不規(guī)則抗體篩選操作規(guī)程

1、不規(guī)則抗體篩選操作規(guī)程一試劑和儀器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特異檢測試劑卡或抗人球蛋白（IgG）單特異檢測試劑卡。 2.上海血液生物醫(yī)藥有限公司3%抗篩試劑紅細(xì)胞懸液 3.離心機(jī)和孵育器 二標(biāo)本收集與處理 1血清或血漿都可以使用。 2如果在直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)中加入了血漿標(biāo)本，因?yàn)殁}離子的失活，補(bǔ)體依賴的抗體可能無法檢測出來，所以建議使用血清標(biāo)本。 三操作步驟 1取出試劑卡，平衡至室溫；使用前離心確保無氣泡和斷層。2觀察卡的反應(yīng)液面高度，確保試劑液面高于凝膠平面3mm左右，否則請勿使用；撕開試劑卡上的錫紙，撕開后的微柱請于1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行下面操作。3. 分別向反應(yīng)柱內(nèi)加入50 ul患

2、者血清或血漿。注意，加樣時(shí)，吸頭請勿觸及微柱管壁。 4再分別向反應(yīng)柱內(nèi)加入10ul 3%紅細(xì)胞懸液、(抗篩紅細(xì)胞)。5觀察柱中的反應(yīng)物各組分是否混勻，必要時(shí)輕彈幾下微柱充分，使反應(yīng)物混勻。6在孵育倉中37孵育15分鐘。7用離心機(jī)離心5分鐘，離心必須在加樣后30分鐘內(nèi)進(jìn)行。8. 從微柱正反兩面判讀并記錄結(jié)果。四結(jié)果判讀 陽性結(jié)果（）：紅細(xì)胞凝集為陽性結(jié)果。 陰性結(jié)果（）：無溶血及紅細(xì)胞未凝集為陰性結(jié)果。溶血會導(dǎo)致玻璃珠上方呈粉紅色或紅色。如果發(fā)現(xiàn)溶血現(xiàn)象，則應(yīng)先將血清或血漿置于56水浴30min以滅活補(bǔ)體，然后再重復(fù)試驗(yàn)，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。 4 + 反應(yīng)：紅細(xì)胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一個(gè)

3、環(huán)形帶。 3 + 反應(yīng)：發(fā)生凝集的大部分紅細(xì)胞停留在玻璃珠的上半部分。 2 + 反應(yīng)：發(fā)生凝集的紅細(xì)胞分布于整個(gè)玻璃珠床，柱的底部有少量細(xì)胞。 1 + 反應(yīng)：大部分凝集的紅細(xì)胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量紅細(xì)胞。 陰性反應(yīng)：所有紅細(xì)胞均穿過玻璃珠床，在柱的底部形成一個(gè)平整的紅細(xì)胞聚集帶。 五.注意事項(xiàng) 1. 試劑卡應(yīng)保存在225，請勿冷凍保存；請勿將試劑卡放入自動(dòng)除霜的冰柜中，也不要放在離熱源很近或陽光直射的地方。如果試劑卡放在冰箱中，使用前應(yīng)先恢復(fù)至室溫。2.卡中液體試劑的凍結(jié)或蒸發(fā)都有可能影響未凝集紅細(xì)胞通過玻璃珠到達(dá)微柱底部；另外細(xì)菌污染也有可能引起假陽性結(jié)果。3.紅細(xì)胞懸液

4、的配制請參閱說明書要求。4.微柱中加入樣本或試劑時(shí)，請注意以下幾點(diǎn)1）加樣槍的位置：加樣槍槍頭應(yīng)與微柱管壁保持大約45度角，并避免直接接觸。2）操作之前請?jiān)敿?xì)閱讀試劑使用說明書，加樣量要準(zhǔn)確。5.反應(yīng)結(jié)果應(yīng)雙面判讀。6.質(zhì)控管：用于陰性質(zhì)控，即用微柱中的試劑進(jìn)行平行試驗(yàn)，正常情況下未發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細(xì)胞在微柱中能夠順利通過玻璃珠之間的間隙到達(dá)底部，否則說明這張卡或紅細(xì)胞本身有質(zhì)量問題。如質(zhì)控管是陽性結(jié)果，提示試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步分析。7.如果試劑卡出現(xiàn)以下結(jié)果后，請按要求處理，必要時(shí)經(jīng)銷商聯(lián)系：1）正常情況下，微柱中的液面應(yīng)高于玻璃珠水平面3mm左右，當(dāng)微柱中試劑液面等于或低于玻璃珠水平面時(shí)，請不要使用此卡。2）由于運(yùn)輸原因，導(dǎo)致試劑盒倒臵時(shí)間過長，可能會在試劑或微柱中出現(xiàn)氣泡。操作人員取卡時(shí)如果發(fā)現(xiàn)有氣泡，可將卡垂直向上，用手輕彈，把氣泡彈出，如果氣泡過大