阿莫西林_克拉維酸注射劑及其在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究

1、畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2004,35(6),7202726ActaVeterinariaetZootechnicaSinica阿莫西林2克拉維酸注射劑及其在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究湯樹生,肖希龍(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京100094)摘要:以阿莫西林(AMO)和克拉維酸(CLA)為原料,以注射用大豆油為溶媒,成功研制出AMO2CLA注射用混懸劑。采用加溫加濕試驗和光加速試驗對制劑進行穩(wěn)定性研究,結(jié)果表明該制劑穩(wěn)定性良好,AMO和CLA的相對標示量均在90%以上、樣品的外觀色澤、粒度、分解產(chǎn)物等指標均無明顯變化。在藥物動力學(xué)研究中,用HPLC2UV法測定在血漿中AMO和CLA的含量。血藥濃度數(shù)據(jù)經(jīng)3p

2、97軟件處理,靜注AMO和CLA水溶液在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程均符合一級吸收一室模型,肌注自制AMO2輝瑞公司的AMO2CLA注射用混懸劑、CLA注射用混懸劑及單方AMO注射用混懸劑在豬體內(nèi)的動力學(xué)過程均符合一級吸收二室模型,且吸收良好,半衰期長。AMO在豬體內(nèi)的持效時間(C>0.3g󰃗mL)超過48h,緩釋作用顯著。自制AMO2CLAAMO2CLA注射用混懸劑的動力學(xué)參數(shù)比較差異不顯著。關(guān)鍵詞:阿莫西林;克拉維酸;注射用混懸劑;豬;藥物動力學(xué)中圖分類號:S859.79+6;S859.5+3文獻標識碼:A:2()0620720207阿莫西林(AMO)半合成青霉素,抗菌譜廣

3、,口服吸收完全,合率高,血清中的濃度較p,AMP)高1倍以上桿菌、,球菌感染。隨著AMO的廣泛應(yīng)用,臨床不斷產(chǎn)生對AMO耐藥的菌株。細菌對AMO的耐藥機理中最主CLA注射用混懸劑,并對其進行了,以期為家畜疾病控制提供一種新的AMO2CLA長效劑型。1材料與方法1.1試驗材料1.1.1主要試劑阿莫西林對照品(含量86.3%):由中國獸藥監(jiān)察所提供;克拉維酸對照品(含量91.3%):由中國藥品生物制品檢定所提供;5%、10%、15%AMO2CLA注射用混懸劑:本實驗室研要的是產(chǎn)生2內(nèi)酰胺酶,此酶水解AMO的2內(nèi)酰胺環(huán)滅活A(yù)MO而起到耐藥作用。克拉維酸(CLA)是不可逆性競爭型2內(nèi)酰胺酶抑制劑,CL

4、A同2內(nèi)酰胺酶的活性位點有很高親和力,能與2內(nèi)酰胺酶的催化中心相結(jié)合,以競爭性抑制方式抑制2內(nèi)酰胺酶作用,使得細菌恢復(fù)對AMO的敏感性,提高AMO的抗菌活性。AMO2CLA制劑在人醫(yī)臨床上劑型較多,有糖漿、分散片、泡騰片、顆粒劑、咀嚼片、干混懸劑、干糖漿、片劑和注射劑等,在國外獸醫(yī)臨床上,AMO2CLA的劑型有片劑、注射劑和混懸劑等,而在國內(nèi)獸醫(yī)臨床上未見報道。本研究為了提高AMO的抗菌活力,延長AMO的作用時間,通過摸索以注射用大豆油為收稿日期:2003209218作者簡介:湯樹生(19732),男,福建人,在讀博士,主要從事動物營養(yǎng)與飼料加工研究。E2mail:tssfj通訊作者:肖希龍,

5、E2mail:xiaoxl制;阿莫西林克拉維酸混粉:由山東明發(fā)制藥贈送;輝瑞AMO2CLA注射用混懸劑:由輝瑞公司贈送;注射用大豆油:由廣州環(huán)葉制藥有限公司提供;其他常規(guī)試劑從市場購入;豬血漿:采新鮮健康豬血,3000r󰃗min離心15min,取血漿-20保存?zhèn)溆谩?.1.2CLA衍生化試劑的配制1稱取10.31g咪唑于50mL的容量瓶中,加30mL雙蒸水溶解,加入5mol󰃗L的鹽酸2.5mL,用鹽酸調(diào)pH值至6.8,加水定容至50mL,保存于廣口瓶中備用。1.1.3主要儀器高效液相色譜儀(HPLC):SP8810型泵、SP8450型UV檢測器、SP4270型積

