培養(yǎng)基的制備2

1、第二講第二講 植物組織培養(yǎng)基的制備植物組織培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的重要性培養(yǎng)基的重要性:1)植物材料生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源；植物材料生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源；2)調(diào)節(jié)植物材料生長(zhǎng)與分化的主要途徑。調(diào)節(jié)植物材料生長(zhǎng)與分化的主要途徑。第一節(jié)第一節(jié) 培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)基種類比較多培養(yǎng)基種類比較多共同之處共同之處：含含有植物生長(zhǎng)發(fā)育所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生有植物生長(zhǎng)發(fā)育所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)物活性物質(zhì)( (激素）激素）不同之處：不同之處：配制培養(yǎng)基的化學(xué)試劑、培養(yǎng)基成分的濃配制培養(yǎng)基的化學(xué)試劑、培養(yǎng)基成分的濃度與比例不同度與比例不同成成 分分培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基名稱MSSHB5WPMVW大量元素大量元素 (mg/

2、L)KNO3190025002500525NH4NO31650400NH4H2PO4300Ca(NO3)24H2O556(NH4)2 SO4134500K2SO4990MgSO47H2O370400250370250CaCl22H2O44020015096KH2PO4170170250Na H2PO4150Ca3(PO4)2200微量元素微量元素 （mg/L）MSSHB5WPMVWMnSO4H2O101022.5MnSO44H2O22.37.5KI0.831.00.75H3BO36.25.03.06.2ZnSO47H2O8.61.02.08.6CuSO45H2O0.0250.20.0250.2

3、5Na2MO42H2O0.250.10.250.25CoCl26H2O0.0250.10.025FeSO47H2O27.815.027.827.8Na2EDTA37.320.037.337.3Fe2(C4H4O6)328.0酒石酸鐵酒石酸鐵有機(jī)營(yíng)養(yǎng)（維生素和氨基酸有機(jī)營(yíng)養(yǎng)（維生素和氨基酸, mg/L）MSSHB5WPVWNicotinic acid (煙酸煙酸)0.55.01.00.5Pyridoxin-HCl (Vt-B6)0.50.51.00.5Thiamine-HCl (Vt-B1)0.15.010.01.0myo-inositol (肌醇肌醇)1001000100100Glycine(

4、甘氨酸甘氨酸)2.02.0碳源碳源(sugar, g/L)Sucrose蔗糖蔗糖30 30 20 20 20 二、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)二、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng) 不同培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)鹽（特別是大量元素）的濃度不同培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)鹽（特別是大量元素）的濃度差異很大。差異很大。 16種必需元素：種必需元素：大量元素：大量元素：C, H, O, N, P, K, Ca, Mg, S微量元素：微量元素：Fe, Cl, Cu, Mo, B, Zn, Mn一、一、 水水 蒸餾水、去離子水，雙蒸水蒸餾水、去離子水，雙蒸水三、三、 有機(jī)營(yíng)養(yǎng)有機(jī)營(yíng)養(yǎng) 常用：常用：肌醇、煙酸、維生素肌醇、煙酸、維生素B6、維生素、維生素B1和和甘氨酸等。甘氨酸等

5、。 其它的維生素：其它的維生素：維生素維生素M（葉酸）、維生素（葉酸）、維生素B2（核黃素）、泛酸鈣等。（核黃素）、泛酸鈣等。 其它氨基酸：其它氨基酸：谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺等酸、天冬酰胺等難培養(yǎng)的材料，可增加有機(jī)成分的種類。難培養(yǎng)的材料，可增加有機(jī)成分的種類。 四、碳源四、碳源 最常用的糖是蔗糖最常用的糖是蔗糖(sucrose)，但也有用葡但也有用葡萄糖萄糖(glucose)、果糖、果糖(fructose)或其它的糖，或其它的糖，有時(shí)幾種糖混用。有時(shí)幾種糖混用。 糖是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但不是越多越好。培養(yǎng)糖是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但不是越多越好。培養(yǎng)基中糖的用量大多在基中糖

