食管癌術(shù)后聯(lián)合放化療對淋巴細(xì)胞亞群的影響

1、食管癌術(shù)后聯(lián)合放化療對淋巴細(xì)胞亞群的影響臨床和實驗區(qū)學(xué)雜志2011年3月第10畚第5期?353?食管癌術(shù)后聯(lián)合放化療對淋巴細(xì)胞亞群的影響朱靜凌揚(yáng)張長松朱長太(常州市腫瘤醫(yī)院腫瘤實驗室劉永萍董春雷孔穎澤江蘇常州213001)【摘要】目的探討食管癌術(shù)后放化療對患者細(xì)胞免疫的影響.方法應(yīng)用流式細(xì)胞儀定量檢測73例食管癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群,共獲取術(shù)后不同時間點的139份血樣.結(jié)果術(shù)后不同治療方法對淋巴細(xì)胞亞群的絕對和相對定量結(jié)果均有影響.CD4+,CD8+T細(xì)胞絕對數(shù)各組均有統(tǒng)計學(xué)差異,術(shù)后間期延長的患者呈現(xiàn)更低的CD4/CD8.放療組對CD3+,CD4+和CD8+絕對數(shù)有影響.CIM+T細(xì)胞隨術(shù)

2、后間期延長而降低,導(dǎo)致術(shù)后T細(xì)胞免疫功能失衡.結(jié)論術(shù)后聯(lián)合治療方式與CD4+T細(xì)胞相對定量相關(guān),提示食管癌術(shù)后聯(lián)合治療可能選擇性影響患者免疫功能.【關(guān)鍵詞】食管癌聯(lián)合化療淋巴細(xì)胞亞群InfluenceofcombmpostoperativeradiOtherapyandchemotherapyonperipherallymphocytesubsetsinpatientswithesophagealsqua-mOllScellcarcinoma.ZHUng,LING,ZHANGChangsong,eta1.ClinicalOncologyLaboratory,ChangzhouTumorHosp

3、ital,Chang-zhouflanu213001,China.【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheinfluenceofpostoperativechemoand/orradiotherapyoncellularimmunityinpatientswithesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC).MethodsAtotalof139bloodsampleswereobtainedatdifferenttimepointsrelativetosurgeryfrom73patientswithESCC.PeripheralTl

4、ymphocytesubsetsinresponsetochemotherapy,radiotherapy,andcombinedchemotherapyandradiotherapywereanalyzedbyflowcytometry.ResultsChangesintheabsolutequantityandrelativeproportionsoflymphocytesubsetswereobservedamongdifferentadjuvanttherapygroups.ThereweresignificantdifferencesintheabsolutecountsofCD4+

5、andCD8+Tcellsamonggroups.andalowerCD4/CD8ratiowasfoundinpatientsreceivedadjuvanttherapylongaftersurgery.Compedwithothergroups,radiotherapyaloneshowedprofoundeffectontheabsolutecountofCD3+,CD4+,andCD8+Tcells.CD4+Tcelldecreasedwithtimeaftersurgeryandleadedtoapro-longedTcellimbalance.ConclusionThesefin

6、dingsconfirmaninteractionbetweenadjuvanttherapyandperipheralCD4+Tcells,andimplythatadjuvanttherapymayhaveselectiveinfluenceoncellularimmuneafterESCCsurgery.【Keywords】ESCC;Adjuvanttherapy;Lymphocytesubset人體免疫系統(tǒng)理論上具有保護(hù)機(jī)體免于腫瘤的功能,因為它可以早期監(jiān)測并清除腫瘤細(xì)胞,或者保持腫瘤靜息狀態(tài),同時腫瘤細(xì)胞也具有腫瘤免疫逃逸的功能,因此二者的平衡在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用¨J.

7、淋巴細(xì)胞亞群在腫瘤中扮演細(xì)胞免疫的重要功能,CD4+和CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫功能_3J.食管癌是高度惡性腫瘤之一,手術(shù),化療,放療是其主要治療方式,能顯著提高患者生存率l5J.食管癌術(shù)后放化療可能導(dǎo)致T細(xì)胞免疫抑制,不同的治療方式對于免疫功能的恢復(fù)有選擇性影響_6J.為了解食管癌術(shù)后放化療對患者免疫功能的作用機(jī)制,我們測定了不同治療方式下患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況,其結(jié)果如下.1資料與方法1.1研究對象本研究食管癌患者共73例,均為20072009年常州腫瘤醫(yī)院收治的術(shù)后住院患者,均經(jīng)病理學(xué)檢查證實.食管癌患者按術(shù)后治療方式分為放療組(RT)13例,化療組(CT)43例和放化療