6、分儀、7125型進樣閥、反相C218柱(5m、100×4.6mm,DIKMA公司)。1.1.4試驗動物長白豬,體重1520kg,共206期湯樹生等:阿莫西林2克拉維酸注射劑及其在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究721頭,籠養(yǎng),自由采食飲水,飼喂不含抗菌藥物的全價日糧,試驗前飼養(yǎng)7d。1.1.53p97實用藥物動力學(xué)計算程序為中國藥理學(xué)會數(shù)學(xué)藥理專業(yè)委員會編制。1.2試驗方法1.2.1AMO2CLA注射用混懸劑的制備從植物變異系數(shù),以不同天測得的結(jié)果算出日間變異系數(shù);按同樣方法測定血漿中CLA測定方法的日內(nèi)變異系數(shù)和日間變異系數(shù)。1.2.4藥物代謝動力學(xué)試驗動物與分組:20頭健康的

7、長白商品仔豬,飼喂7d后,隨機分成4組,即:第1組為肌注單方AMO注射用混懸劑組,第2組為肌注自制AMO2CLA注射用混懸劑組,第3組為肌注輝瑞公司AMO2CLA注射用混懸劑組,第4組為靜注AMO2CLA水溶液組。給藥:第1、2、3組給藥前要充分將各混懸劑振搖混勻,以15mg󰃗kgbw劑量(以AMO計)于油中篩選合適的油作溶媒,從混懸液的穩(wěn)定劑中篩選合適的助懸劑,然后篩選出合適的附加劑,進行組方配伍,試制樣品。根據(jù)選擇的助懸劑和附加劑,分別確定高、中、低3個濃度,共組成9個處方,配制成品,并考察外觀性狀,微粒大小,沉降體積比,重新分散試驗,抽針試驗等項目,選擇各項

8、指標最佳者進行穩(wěn)定性研究。1.2.2AMO2CLA注射用混懸劑穩(wěn)定性試驗方法根據(jù)農(nóng)業(yè)部獸藥穩(wěn)定性技術(shù)規(guī)范,對5%、10%、15%3種規(guī)格(以AMO計,下同)的AMO2CLA注射用混懸劑各3個批次進行光加速試驗和加溫加濕試驗。1.2.3血漿中AMO和CLA建立色譜條件:IntertsilC218柱(54.6IKMA公耳后頸部肌肉注射;第4組在耳靜脈注射相同劑量的AMO2CLA水溶液。血樣采集:,0(給藥前0.2、0.2、3、4、6、8、10、36、60512h。1.:血樣采集后,立即置于含司);0.050.1mol󰃗L三乙胺127.5,磷酸調(diào)pH值至3

9、.5做流動相;流速1.0mL󰃗min;檢測波長:AMO為228nm,CLA為311nm;進樣量100L。血漿樣品處理:取乙腈10mL于50mL離,2500r󰃗min離心10min,分離血漿,吸取上層血漿置于1.5mL離心管中,按方法處理后測定AMO和CLA的含量。數(shù)據(jù)處理:所得血藥濃度數(shù)據(jù)采用中國藥理學(xué)會編制的3p97藥物動力學(xué)程序軟件在微機上處理,進行優(yōu)化選擇和房室模型擬合,確定最適藥物動力學(xué)模型,計算出藥物動力學(xué)參數(shù),同時以血藥濃度平均值對時間作藥時曲線。心管中,慢慢加入血漿樣品1mL,邊加入邊渦旋,3000r

10、83255;min離心15min,取上清液于25mL雞心瓶中,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至近干,再用氮氣吹干,用1mL雙蒸水溶解,用0.2m濾膜過濾,進HPLC測定。CLA進樣前按41的比例和衍生化試劑混合均勻,在室溫放置衍生化10min。標準曲線的測定:分別取AMO豬血漿標準工作液、CLA豬血漿標準工作液,照方法操作,記錄色譜圖與峰面積。回收率試驗:制備低、中、高AMO或CLA3種不同濃度血漿藥物樣品,照方法處理后HPLC測定,計算回收率。精密度試驗:于空白血漿中分別加入中、低3個濃度水平AMO標準工作液,分別配制高、的血漿藥物樣品,