6、的用量大多在10- -60g/L，一般為，一般為20- -30 g/L。 五、五、 植物生長(zhǎng)物質(zhì)植物生長(zhǎng)物質(zhì)=植物激素植物激素植物生長(zhǎng)物質(zhì)是植物激素和植物生長(zhǎng)調(diào)植物生長(zhǎng)物質(zhì)是植物激素和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的總稱。節(jié)劑的總稱。植物激素：植物激素：植物合成的、微量就有顯著效應(yīng)的植物合成的、微量就有顯著效應(yīng)的物質(zhì)。物質(zhì)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：人工合成的、具有植物激素人工合成的、具有植物激素相似作用的物質(zhì)。相似作用的物質(zhì)。根據(jù)功能不同，植物生長(zhǎng)物質(zhì)共分為五大類。根據(jù)功能不同，植物生長(zhǎng)物質(zhì)共分為五大類。1.1.生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素(Auxins) NCH2COOHindole acetic acid (IA

7、A) 吲哚乙酸吲哚乙酸 (IAA) 吲哚丁酸吲哚丁酸 (IBA) 120元元/1g187元元/5gSigma公司公司-Naphthalaene acetic acid (NAA) CH2COOH萘乙酸萘乙酸(NAA)314元元/25g2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D)ClClOCH2COOH2,4-二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸(2,4-D)除草劑除草劑240元元/100g生長(zhǎng)素的在組織培養(yǎng)中的主要作用：生長(zhǎng)素的在組織培養(yǎng)中的主要作用： (1) 促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖，形成愈傷組促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖，形成愈傷組織；織； 2,4-DNAAIAA, IBA (2) 控

8、制器官的分化，誘導(dǎo)根的形成、控制器官的分化，誘導(dǎo)根的形成、抑制芽的誘導(dǎo)。抑制芽的誘導(dǎo)。 誘導(dǎo)根的作用：誘導(dǎo)根的作用：IBANAAIAAZeatin 玉米素玉米素 (ZT) （遇高溫不穩(wěn)定）（遇高溫不穩(wěn)定）CH3HNCH2-CH=CNNNNCH3H常用常用2. 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 ( (Cytokinins) ) 574元元/5mg13256元元/250mg番茄、楊樹(shù)番茄、楊樹(shù)NNNNHNCH2-CH=CCH2OHCH3H異戊烯基腺嘌呤異戊烯基腺嘌呤: 2-isopentenyl adenine, 2iP; 遇高溫不穩(wěn)定遇高溫不穩(wěn)定1226元元/1g杜鵑花杜鵑花6-benzylaminopur

9、ine6-芐基氨基嘌呤（芐基氨基嘌呤（6-BA, BA, BAP） NNNNHNCH2OH最常用最常用298元元/1g Kinetin 激動(dòng)素激動(dòng)素 （KT） NNNNHCH2HN常用常用688元元/1gThidiazuron (TDZ；噻苯隆 ): 棉花脫葉劑；后發(fā)現(xiàn)具有強(qiáng)烈的細(xì)胞分裂素的作用，比BA的效果高幾十-幾百倍。常用常用730元元/25mg噻苯隆噻苯隆 細(xì)胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的主要作用：主要作用：1. 促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖，形成愈傷組促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖，形成愈傷組織；織；2.2.控制器官的分化，誘導(dǎo)芽的形成和控制器官的分化，誘導(dǎo)芽的形成和增殖、抑制根的