8、聯(lián)合治療組(RT+CT)17例,其中男性51例,女性22例.組織學(xué)分類:分化良好15例(20.6%),中等分化45例(61.6%),分化差13例(17.8%).38例為II期,20例III期,15例IV期.資助:本研究受國家自然基金項目(81071799),常州市科技計劃(CS2008214,C$20102021,CS20102022),常州市”831”人才工程和常州市衛(wèi)生局”136”工程支持.1.2方法患者住院后采集外周血樣,檢測白細(xì)胞,分類計數(shù)和流式細(xì)胞儀分析.采取術(shù)后輔助治療時必須滿足白細(xì)胞>500/ixl和血小板>20000/txl.為減少分析誤差,所有血樣

9、標(biāo)本均在上午8至9點采集.73例患者共收集不同時間點樣本139個.白細(xì)胞總數(shù)檢測使用Beckman公司的CoulterACTDiV分析儀.外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測采用FACSCalibur流式細(xì)胞儀,使用雙色免疫熒光流式SimuhestIMKLymphocyte試劑盒檢測CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+和NK(CD3CD16+和/或CD56+)T淋巴細(xì)胞的相對及絕對計數(shù).檢測方法嚴(yán)格按照說明書操作.1.3統(tǒng)計學(xué)分析全部數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析.每個指標(biāo)均采用中位數(shù)計算.兩組間比較采用MannWhitneyU檢驗,多組間比較采用KruskalWallis檢驗.P&am

10、p;lt;0.05作為統(tǒng)計學(xué)差異檢測水平.2結(jié)果2.1食管癌患者術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞亞群相對定量結(jié)果分析結(jié)果顯示,T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+,CD4+,CD8+,NK)相對定量均與術(shù)后治療方式有相關(guān)性(P=0.001,P=0.O1,P=0.006和P=0037).放療組中CD3+和CD8+百分比相對低于化療及聯(lián)合組.放療組中NK百分比和CD4/CD8比率相對高于化療及聯(lián)合組.但是化療組CD4十百分比相對高于放療和聯(lián)合組.化療組和RT組比較,發(fā)現(xiàn)CD3+,CD4+,CD8+?354?JournalofClinicalandExperimentalMedicineVo1.10,No.5Mar.201

11、1和NK細(xì)胞百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義.CT組和聯(lián)合組比較,發(fā)現(xiàn)CIN+細(xì)胞百分比和CD4/CD8比率差異有統(tǒng)計學(xué)意義.放療組和聯(lián)合組比較,發(fā)現(xiàn)CD3+,CD8+和CIM/CD8比率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表1).表l食管癌患者術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞亞群相對定量結(jié)果分析表注:.化療組vs.放療組;化療組VS.聯(lián)合組;放療組VS.聯(lián)合組,P<0.05.2.2食管癌患者術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對定量及白細(xì)胞總數(shù)結(jié)果分析結(jié)果顯示,各治療組問NK細(xì)胞和淋巴細(xì)胞總數(shù)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.291,P=0.130),但CD3+,CD4+,CD8+絕對數(shù)和WBC總數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001,

12、P=0.012,P:0.003和P=0.006).我們發(fā)現(xiàn),RT組WBC總數(shù)高于CT組和聯(lián)合組,但CD3+,CD4+及CD8+偏低的,提示放療可能對T淋巴細(xì)胞亞群有抑制作用(表2).表2食管癌患者術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對定量及白細(xì)胞總數(shù)結(jié)果分析注:化療組VS.放療組;化療組VS.聯(lián)合組;放療組VS.聯(lián)合組,P<O.05.2.3食管癌患者T淋巴細(xì)胞亞群及白細(xì)胞總數(shù)與術(shù)后治療時間相關(guān)性分析我們按照術(shù)后采血時間將病例分為5組:1組3個月,2組46個月,3組7l2個月,4組1324個月和5組>24個月.結(jié)果顯示各組間CD3+,CD4+和CD8+百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

13、=0.013,P=0.042和P=0.040),NK細(xì)胞在各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.492,P=0.360),CD4/CD8比值呈現(xiàn)下降趨勢(P=0.010).各組間CD4+,CD8+絕對數(shù)和WBC差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.015,P=0.030和P=0.005).除了WBC,>24個月組中所有T淋巴細(xì)胞亞群和紅細(xì)胞(LBC)絕對數(shù)都低于其他組.結(jié)果提示,T淋巴細(xì)胞亞群隨術(shù)后時間的延長而有下降趨勢(表3,4).表3術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群相對定量隨時間變化分析CI)4+(cells/)CD84-(eelL)NK(cells/)WBC(×lo9/i)LBC(X109/L)