11、按方法測定,連續(xù)進樣5次,連續(xù)3d,以1日內(nèi)測得的AMO濃度計算日內(nèi)2結(jié)果與分析2.1AMO-CLA注射用混懸劑的研制22.1.1AMO2CLA混懸劑粒度分布藥物粒度經(jīng)顯微計數(shù)法測定,結(jié)果見表1,結(jié)果表明,AMO2CLA注射用混懸劑的粒度分布均勻,粒徑大于15m的顆粒數(shù)小于10%。2.1.2制劑的混懸穩(wěn)定性試驗AMO2CLA注射用混懸劑室溫放置30d的結(jié)果見表1。從表中結(jié)果可以看出:藥物粒徑分布未見顆粒變大和黏結(jié),一定粒徑大小的顆粒數(shù)量無明顯變化。制劑的性狀、沉降體積比等各項指標未見變化,表明混懸穩(wěn)定性良好3。2.2AMO-CLA注射用混懸劑的穩(wěn)定性試驗結(jié)果2.2.1光加速試驗分

12、別對5%、10%、15%3種規(guī)格的AMO2CLA注射用混懸劑樣品進行了光加速722畜牧獸醫(yī)學(xué)報表130dAMO-CLA混懸液穩(wěn)定試驗的不同粒徑的顆粒數(shù)Table1DistributionofdruggranulesofAMO-CLAsuspensioninstabletest35卷%>15.09.06粒徑diameter󰃗m0d10d20d30<2.02.092.092.182.082.04.010.0510.0710.1310.094.06.011.3111.3411.5111.526.08.017.2017.2617.3017.328.0

13、13.038.9038.4338.0337.9613.015.011.4011.6011.6311.77試驗,該制劑在4500±500Lx強光照射10d,制劑的相對含量、外觀色澤、粒度、分解產(chǎn)物等各項指標均無明顯變化,結(jié)果表明該制劑對光穩(wěn)定。2.2.2加溫加濕試驗對5%、10%、15%3種規(guī)格(S󰃗N)31計算,本方法CLA的檢測限為0.07g󰃗mL。2.3.4精密度試驗結(jié)果AMO高、中、低3個濃度(24.75、6.19、0.39g󰃗mL)的血漿樣品的精密度試的自制的AMO2CLA注射用混懸劑進行加溫加濕試驗,結(jié)果表明,該制劑在相對濕度

14、65%、30±2條件下處理6個月,樣品定期考察,各項指標均正常,6個月末的平均相對含量都在90%以上。綜合考慮各因素,本制劑在密閉條件下對溫、濕度尚屬穩(wěn)定。2.3血漿中AMO和CLA測定方法的建立2.3.1AMO的標準曲線AMO在0.24.75g󰃗mL濃度范圍,驗結(jié)果表明,日內(nèi)變異系數(shù)分別為1.9%、1.9%、2.4%,日間變異系數(shù)分別為4.0%、2.3%、4.4%,中、低3個濃度(18.7、0.15g󰃗CLA高、mL)日內(nèi)變異系數(shù)分別1.2%0.異系數(shù)分別為2.6.AMO。.2.4.1血漿中AMO和CLA含量測定結(jié)果各組積為縱坐標作標準曲線,24.7

15、5g󰃗mL仔豬注射藥物后,各采血點血漿中AMO的含量測定結(jié)果見表2;各采血點血漿中CLA的含量測定結(jié)果見表3。以上結(jié)果表明,以15mg󰃗kgbw的劑量(以AMO計)肌注注射用混懸劑后,AMO血藥濃度約在0.57h即達到峰值;CLA血藥濃度約在0.35h即達系,相關(guān)系數(shù)0.5,A=155228C-16486。2.3.2CLA的標準曲線CLA在0.0718.7g󰃗mL濃度范圍,以藥物濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標作標準曲線,結(jié)果顯示CLA在0.0718.7g󰃗mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)到峰值。AMO在給藥后72h血藥濃度低于

