞（胸腺基質(zhì)細(xì)胞（TSC） 樹突狀細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞（DC） 髓質(zhì)髓質(zhì) 較成熟的胸腺細(xì)胞較成熟的胸腺細(xì)胞 胸腺上皮細(xì)胞（胸腺上皮細(xì)胞（TEC） 單核巨噬細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞（DC） 胸腺小體（赫氏小體）胸腺小體（赫氏小體）胸腺基質(zhì)細(xì)胞（胸腺基質(zhì)細(xì)胞（TSC）胸腺的結(jié)構(gòu)胸腺的結(jié)構(gòu)HE 100胸腺小體的結(jié)構(gòu)胸腺小體的結(jié)構(gòu)HE 4002.淋巴結(jié)（淋巴結(jié)（

11、lymph node）皮質(zhì)區(qū)：皮質(zhì)區(qū)： 初級(jí)淋巴濾泡：初級(jí)淋巴濾泡： 淺皮質(zhì)區(qū)：淺皮質(zhì)區(qū)： 淋巴濾泡淋巴濾泡 靜止靜止B細(xì)胞細(xì)胞 （淋巴小結(jié)）（非胸腺依賴區(qū)）（淋巴小結(jié)）（非胸腺依賴區(qū)） 次級(jí)淋巴濾泡：次級(jí)淋巴濾泡： 生發(fā)中心，生發(fā)中心， 增殖分化增殖分化B細(xì)胞細(xì)胞 深皮質(zhì)區(qū)：深皮質(zhì)區(qū)： T細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞；細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞；（胸腺依賴區(qū)）（胸腺依賴區(qū)） 高內(nèi)皮小靜脈（高內(nèi)皮小靜脈（HEV），淋巴細(xì)胞再循環(huán)），淋巴細(xì)胞再循環(huán)髓質(zhì)區(qū)：髓質(zhì)區(qū)： 髓索：髓索：B細(xì)胞，漿細(xì)胞，部分細(xì)胞，漿細(xì)胞，部分T細(xì)胞和細(xì)胞和M 髓竇：大量髓竇：大量M 淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)深（副）皮質(zhì)區(qū)深（副）

12、皮質(zhì)區(qū)淋巴小結(jié)淋巴小結(jié)被膜下淋巴竇被膜下淋巴竇被膜被膜淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)HE染色染色 100小結(jié)帽小結(jié)帽：小淋巴：小淋巴細(xì)胞為主細(xì)胞為主明區(qū)明區(qū)：中淋巴：中淋巴細(xì)胞為主細(xì)胞為主暗區(qū)暗區(qū)：大淋巴：大淋巴細(xì)胞為主細(xì)胞為主淋巴小結(jié)的結(jié)構(gòu)淋巴小結(jié)的結(jié)構(gòu)-生發(fā)中心生發(fā)中心淋巴結(jié)髓質(zhì)的結(jié)構(gòu)淋巴結(jié)髓質(zhì)的結(jié)構(gòu)髓索髓索髓竇髓竇淋巴結(jié)深皮質(zhì)區(qū)的高內(nèi)皮小靜脈模式圖淋巴結(jié)深皮質(zhì)區(qū)的高內(nèi)皮小靜脈模式圖3.脾的基本結(jié)構(gòu)脾的基本結(jié)構(gòu)脾臟的基本結(jié)構(gòu)脾臟的基本結(jié)構(gòu):白髓白髓脾小體（脾小體（B細(xì)胞區(qū)）細(xì)胞區(qū)）中央動(dòng)脈與動(dòng)脈周圍淋巴鞘中央動(dòng)脈與動(dòng)脈周圍淋巴鞘紅髓紅髓邊緣區(qū)（邊緣區(qū)（T、B、M ）脾血竇脾血竇脾索（脾索（B，漿

13、細(xì)胞，漿細(xì)胞， M ，DC）脾臟的基本結(jié)構(gòu)脾臟的基本結(jié)構(gòu):紅髓紅髓試驗(yàn)報(bào)告：試驗(yàn)報(bào)告：1.免疫血清的制備與應(yīng)用：免疫血清制備的原理、注射步驟。免疫血清的制備與應(yīng)用：免疫血清制備的原理、注射步驟。2.吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)的原理、步驟及鏡下觀察結(jié)果吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)的原理、步驟及鏡下觀察結(jié)果（紅藍(lán)鉛筆畫圖）。（紅藍(lán)鉛筆畫圖）。 （標(biāo)注典型結(jié)構(gòu)（標(biāo)注典型結(jié)構(gòu) 瑞氏染色瑞氏染色 觀察倍數(shù)觀察倍數(shù)1000/400 ） 3.繪制免疫器官（脾臟，胸腺，淋巴結(jié)）的鏡下觀察結(jié)果繪制免疫器官（脾臟，胸腺，淋巴結(jié)）的鏡下觀察結(jié)果 （紅藍(lán)鉛筆畫圖）。（標(biāo)注典型結(jié)構(gòu)（紅藍(lán)鉛筆畫圖）。（標(biāo)注典型結(jié)構(gòu) HE染色染色 觀察倍數(shù)觀察倍數(shù)100）值日：值日： 請(qǐng)班干部排好值日生，清理實(shí)驗(yàn)桌面，清理顯微鏡，關(guān)掉顯請(qǐng)班干部排好值日生，清理實(shí)驗(yàn)桌面，清理顯微鏡，關(guān)掉顯微鏡