10、誘導(dǎo)。增殖、抑制根的誘導(dǎo)。 生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用對(duì)于植物組織生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用對(duì)于植物組織培養(yǎng)技術(shù)的建立起了決定性的作用。培養(yǎng)技術(shù)的建立起了決定性的作用。1957年：年：Folke Karl Skoog和和 Carlos Miller發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中生發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和激動(dòng)素濃度比值決定煙草愈傷組織根或芽的形成。長(zhǎng)素和激動(dòng)素濃度比值決定煙草愈傷組織根或芽的形成。Folke Karl Skoog (July 15, 1908 February 15, 2001) In 1962, Skoog and Toshio Murashige 發(fā)表了最著名的植物組織培養(yǎng)基，Murash

11、ige and Skoog medium, MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 。Murashige T and Skoog, F. (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant 18: 100-127)生長(zhǎng)素濃度生長(zhǎng)素濃度細(xì)細(xì)胞胞分分裂裂素素濃濃度度生根生根生芽生芽愈傷愈傷組織組織細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值：生長(zhǎng)素的比值：高：形成芽；高：形成芽；低：形成根；低：形成根；相當(dāng)：愈傷組織增殖，但不分化相當(dāng)：愈傷組織增殖，但不分化=植物器官分化的激素調(diào)控模式

12、植物器官分化的激素調(diào)控模式具有普遍性：在很多植物上得到證明具有普遍性：在很多植物上得到證明是進(jìn)行植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究最重要的是進(jìn)行植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究最重要的指導(dǎo)思想指導(dǎo)思想。3 3、赤霉素、赤霉素 （Gibberellins） 赤霉素種類很多，有七、八十種，赤霉素種類很多，有七、八十種，其中以赤霉酸其中以赤霉酸3（Gibberellic acid,GA3）用得最普遍。用得最普遍。OCCCOOHCH3CH2OHHOO675元元/1gGA3赤霉素的生理作用赤霉素的生理作用赤霉素最顯著的作用是促進(jìn)細(xì)胞的伸長(zhǎng)，赤霉素最顯著的作用是促進(jìn)細(xì)胞的伸長(zhǎng)，也有打破種子休眠的作用。也有打破種子休眠的作用。在植物

13、組在植物組織培養(yǎng)中使用赤霉素主要用于促進(jìn)芽織培養(yǎng)中使用赤霉素主要用于促進(jìn)芽或莖的伸長(zhǎng)?；蚯o的伸長(zhǎng)。赤霉素對(duì)熱不穩(wěn)定，故不能用高溫法消赤霉素對(duì)熱不穩(wěn)定，故不能用高溫法消毒。毒。4 4、乙烯、乙烯 CH2=CH2 乙烯促進(jìn)果實(shí)成熟，加速植物衰老。乙烯促進(jìn)果實(shí)成熟，加速植物衰老。植物組織培養(yǎng)極少使用乙烯（乙烯植物組織培養(yǎng)極少使用乙烯（乙烯利），相反，而是盡量控制乙烯的利），相反，而是盡量控制乙烯的產(chǎn)生。產(chǎn)生。 5 5、脫落酸（、脫落酸（Abscisic acid） ABA OCH3OHCOOHCH3CH3CH3400元元/100mg熱不穩(wěn)定熱不穩(wěn)定 促進(jìn)植物的衰老，促進(jìn)植物的衰老，植物組織培養(yǎng)很植物

14、組織培養(yǎng)很少用。少用。在胚狀體（在胚狀體（embryoid）的誘導(dǎo)和培養(yǎng)）的誘導(dǎo)和培養(yǎng)中常常使用脫落酸，促進(jìn)胚狀體的中常常使用脫落酸，促進(jìn)胚狀體的成熟。成熟。 七、有機(jī)附加物七、有機(jī)附加物 （Organic additives） 水解酪蛋白、水解乳蛋白、蛋白胨、胰蛋白水解酪蛋白、水解乳蛋白、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物：胨、酵母提取物：用量為用量為0.1-10g/L，一般為，一般為0.5-3 g/L。 椰子汁：椰子汁：100-200ml/L100-200ml/L。 這些物質(zhì)的成分復(fù)雜、不明確，統(tǒng)稱為這些物質(zhì)的成分復(fù)雜、不明確，統(tǒng)稱為有機(jī)附加物。當(dāng)材料生長(zhǎng)不好時(shí)，加入這些有機(jī)附加物。當(dāng)材料生長(zhǎng)不