16、檢測限;CLA在給藥后48h血藥濃度低于檢測限。以15mg󰃗kgbw的劑量(以AMO計)靜注AMO2CLA系,相關(guān)系數(shù)r=0.9997,方程為A=342850C+333416。2.3.3回收率試驗結(jié)果AMO的高、中、低3個濃水溶液后,AMO在給藥后12h血藥濃度低于檢測限;CLA在給藥后8h血藥濃度低于檢測限。2.4.2AMO和CLA的藥物動力學(xué)參數(shù)根據(jù)表度(24.75、6.19、0.39g󰃗mL)血漿樣品的回收率分別為96.45%±5.91%、97.21%±6.88%、101.28%±4.18%,變異系數(shù)分別為0.06、0.07、

17、0.04,說明本檢測方法重現(xiàn)性良好,適用于血漿樣品中AMO的測定。以信噪比(S󰃗N)31計算,本方法AMO的檢測限為0.19g󰃗mL。CLA的高、中、低3個濃度(18.7、4.68、0.15g󰃗mL)血漿樣品的回收率分別為96.65%±5.49%、97.28%±5.33%、102.23%±5.18%,變異中血藥濃度測定結(jié)果,經(jīng)藥動學(xué)數(shù)據(jù)處理程序3p97處理,得到模型選擇參數(shù)。依據(jù)模型確定原則,即擬合度R2越大,AIC值越小,則其模型擬合越好。通過比較可知肌注AMO2CLA混懸液在豬體內(nèi)的藥動學(xué)過程符合權(quán)重為1b

18、3255;C的一級吸收的二室模型;靜注AMO2CLA水溶液在豬體內(nèi)的藥動學(xué)過程符合權(quán)重為1󰃗C的一級吸收的一室模型。本文據(jù)此模型進行藥物動力學(xué)參數(shù)計算,得出藥物動力學(xué)參數(shù)結(jié)果見表46。系數(shù)分別為0.06、0.05、0.05,說明本檢測方法重現(xiàn)性良好,適用于血漿樣品中CLA的測定。以信噪比6期湯樹生等:阿莫西林2克拉維酸注射劑及其在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究表2各組豬血漿中AMO濃度測定結(jié)果Table2TheresultsoftheconcentrationofAMOinplasma(n=5)723±SD,g󰃗XmL第4組Group445.0328±

19、;0.079341.0712±0.105837.2484±0.96132.2376±0.204327.9726±0.218321.0036±0.220515.6932±0.29208.979±0.11225.100±0.05671.686±0.01730.5574±0.0207.8±0.0185ND時間Time󰃗h00.170.330.500.751.001.502.003.004.006.008.0010.012.024.036.048.060.072.0第1組Gro

20、up104.529±0.05510.289±0.72412.514±0.65712.533±0.19411.102±0.6699.363±0.28997.699±0.9254.204±0.1382.581±0.2791.617±0.1251.199±0.06491.017±0.0190.903±0.0440.6526±0.02690.502±0.01070.382±0.03570.248±0.0183第2組Group24.54

21、58±0.01010.1812±0.05812.4218±0.04512.6282±0.09811.5802±0.1959.2012±0.0577.2318±0.2904.2876±0.0332.7468±0.1041.5626±0.0311.1558±0.0181.0016±0.0120.9086±0.0190.6814±0.0050.5042±0.0040.37540.第3組Group34.4972±0.0739.8068±

22、;0.41812.1016±0.37612.5512±0.16311.6622±0.0629.1980±0.02317.0766±0.0964.2300±0.0672.7546±0.0561.5762±0.0171.2048±0.0251.0702±0.0224±0.0.73260.4±0.0082370±0.015ND-未檢出(notdetectable)表3Table3trationof±SD,g󰃗inplasma(n=5)XmL表4第

23、1、2、3組豬AMO的藥物動力學(xué)參數(shù)Table4PharamacokineticparameterofAMO3swine(n=5)ingroup1參數(shù)ParameterA時間Time󰃗h00.170.330.500.751.001.502.003.004.006.008.0010.012.024.036.048.0第2組Group21.6284±0.2362.713±0.06812.384±0.03742.1068±0.0281.699±0.0855第3組Group3第4組Group409.676±0.0656.778