14、430.4(286.5-509.3)261.2(172.4465.9)225.2(106.4391.3)5.4((1.01.7)351.7(281.3644.31336.3(27O.0N443.71214.8(114.8-301.5)4.2(3.260)1.3(0.91.8)406.3(194.2721.0)376.1(316.7524.9)228.8(82.1462.7)5.5(4.28.2)1.5(0.91.9)347.3(23O.5633.8)493.8(297.8757.9)323.3(198.8515.9)6.3((1.0-2.1)246.3(1

15、60.2335.1)d,g,O.015254.3(137.1426.5),O.Q30197.8(111.8317.4)0.3607.3(5.610.7d,g,O.0050.9(0.81.5)d,gO.070注:1組VS.2組;1組VS.3組;1組vs.4組;1組VS.5組;2組VS.4組;2組VS.5組;g3組vs.5組;4組VS.5組,P<O.O5.3討論T細(xì)胞免疫在腫瘤預(yù)防和治療中發(fā)揮重要作用,食管癌新輔助化療引起T,NK和B細(xì)胞降低,導(dǎo)致機(jī)體免(下轉(zhuǎn)第357頁)臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志2011年3月第10卷第5期?357?(上接第354頁)疫功能紊亂J.雖然免疫在控制腫瘤生長和復(fù)

16、發(fā)方面仍存有爭議,但有證據(jù)表明T細(xì)胞對于患者預(yù)后有益.本研究結(jié)果表明,T淋巴細(xì)胞亞群相對和絕對定量在食管癌患者術(shù)后治療中變化顯著,放療組對CD3十,CIM+和CD8+絕對數(shù)影響最大,且CD3+,CD4+和CD8+相對數(shù)與術(shù)后時間關(guān)系緊密,各細(xì)胞亞群的恢復(fù)時間不一致.CD4/CD8比率降低與腫瘤負(fù)荷和差的預(yù)后相關(guān).大多數(shù)腫瘤免疫集中于CD8+T細(xì)胞,最近證據(jù)表明CD4+T細(xì)胞在免疫反應(yīng)中扮演重要角色,可能參與CD8+CTL細(xì)胞的作用,因此腫瘤免疫需要激活特異性CIM+T細(xì)胞9J.本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后患者免疫功能的失衡,特別是CD4+T細(xì)胞隨著術(shù)后時間的延長而降低,可能導(dǎo)致患者術(shù)后長期的免疫功能紊亂.因

17、此CD4+T細(xì)胞可以作用作為食管癌患者術(shù)后免疫監(jiān)測的指標(biāo)之一.我們也發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞在不同治療方式組和不同間期中差異沒有顯著性,暗示NK細(xì)胞在食管癌患者呈現(xiàn)靜止?fàn)顟B(tài),穩(wěn)定地參與腫瘤免疫的作用.總之,分析食管癌患者術(shù)后的細(xì)胞免疫功能,對于術(shù)后放化療方式的選擇及監(jiān)測是非常重要的.術(shù)后輔助治療可能導(dǎo)致T細(xì)胞的失衡,降低CD4+細(xì)胞的功能,以致T細(xì)胞免疫功能低下的時間延長,不利于患者免疫功能的恢復(fù).本研究結(jié)果提示,術(shù)后不同的輔助治療方式對于腫瘤患者的免疫作用不相同,因此在臨床治療中因針對不同的患者,不同間期的治療采取相應(yīng)的免疫治療,以此增強(qiáng)患者的免疫功能,延長術(shù)后食管癌患者的生存期.參考文獻(xiàn)1Koebel

18、CM,VermiW,SwannJB,eta1.AdaptiveimmunitymaintainsoccultcancerinanequilibriumstateJ.Nature,2007,450(7171):903907.2KimR,EmiM,TanabeK.CancerimmunoeditingfromimmunesuroveillancetoimmuneescapeJ.Immunology,2007,121(1):114.3KnutsonKL,DisisML.TumorantigenspecificThelperceilsincanc-erimmunityandimmunotherapyJ

19、.CancerImmunolImmunother,2005,54(8):721728.4IJinDC,DuXL,WangMR.ProteinalterationsinESCCandclinicalimplications:areviewJ.DisEsophagus,2009,22(1):920.5KleinbergL,ForastiereAA.Chemoradiationinthemanagementofe-sophagealcancerJ.JClinOncol,2007,25(26):41104117.6KangDH,WeaverMT,ParkNJ,eta1.SignificantimpairmentinimmunerecoveryaftercancertreatmentJ.