15、好時(shí)，加入這些物質(zhì)往往可以會(huì)明顯改善材料的生長(zhǎng)狀況。物質(zhì)往往可以會(huì)明顯改善材料的生長(zhǎng)狀況。 六、凝固劑六、凝固劑瓊脂（瓊脂（agar）是最常用的凝固劑，用量為）是最常用的凝固劑，用量為6-12g/L。另外還有另外還有phytagel, Gelrite, 4g/L。 八、其它物質(zhì)八、其它物質(zhì) 防止與減緩植物材料褐化的物質(zhì)：防止與減緩植物材料褐化的物質(zhì)：1）抗氧化劑：）抗氧化劑：抗壞血酸（抗壞血酸（Vc）、）、L-半光氨半光氨酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇等。酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇等。2）吸附劑：）吸附劑：活性炭（活性炭（無(wú)選擇性）無(wú)選擇性）、聚乙烯聚乙烯吡咯烷酮（吡咯烷酮（PVP；酚類物質(zhì)吸附劑酚類物質(zhì)

16、吸附劑）。 蝴蝶蘭葉片的褐化蝴蝶蘭葉片的褐化山藥褐化山藥褐化活性炭對(duì)莖段培養(yǎng)的影響活性炭對(duì)莖段培養(yǎng)的影響 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制 垂吊海棠垂吊海棠 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方：MS+蔗糖蔗糖30.0 g/L+瓊脂瓊脂8g/L+BA 2.0 mg/L+NAA0.1 mg/LMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基大量元素大量元素mg/L微量元素微量元素mg/LKNO31900MnSO44H2O22.3NH4NO31650KI0.83MgSO47H2O370H3BO36.2CaCl22H2O440ZnSO47H2O8.6KH2PO4170CuSO45H2O0.025煙酸煙酸0.5Na2MO42H2

17、O0.25Vt-B60.5CoCl26H2O0.025Vt-B10.1FeSO47H2O27.8肌醇肌醇100Na2EDTA37.3甘氨酸甘氨酸2.0 為了便于培養(yǎng)基的配制，實(shí)際操作過(guò)為了便于培養(yǎng)基的配制，實(shí)際操作過(guò)程中可以先將常用的成分配成一定濃程中可以先將常用的成分配成一定濃度的母液度的母液（stock solution），），然后在然后在配各種試驗(yàn)培養(yǎng)基時(shí)取一定量的母液配各種試驗(yàn)培養(yǎng)基時(shí)取一定量的母液稀釋。稀釋。 可以配成母液的是無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)成可以配成母液的是無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)成分和植物激素等。分和植物激素等。 1 1、無(wú)機(jī)鹽母液的配制、無(wú)機(jī)鹽母液的配制（以以MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基為例）為例） 1

18、1）大量元素母液的配制）大量元素母液的配制： 大量元素濃度比較高，故大量元素濃度比較高，故母液濃度母液濃度( (倍數(shù)倍數(shù)) )不能過(guò)大，否則溶解不完全，容易析出不能過(guò)大，否則溶解不完全，容易析出( (特別特別是冬天是冬天) )，使用很不方便，一般為，使用很不方便，一般為20、5050或或100倍。倍。 另一個(gè)要考慮的問(wèn)題是高濃度時(shí)有些另一個(gè)要考慮的問(wèn)題是高濃度時(shí)有些離離子之間發(fā)生會(huì)發(fā)生相互作用子之間發(fā)生會(huì)發(fā)生相互作用，形成沉淀，如，形成沉淀，如SO42-、PO43-和和Ca2+之間。因此，在之間。因此，在母液母液濃度濃度較高時(shí)，較高時(shí)，Ca鹽要與硫酸鹽、磷酸鹽分開(kāi)。鹽要與硫酸鹽、磷酸鹽分開(kāi)。