24、±0.965.722±0.1243.750±0.0622.545±0.0481.112±0.0350.513±0.014ND單位Unitg󰃗mL1󰃗hg󰃗mL1󰃗h1󰃗hh(mg󰃗kg)󰃗(g󰃗mL)hhh1󰃗h1󰃗h1󰃗h(g󰃗mL)h(kgh)L󰃗h第1組第2組第3組Group1Group2Group319.09919.191

25、020.23120.6191.2420.0264.2290.0970.8551.1190.1050.0680.2380.34126.8210.5450.61870.66171.21301.39460.02440.02894.19253.71970.09660.09040.85400.83261.12031.04750.16530.18630.06520.07740.23140.24630.34650.33680.19760.20500.54840.58211.396±0.07110.929±0.0492.575±0.05828.462±0.0822.37

26、5±0.0172.111±0.0071.647±0.0062.7318±0.11412.430±0.111BKaTlagV󰃗F(c)T1󰃗2T1󰃗2T1󰃗2KaK21K10K12AUCCL(s)T(max)()1.2786±0.04101.294±0.0080.8298±0.01250.833±0.0130.5752±0.01250.560±0.0050.2326±0.00420.2316±0.0020

27、.1936±0.00270.1956±0.0020.1726±0.00650.177±0.0010.1186±0.00170.1194±0.0010.0832±0.00280.0832±0.001NDND26.82128.431024.05330.3174±0.00510.3166±0.0020.119±0.02474.06675.906873.1558注:ND-未檢出(notdetectable)724表5第4組靜注AMO-CLA水溶液后AMO和CLA的藥物動力學(xué)參數(shù)畜牧獸醫(yī)學(xué)報35

28、卷表7混懸劑中AMO和CLA的生物利用度Table7BioavailabilityofAMOandCLAinAMO-CLAsuspension%Table5PharamacokineticparameterofAMOandCLAingroup4swines(n=5)組別Groups克拉維酸CLA12.5640.8041.1940.86215.6270.960生物利用度Bioavailability(F)±SDX參數(shù)ParameterC0KeV󰃗F(c)T1󰃗2(Ke)AUCCL(s)單位Unitg󰃗mL1󰃗h(mg

29、83255;(g󰃗kg)󰃗mL)h(g󰃗mL)h(kgh)L󰃗阿莫西林AMO49.35450.56610.30391.224487.17890.1721第1組AMO85.4882.0086.3985.2282.1284.24±2.04Group1第2組Group1第3組3AMO84.7184.7182.1583.7783.7683.82±1.05CLA83.0883.6582.8984.9983.7283.67±0.82AMO87.2587.2587.0187.3086.4887.06±0.

30、3483.4683.9186.4085.0085.0084.75±1.14表6第2、3組豬CLA的藥物動力學(xué)參數(shù)Table6PharamacokineticparameterofCLAingroup2,3swine(n=5)3討論3.1關(guān)于AMO-CLA注射用混懸劑的研制混懸劑是藥物以微粒狀態(tài)分散于分散介質(zhì)中形成的非均勻的液體制劑,粒,在混懸劑中添加適量的助懸劑,可使藥物容易分散和減緩顆粒沉降6。藥物粒徑越小,分散介質(zhì)的黏度越大,藥物沉降越緩慢7,混懸劑的粒度過大易產(chǎn)生黏壁、黏度增加、不易傾倒等現(xiàn)象。本制劑主要利用延緩釋放和延緩吸收的方法,采用注射用大豆油,與附加劑形成凝膠,以凝膠高

31、分子化合物形式形成凝膠骨架物,制成藥物的油溶液,從而延緩藥物的擴散和溶出。加之藥物以微粒狀存在于油溶液中,在注射部位形成貯庫,從而延緩吸收。故本研究從緩釋材料中篩選出注射用大豆油為制劑載體,加入適宜的附加劑,成功研制出AMO2CLA注射用混懸劑。3.2關(guān)于混懸劑的穩(wěn)定性參數(shù)ParameterA單位Unitg󰃗mL1󰃗hg󰃗mL1󰃗h1󰃗hh(mghh1󰃗h1󰃗h1󰃗h(g󰃗mL)h(kgh)L󰃗h第2組Group23.10150.563

