枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)

1、枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)    【摘要】 目的 觀察寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠的保護(hù)作用。方法 選擇成年雄性SD大鼠60只，體重300340g，隨機(jī)分為四組：空白對(duì)照組每天給予蒸餾水灌胃，喂飼基礎(chǔ)飼料；其余三組按10mL/(kg·bw)劑量給予56度白酒灌胃，酒精模型組喂飼基礎(chǔ)飼料；低劑量枸杞組：喂飼基礎(chǔ)飼料枸杞(50g/kg)；高劑量枸杞組：喂飼基礎(chǔ)飼料枸杞(100g/kg)，喂飼3周，實(shí)驗(yàn)期末，空腹12h，20%烏拉坦麻醉后，心臟取血制備血清及10% 肝組織勻漿，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧

2、化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)，并取肝組織病理切片檢查。結(jié)果 與酒精模型組比較，枸杞組肝臟SOD、CAT 活性均高于酒精模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；枸杞組血清ALT活性低于酒精模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；枸杞組血清、肝臟中MDA含量均低于酒精模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);肝組織病理結(jié)果提示寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠具有保護(hù)作用。結(jié)論 寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化及保護(hù)肝細(xì)胞的作用。 【關(guān)鍵詞】 枸杞 酒精性肝損傷大鼠 抗脂質(zhì)過(guò)氧化 寧夏Abstract： Objective To explore the prote

3、ction effects of Lycium barbarrum(LB) on alcoholic liver injury in rats. Methods Sixty male rats weighed 300340g were randomly divided into four groups.The blank group were given distilled water and basic animal feeds. The other three groups were given 56 degrees spirit by 10ml/kg·bw. The alcoh

4、ol model rats were fed with basic animal feeds. The low dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 50g/kg. The high dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 100g/kg. After three weeks, we took serum from heart and liver organization to detect the ALT, SOD, CAT, MDA, TAOC

5、and check the pathological slice of liver organization. Results Compared with the alcohol model group,LB group's activity of SOD, CAT were significantly higher. The activity of serum ALT in LB group were significantly lower than that in the alcohol model group (P0.01). The concentration of MDA i

6、n the alcohol model group were significantly lower than that in the alcohol model group (P0.05). The pathological results showed that LB had certain protection effect on alcohol liver injury in rats. Conclusion LB has lipid peroxidation and protection effects for rats with alcohol liver injury.Key w

7、ords:Lycium barbarrum;rats with alcoholic liver injury; lipid peroxidation近年來(lái),我國(guó)人均酒精消耗量顯著增長(zhǎng),酒精性肝病(Alcoholic liver disease，ALD)的發(fā)病率也呈逐年增加趨勢(shì),對(duì)酒精性肝病的研究仍停留在臨床治療方面。從營(yíng)養(yǎng)學(xué)角度來(lái)講，尋找酒精性肝損傷的天然保護(hù)物質(zhì)，采取有效的干預(yù)措施，具有重要的意義。寧夏枸杞富含多種營(yíng)養(yǎng)素和生物活性物質(zhì)，且具有抗氧化、降血脂及免疫調(diào)節(jié)等作用1。然而，目前國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)寧夏枸杞(Lycium barbarrum，LB)對(duì)酒精性肝損傷保護(hù)作用的研究報(bào)道，本研究建立了酒

8、精性肝損傷動(dòng)物模型，觀察寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用寧夏枸杞提供科學(xué)依據(jù)。1 材料與方法1.1 受試物寧夏中寧枸杞、白酒(56度紅星二鍋頭，北京釀酒總廠生產(chǎn))。1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年雄性SD大鼠，由寧夏醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.3 實(shí)驗(yàn)方法取成年雄性SD大鼠60只，體重300340g,適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為4組(空白對(duì)照組、酒精模型組、低劑量枸杞組、高劑量枸杞組)，每組15只；空白對(duì)照組每天給予蒸餾水灌胃，喂飼基礎(chǔ)飼料;其余三組大鼠按10mL/(kg·bw)劑量給予56度白酒灌胃，其中酒精模型組大鼠喂飼基礎(chǔ)飼料，低劑量枸杞組：喂飼基礎(chǔ)飼料枸杞(50g/kg飼

9、料);高劑量枸杞組：喂飼基礎(chǔ)飼料枸杞(100g/kg飼料)，喂飼3周；實(shí)驗(yàn)期末，大鼠空腹12h，用20%烏拉坦麻醉后，取心臟血及肝臟，制備血清及10%肝勻漿,檢測(cè)血清和肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力 (T-AOC)等指標(biāo)，并取肝組織作病理切片檢查。1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法用賴氏法檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT);羥胺法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)；硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)丙二醛(MDA)；鉬酸胺法檢測(cè)過(guò)氧化氫酶(CAT)；比色法檢測(cè)總抗氧化能力 (T-AOC);考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)肝臟組織蛋白。(上述檢測(cè)指標(biāo)均采用試劑盒，由南京建成生

10、物工程研究所提供)1.5 肝臟病理學(xué)檢查每組隨機(jī)取5只大鼠，取肝左葉,10%甲醛固定，常規(guī)制作石蠟切片,進(jìn)行HE染色。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以±s表示，用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 肝組織病理切片結(jié)果空白對(duì)照組：肝細(xì)胞有正常的多邊形細(xì)胞形狀和結(jié)構(gòu)，小葉結(jié)構(gòu)清晰，匯管區(qū)未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1，見(jiàn)封4)。酒精組:肝細(xì)胞顯示程度不同的嗜酸性顆粒變性，有大小不等的灶狀壞死(圖2，見(jiàn)封4)，大部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)有多量微脂滴，可見(jiàn)融合性大脂滴(脂肪變性)及酒精小體，匯管區(qū)有較多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3，見(jiàn)封4)。枸杞高劑量組:肝細(xì)胞胞漿疏松，可找到