19、因此，因此，母液濃度高時(shí)母液濃度高時(shí)MgSO4和和CaCl2要分開(kāi)。要分開(kāi)。如把如把KNO3和和CaCl22H2O配在一起（母液配在一起（母液 I），）， NH4NO3 、MgSO47H2O和和KH2PO4配在一起（母配在一起（母液液 II） ，這樣，即使母液濃度達(dá)到，這樣，即使母液濃度達(dá)到100倍也不會(huì)出倍也不會(huì)出現(xiàn)沉淀。現(xiàn)沉淀。 MS大量元素大量元素mg/LKNO31900NH4NO31650MgSO47H2O 370CaCl22H2O440KH2PO4170以以MS培養(yǎng)基為例培養(yǎng)基為例:當(dāng)母當(dāng)母液濃度為液濃度為20倍時(shí)，這倍時(shí)，這5種種鹽配在一起，不會(huì)出現(xiàn)鹽配在一起，不會(huì)出現(xiàn)沉淀；但當(dāng)母

20、液濃度達(dá)沉淀；但當(dāng)母液濃度達(dá)到到50倍時(shí)就出現(xiàn)沉淀。倍時(shí)就出現(xiàn)沉淀。2 2）微量元素母液的配制）微量元素母液的配制： 除鐵鹽外除鐵鹽外，其它微量元素可以全部配在，其它微量元素可以全部配在一起，濃度常為一起，濃度常為100200倍。倍。 Fe2+容易變成容易變成Fe3+而形成沉淀，不利于植而形成沉淀，不利于植物材料的吸收，所以把物材料的吸收，所以把FeSO4同同Na2EDTA配在一起，形成絡(luò)合鐵配在一起，形成絡(luò)合鐵（穩(wěn)定，植物利用（穩(wěn)定，植物利用度高）度高）。其母液濃度為。其母液濃度為100- -200倍。配法倍。配法是先分別將是先分別將FeSO4和和Na2EDTA溶解，然后溶解，然后等體積混合

21、，邊混合邊攪拌，混合液為黃等體積混合，邊混合邊攪拌，混合液為黃色。色。 微量元素母液和鐵鹽要放在冰箱中保存。微量元素母液和鐵鹽要放在冰箱中保存。 2. 有機(jī)成分母液的配制有機(jī)成分母液的配制 一種培養(yǎng)基的有機(jī)成分一種培養(yǎng)基的有機(jī)成分( (氨基酸和維氨基酸和維生素生素) ) 可以配在一起可以配在一起,100-200,100-200倍。倍。有機(jī)成分母液應(yīng)放在冰箱中保存，有機(jī)成分母液應(yīng)放在冰箱中保存，否則容易生霉、變質(zhì)。否則容易生霉、變質(zhì)。 3. 植物激素母液的配制植物激素母液的配制 每種植物激素要單獨(dú)配一種母液，濃每種植物激素要單獨(dú)配一種母液，濃度為度為0.5- -1.0 mg/mL。激素不易溶于水

22、，。激素不易溶于水，但易溶但易溶有機(jī)溶劑（乙醇、二甲基亞砜）有機(jī)溶劑（乙醇、二甲基亞砜）和和稀酸稀堿。稀酸稀堿。70-90%70-90%乙醇：乙醇：溶液無(wú)菌，加入培養(yǎng)基后溶液無(wú)菌，加入培養(yǎng)基后pHpH不不變。變。稀酸稀堿：稀酸稀堿：需要過(guò)濾滅菌；加入培養(yǎng)基后需要過(guò)濾滅菌；加入培養(yǎng)基后pHpH會(huì)變。會(huì)變。 激素母液也應(yīng)在低溫下保存。激素母液也應(yīng)在低溫下保存。 第三節(jié)、培養(yǎng)基的制備第三節(jié)、培養(yǎng)基的制備 1. 根據(jù)植物材料、培養(yǎng)目的設(shè)計(jì)好試驗(yàn)培根據(jù)植物材料、培養(yǎng)目的設(shè)計(jì)好試驗(yàn)培養(yǎng)基的配方養(yǎng)基的配方（基本培養(yǎng)基，糖、植物激素、（基本培養(yǎng)基，糖、植物激素、瓊脂和其它成分的濃度），瓊脂和其它成分的濃度），