32、40.24870.03030322.52770.05930.07210.24060.281513.30250.22550.2802第3組Group33.13570.56730.249.95311.221822.63340.09210.07300.23810.286913.21800.22700.3804BKaTlagV󰃗F(c)T1󰃗2T1󰃗2T1󰃗2KaK21K10K12AUCCL(s)T(max)()2.4.3AMO和CLA的生物利用度通過表46中的AUC算出單方AMO注射用混懸劑、自制AMO2

33、CLA注射用混懸劑和輝瑞公司的AMO2CLA注射用混懸劑的生物利用度,見表7。分別對表47中藥物動力學(xué)的主要參數(shù)進行t檢驗,結(jié)果表明自制AMO2CLA注射用混懸劑和輝瑞公司的AMO2CLA注射用混懸劑肌注后豬體內(nèi)的AMO和CLA的藥物動力學(xué)的主要參數(shù)Tmax、Cmax、T1󰃗2AUC等和生物利用度差異不顯著(󰃜t󰃜<t0.05)。同時藥物動力學(xué)試驗結(jié)果表明,本制劑吸收本試驗根據(jù)1999年農(nóng)業(yè)部13號文件“獸藥穩(wěn)定性試驗技術(shù)規(guī)范(試行)”的要求,對AMO2CLA注射用混懸劑的含量、外觀性狀、沉降體積比、粒度、分解產(chǎn)物等項目進行了考察,研究了A

34、MO2CLA注射用混懸劑在溫度、濕度、光照等條件下的穩(wěn)定性。試驗結(jié)果表明,在光加速試驗第10天,AMO2CLA注射用混懸劑的含量及各項指標均較穩(wěn)定。在加溫加濕穩(wěn)定性試驗6個月末,AMO2CLA注射用混懸劑的外觀色澤沒有發(fā)生明顯變化,其余各項指標均為正常,AMO和CLA的含量雖有下降,但相對標示量仍在良好,半衰期長,AMO的血漿藥物濃度在0.3g󰃗mL可維持48h以上。6期湯樹生等:阿莫西林2克拉維酸注射劑及其在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究72590%以上,因此,綜上所述,AMO2CLA注射用混懸劑對光、熱穩(wěn)定。3.3關(guān)于血漿中AMO及CLA的測定方法文獻報道目前同時測定血漿中AMO和

35、CLA含量的方法很多,其中HPLC方法是同時測定血漿中AMO和CLA含量使用最普遍的一種方法,常用流相半衰期,表明此兩種藥物在體內(nèi)消除緩慢。t檢驗結(jié)果(󰃜t󰃜<t0.05)表明自制AMO2CLA注射用混懸劑和輝瑞公司的AMO2CLA注射用混懸劑肌注后豬體內(nèi)的AMO和CLA的主要藥物動力學(xué)參數(shù)Tmax、說明本制劑和瑞Cmax、F、T1󰃗2AUC等差異不顯著。輝公司產(chǎn)品具有同等效能。本制劑中AMO的消除半衰期長達27.31h,CLA的消除半衰期長達22.38h,而同劑量的AMO2CLA水溶液靜脈注射后的消除半衰期僅為1.22h和0.86h,說明

36、本制劑有延緩藥物釋放作用。按15mg󰃗kgbw劑量(以AMO計)靜注AMO2CLA水溶液后10h的血藥濃度為0.23g󰃗mL,而肌注同劑量本制劑48h后仍可維持0.3g󰃗mL(以AMO計)的血漿濃度,該血漿濃度在豬體內(nèi)對動相為甲醇2磷酸鹽緩沖液,乙腈2磷酸鹽緩沖液,甲醇2乙腈2磷酸鹽緩沖液、磷酸鹽2三乙胺2甲醇緩沖液等。本研究參照以上國內(nèi)外有關(guān)方法,經(jīng)過多次比較試驗,并對前處理方法進行改進,采用磷酸鹽緩沖液2三乙胺2甲醇作流動相,通過多次調(diào)整流動相配比,以及流動相pH值(pH值變化影響保留時間),最終確定流動相為:0.05mol󰃗