11、不典型的酒精小體，中等量微脂滴，匯管區(qū)血管擴(kuò)張，少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(圖4，見(jiàn)封4)。枸杞低劑量組:肝細(xì)胞嗜酸性顆粒變性，核周可找到不規(guī)則的酒精小體，微脂滴多見(jiàn)。匯管區(qū)血管輕度充血，少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖5，見(jiàn)封4)。2.2 寧夏枸杞對(duì)大鼠血清ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響 (表1)表1 枸杞對(duì)大鼠血清中ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響(略)模型組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性高于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)，枸杞組大鼠血清ALT活性均低于模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與酒精模型組相比，枸杞組血清CAT活性有升高趨勢(shì)，但是差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;酒

12、精模型組血清SOD低于空白對(duì)照組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；枸杞高劑量組和枸杞低劑量組血清SOD活性高于酒精模型組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；酒精模型組大鼠血清MDA含量高于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；枸杞高劑量和低劑量組大鼠血清中MDA含量低于酒精模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；酒精模型組大鼠血清中總抗氧化能力低于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；枸杞高劑量組、低劑量組大鼠肝臟中總抗氧化能力均高于模型組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.3 寧夏枸杞對(duì)大鼠肝臟中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響由表2可知，與空白對(duì)照組相比,酒精模型組肝臟CAT活性明顯低于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)

13、意義(P0.01)；枸杞高劑量組肝臟CAT活性高于模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);酒精模型組肝臟SOD活性低于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)，枸杞高劑量組和枸杞低劑量組肝臟SOD活性均高于酒精模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01); 酒精模型組肝臟MDA含量高于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；枸杞高劑量組大鼠肝臟中MDA含量低于模型組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；枸杞低劑量組大鼠肝臟中MDA含量低于模型組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);枸杞高劑量組、低劑量組大鼠肝臟中總抗氧化能力均高于模型組，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2 枸杞對(duì)大鼠肝臟中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影

14、響(略)3 討論本實(shí)驗(yàn)采用56度白酒10mL/(kg·bw)連續(xù)灌胃3周,結(jié)果顯示酒精模型組大鼠血清中ALT活性明顯增高;肝組織中MDA升高，SOD、CAT降低;肝組織病理結(jié)果顯示酒精模型組可見(jiàn)大小不等的灶狀壞死,大部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有多量微脂滴，可見(jiàn)融合性大脂滴(脂肪變性)及酒精小體，匯管區(qū)有較多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。肝臟病理學(xué)改變與李舒丹等報(bào)道相一致2，提示酒精模型組既有酒精性肝炎的存在,也有酒精性脂肪肝的表現(xiàn)，表明酒精性肝損傷動(dòng)物模型建立成功。乙醇在其代謝過(guò)程中可通過(guò)多種途徑產(chǎn)生自由基,自由基能與細(xì)胞大分子反應(yīng),導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化,損傷肝細(xì)胞,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞2。SOD可以催化超氧化

15、物自由基,并有效地清除自由基，CAT與SOD協(xié)同作用，清除由歧化反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫4。長(zhǎng)期飲酒,使SOD、CAT活力下降,不能有效地清除自由基,使活性氧水平發(fā)生改變，可促發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷5。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化物分解的終末產(chǎn)物,可損傷組織細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)，影響膜的功能，從而導(dǎo)致組織細(xì)胞功能的損傷6。MDA在組織中的含量可直接反應(yīng)機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的速率和強(qiáng)度。因此,SOD、CAT活力的降低和MDA含量的升高可以間接地反應(yīng)肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化損害的程度。肝組織病理結(jié)果提示:枸杞組肝損傷程度較模型組明顯減輕，表明寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠具有保護(hù)作用；生化結(jié)果顯示：與酒精模型組比較，枸杞組血清

16、CAT、SOD活性均高于模型組；ALT活性低于模型組； 血清、肝臟中MDA含量均低于模型組； 枸杞組總抗氧化能力高于模型組，表明寧夏枸杞能有效地阻止酒精所致肝損傷脂質(zhì)過(guò)氧化物的終產(chǎn)物MDA的升高,具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化及保護(hù)肝細(xì)胞的作用。同時(shí)發(fā)現(xiàn)枸杞高劑量組對(duì)肝損傷的保護(hù)作用優(yōu)于枸杞低劑量組。枸杞提高SOD、CAT活性可能是其減輕鼠肝脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的機(jī)制之一。由于枸杞富含黃酮類、胡蘿卜素、維生素E及硒等抗氧化活性成分7，故寧夏枸杞可有效地清除自由基，阻止酒精誘發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。綜上所述,寧夏枸杞對(duì)酒精性肝損傷大鼠具有明顯的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能是寧夏枸杞富含抗氧化物質(zhì)，能提高機(jī)體SOD、CAT活性，降低MDA的含量,從而減輕自由基引發(fā)的肝脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。寧夏枸杞資源豐富，具有良好的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。【參考文獻(xiàn)】1羅瓊，閻俊.枸杞及其多糖對(duì)家兔血脂的影響J.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),1997,19(4):415-418.2李舒丹，厲有名,虞朝輝.大鼠慢性酒精性肝損傷模型的建立J.浙江醫(yī)學(xué),2002,24(9):524-530.3樸麗花,金政,李相伍.悅肝膠囊對(duì)小鼠酒精性