23、并且要準(zhǔn)確無(wú)并且要準(zhǔn)確無(wú)誤的寫在實(shí)驗(yàn)記錄本上誤的寫在實(shí)驗(yàn)記錄本上2. 根據(jù)培養(yǎng)基的體積和母液濃度，求出各根據(jù)培養(yǎng)基的體積和母液濃度，求出各種成分的用量種成分的用量3. 根據(jù)計(jì)算出來(lái)的結(jié)果，配成各種培養(yǎng)基根據(jù)計(jì)算出來(lái)的結(jié)果，配成各種培養(yǎng)基誘導(dǎo)垂吊海棠葉片形成不定芽誘導(dǎo)垂吊海棠葉片形成不定芽 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：MS+蔗糖蔗糖30.0 g/L+瓊脂瓊脂8.0 g/L+BA 2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L，pH值值5.8，體積，體積1000 ml。其操作步驟如下：其操作步驟如下：1 1、計(jì)算出各種成分的用量，填寫、計(jì)算出各種成分的用量，填寫培培養(yǎng)基記錄表養(yǎng)基記錄表2 2、配制過(guò)程、配制過(guò)程 （

24、1） 稱好稱好30.0g蔗糖和蔗糖和8.0g瓊脂，放入搪瓷量杯瓊脂，放入搪瓷量杯或其它金屬容器中，加或其它金屬容器中，加600ml左右（總體積的左右（總體積的2/3）蒸餾水，加熱、煮沸）蒸餾水，加熱、煮沸5min，至瓊脂完全熔，至瓊脂完全熔化；化；（2） 按量加入各種成分，然后用蒸餾水定容至按量加入各種成分，然后用蒸餾水定容至1000ml；(在記錄表上打鉤，防止漏加、多加在記錄表上打鉤，防止漏加、多加)（3） 用用KOH或或NaOH和和HCl調(diào)調(diào)pH值至值至5.8。非常。非常重要，重要，pH值不僅影響瓊脂培養(yǎng)基的凝固效果，值不僅影響瓊脂培養(yǎng)基的凝固效果，而且也影響培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的有效性和植物

25、而且也影響培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的有效性和植物材料的生長(zhǎng)狀況材料的生長(zhǎng)狀況（不同植物材料有不同的最佳（不同植物材料有不同的最佳pH環(huán)境，水稻、杜鵑花、蘭花等喜歡偏酸性）。環(huán)境，水稻、杜鵑花、蘭花等喜歡偏酸性）。（4） 分裝到培養(yǎng)容器中，容器盛培養(yǎng)基量分裝到培養(yǎng)容器中，容器盛培養(yǎng)基量為容器體積的為容器體積的1/5-1/3，但不要超過(guò)，但不要超過(guò)2/3，容，容器封口。器封口。3 3、培養(yǎng)基的消毒、培養(yǎng)基的消毒 培養(yǎng)基做好以后，要及時(shí)消毒，培養(yǎng)基做好以后，要及時(shí)消毒，否則容易滋生細(xì)菌和真菌。這不僅否則容易滋生細(xì)菌和真菌。這不僅會(huì)改變培養(yǎng)基的成分，而且菌物還會(huì)改變培養(yǎng)基的成分，而且菌物還會(huì)產(chǎn)生有毒的物質(zhì)。培