37、L磷酸鹽緩沖液0.1mol󰃗L三乙胺緩沖液甲醇=80127.5,磷酸調(diào)pH值為3.5。由于AMO和CLA都不穩(wěn)定8,9,所以測定血漿中CLA及AMO時,對照品要現(xiàn)配現(xiàn)用。AMO和CLA都有兩性化合物性質(zhì),與生物體液中的極性物質(zhì)性質(zhì)相近,困難。本文采用乙腈沉淀蛋白,轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至近干,。由于CLA,HPLC方法進行檢測,CLA的靈敏度,需進行柱前衍生化反應(yīng)10,本研究用Mark咪唑衍生化法,進樣前按41(樣品體積比咪唑體積)的比例混勻,在室溫下放置10min即可1。本方法所測得AMO和CLA標準曲線的線性關(guān)系良好,AMO的檢測限為0.19g󰃗mL,CLA的檢測限為0

38、.07g󰃗mL?；厥章试囼灡砻鞅緳z測方法重現(xiàn)性良好,精密度試驗表明方法檢測結(jié)果可靠,說明本研究所采用的方法可以用于血漿中CLA及AMO的測定。3.4關(guān)于藥物動力學(xué)本研究的肌肉注射和靜脈注射的結(jié)果均表明,AMO和CLA的藥物動力學(xué)過程相似。靜脈注射的結(jié)果表明,AMO2CLA在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)符合一級吸收的一室模型。CLA的消除半衰期(0.86h)比AMO的消除半衰期(1.22h)短,說明CLA在豬體內(nèi)消除速度比AMO快。肌肉注射AMO2CLA注射用混懸劑后,藥時曲線平緩。AMO和CLA在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程符合一級吸收二室模型,與有關(guān)資料報道一致。本制劑中AMO和CLA在體內(nèi)

39、吸收良好,AMO和CLA的消除相半衰期遠大于分布11、多殺性巴12。所以對普、多殺性巴氏15mg󰃗kg(O)d1次。:1MarkF,ChristopherR.Assayofamoxicilinandclav2ulanicacid,thecomponentsofaugmentsininbiologicalfluidswithhighperformanceliquidchromatographyJ.AntimicrobAgentsChemother,1982,22:753.2吳志明,金芳,侯會敏.布洛芬混懸劑的制備和穩(wěn)定性J.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,1998,29:(2)6263.3Wi

40、lsoCG,WashingtonN,GreavesL,etal.Bimodalreleaseofibuprofeninasustained2release:studyAakeJ.IntJPharmaceutics,1989,50:1554朱仕銘.獸藥緩釋制劑J.獸藥與飼料添加劑,1999,4(2):15.5唐明義,耿奎士.高分子藥物緩釋材料J.化工新型材料,1999,26:2628.6SaanoV,ParonenP

41、,PeuraP,etal.Pharmacokineticsoftwo200mgibuprofenfilm2coatedtabletsandaneffervescenttabletJ.DrugDevIndPharm,1992,18(4):491497.7GianniniEH,BrewerEJ,MillerML,etal.Ibuprofensuspensioninthetreatmentofjuvenilerheumatoid645652.8張秀英.阿莫西林混懸液的含量測定J.中國獸藥雜.arthritisPediatricRheumatologyCollaborativeStudyGroupJ.

42、JPediatr,1990,117(4):726志,2000,34(6):2123.畜牧獸醫(yī)學(xué)報Simultaneousdeterminationof35卷amoxicillinand9王齊放,李三鳴,趙吉吉等.pH及不同緩沖鹽對阿莫西clavulanicacidinhumanplasmabyHPLCwithUVdetectionJ.JournalofPharmaceuticalandBiomedical林化學(xué)穩(wěn)定性的影響J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,1999,16(3):176178.10蘇勇,張伶俐,朱毅,等.HPLC法測定安奇片中羥666.Analysis,2002,30:66112Agerso

43、H,FriisC.BioavailabilityofamoxycillininpigsJ.JournalofVeterinaryPhrarmacologyand氨芐青霉素和克拉維酸鉀的含量J.中國藥房,1999,10(2):90.11HoizeyG,LamiableaD,FrancesC,et.al46.Therapeutics,1998,21:41StudyonAmoxycillin-ClavulanicAcidSuspensionanditsPharmacokineticsinSwineTANGShu2sheng,XIAOXi2long(CollegeofVeterinarymedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China)Abstract:Amoxycillin(AMO)2clavulanic