紙色譜與薄層色譜法ppt課件

1、實驗十五1.了解用色譜法定性分析及提純化合物的原理；2.熟習并掌握薄層色譜及紙色譜的根本操作。(1) 色譜法色譜法的根本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能(分配)的不同，或其親和性的差別，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì),進展反復的吸附或分配的作用,從而使各組分分別. 流動的混合物溶液稱為流動相；固定的物質(zhì)稱為固定相。 根據(jù)分別的原理不同,可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等,根據(jù)操作條件的不同,又可分為柱色譜、紙色譜、 薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等類型。 薄層色譜常用TLC表示,按其作用機理可以分為吸附薄層層析,分配薄層層析等, 根本原理是當待分別的

2、混合物隨溶媒流動相經(jīng)過固定相時，由于各組份的理化性質(zhì)存在差別，與兩相發(fā)生相互作用吸附、溶解、結合等的才干不同，在兩相中的分配含量對比不同，而且隨溶媒向前挪動，各組份不斷地在兩相中進展再分配。與固定相互相作用力越弱的組份，隨流動相挪動時遭到的阻滯作用小，向前挪動的速度快。反之，與固定相互相作用越強的組份，向前挪動速度越慢。分步搜集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而到達將各組份分別的目的。 薄層層析的優(yōu)點：適用于小量樣品幾到幾十微克的分別又可用來精制樣品，特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。 紙色譜主要用于多功能團或高極性化合物的分析和分別 根本原理是以紙為

3、載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進展展開的分配色譜。供試品經(jīng)展開后，可用比移值(Rf)表示其各組成成分的位置，但由于影響比移值的要素較多，因此普通采用在一樣實驗條件下與對照物質(zhì)對比以確定其異同。作為藥品的鑒別時，供試品在色譜中所顯主斑點的顏色或熒光與位置，應與對照品在色譜中所顯的主斑點一樣。作為藥品的純度檢查時，可取一定量的供試品，經(jīng)展開后，按各藥品項下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點的個數(shù)或呈色或熒光的強度。 Rf=溶液最高濃度中心至原點中心間隔/溶劑前沿至原點中心的間隔。紙色譜演示 甘氨酸、亮氨酸的水溶液，兩種氨基酸各取等體積組成混合液，展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸體積

4、比，2%的茚三酮乙醇溶液。大試管一支，濾紙2*15cm,噴霧器一支，電吹風一把，毛細管口徑1mm假設干支，直尺一把，鉛筆一支 1%偶氮苯的苯溶液，1%蘇丹III的苯溶液，1%的羧甲基纖維素鈉的水溶液，硅膠，9：1的無水苯-乙酸乙酯。研缽一個，臺秤，載玻片7.5*2.5cm5片，烘箱一個，廣口瓶一個。 一、薄層色譜 偶氮苯和蘇丹III的分別 1、薄層板制備：將硅膠G和CMC溶液調(diào)成均勻的糊狀，用滴管涂于干凈的載玻片上，取下涂好薄層板，置程度桌面上于室溫下晾干，在110烘60分鐘。置于枯燥箱中留以備用。2、 點樣：距底邊1cm處劃一橫線作為起始線，點樣直徑不應超越2mm，點間間隔約為1.8 cm，

5、點樣時必需留意勿損傷薄層外表。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點分散大，像降落傘。取三塊分別點樣試劑為偶氮苯和混合液，混合液和蘇丹III，偶氮苯和蘇丹III 3 展開：廣口瓶需預先用展開劑9：1的無水苯-乙酸乙酯飽和，將點好樣品的薄層板放入裝有展開劑的廣口瓶中，薄層板浸入展開劑的深度為距薄層板底邊約0.7cm切勿將樣點浸入展開劑中，密封室蓋，等展開至規(guī)定間隔距薄層板上端1cm左右，取出薄層板，盡快劃一橫線，晾干，測出顯色點與起始線的間隔和溶劑上升的間隔，并計算比移值。 1取兩片新華一號濾紙，分別用鉛筆在距下端點約1cm處起始線，用直尺從中間折疊，在左右兩側點樣距約1.8cm，

6、試劑分別為亮氨酸和混合酸，甘氨酸和混合酸.展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸2ml。展開劑在2/15cm的大試管。 2待展開劑上升約7厘米時，取出作終點線后在紅外燈下烘干。 3枯燥后噴上2%的茚三酮乙醇溶液顯色。 4取一塊薄層板分別點樣亮氨酸和甘氨酸，用展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸展開。 5測出顯色點與起始線的間隔和展開劑上升間隔，并計算比移值。薄層色譜紙色譜 1.薄層板制備好之后，一定要進展活化，除去水分； 2.點樣時要留意樣點直徑要不超越2mm。點幾個樣點時間隔應11.5。一次點樣假設不夠，可點幾次，但要等溶劑揮發(fā)后再點下一次，防止量多出現(xiàn)拖尾景象； 3.所用濾紙應質(zhì)地均勻平整 且實驗中手不要觸及濾紙的外表，以免污染； 4.防止兩條濾紙在大試管中碰一同，切勿將樣點浸入展開劑中； 5.假設溶質(zhì)展開后較分散,那么選取其最高濃度中心； 6.在向濾紙噴灑茚三酮時，要以霧狀噴灑，不能有液滴在其外表凝集，更不能有液滴在其外表流動，以免影響展