26、養(yǎng)基的消毒會(huì)產(chǎn)生有毒的物質(zhì)。培養(yǎng)基的消毒方法有如下幾種：方法有如下幾種： 1） 高溫滅菌法高溫滅菌法：簡(jiǎn)單、易行；一次可以滅菌：簡(jiǎn)單、易行；一次可以滅菌大量的培養(yǎng)基，最常用。所用的溫度是大量的培養(yǎng)基，最常用。所用的溫度是121，壓力是，壓力是1.11.2大氣壓。大氣壓。高溫消毒時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：高溫消毒時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：1. 一定要先排氣一定要先排氣10 min，否則不能消毒不，否則不能消毒不徹底；徹底；2.2. 高溫消毒后，培養(yǎng)基的高溫消毒后，培養(yǎng)基的pH值會(huì)下降值會(huì)下降0.20.5個(gè)個(gè)pH單位單位；3.3. 高溫消毒過(guò)程中，培養(yǎng)基中有些物質(zhì)會(huì)高溫消毒過(guò)程中，培養(yǎng)基中有些物質(zhì)會(huì)被破壞或發(fā)生沉淀。

27、如蔗糖會(huì)水解成葡被破壞或發(fā)生沉淀。如蔗糖會(huì)水解成葡萄糖和果糖，葡萄糖變成葡萄糖酸等；萄糖和果糖，葡萄糖變成葡萄糖酸等；有些物質(zhì)甚至幾乎完全被破壞，如赤霉有些物質(zhì)甚至幾乎完全被破壞，如赤霉素、玉米素等。物質(zhì)破壞程度與消毒時(shí)素、玉米素等。物質(zhì)破壞程度與消毒時(shí)間和壓力有關(guān)。間和壓力有關(guān)。 培養(yǎng)基體積與消毒時(shí)間的關(guān)系培養(yǎng)基體積與消毒時(shí)間的關(guān)系 培養(yǎng)基體積（培養(yǎng)基體積（ml） 消毒時(shí)間（消毒時(shí)間（min） 20- -50 20（121） 50- -500 25（121） 500- -5000 35（121） 空試管、空瓶，培養(yǎng)皿、空試管、空瓶，培養(yǎng)皿、濾紙等用具濾紙等用具 30（130） 2) 過(guò)濾滅菌

28、法過(guò)濾滅菌法過(guò)濾消毒不會(huì)破壞培養(yǎng)基的成分和改變培過(guò)濾消毒不會(huì)破壞培養(yǎng)基的成分和改變培養(yǎng)基的養(yǎng)基的pH值值，所以在原生質(zhì)體和單細(xì)胞，所以在原生質(zhì)體和單細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要用過(guò)濾消毒法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅培養(yǎng)時(shí)要用過(guò)濾消毒法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。菌。熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，如熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，如ZT、2ip2ip、GA3、核、核黃素等，也要用過(guò)濾消毒法滅菌黃素等，也要用過(guò)濾消毒法滅菌 無(wú)菌微孔濾膜：孔徑無(wú)菌微孔濾膜：孔徑0.2-0.45 m，比微生物及其孢子直徑小，比微生物及其孢子直徑小過(guò)濾滅菌的操作：過(guò)濾滅菌的操作： 先將微孔濾膜（孔徑先將微孔濾膜（孔徑0.2-0.45 m，用，用前最好在蒸餾水中浸泡數(shù)小時(shí)）裝入濾前最好在蒸餾水中浸泡數(shù)小時(shí)）裝入濾頭中，用紙或布將其包好，再高溫滅菌；頭中，用紙或布將其包好，再高溫滅菌；在超凈工作臺(tái)上取出濾頭，用注射器吸在超凈工作臺(tái)上取出濾頭，用注射器吸取培養(yǎng)基或溶液，將注射器接在濾頭入取培養(yǎng)基或溶液，將注射器接在濾頭入口端，推動(dòng)注射