護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用研究(一)

1、護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用研究(一)    作者：李萬(wàn)平， 黃愛(ài)萍， 謝碧桃， 王永安， 孫同郊 【關(guān)鍵詞】 護(hù)肝解毒沖劑,；,大鼠,；,肝損傷摘要：目的觀察護(hù)肝解毒沖劑的抗肝損傷作用。方法用D半乳糖胺（DGaLN）復(fù)制急性肝損傷模型；采用四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)慢性肝損傷模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別取血測(cè)ALT，AST活性和總蛋白（TP），白蛋白（ALB），白/球比例（A/G），透明質(zhì)酸（HA），同時(shí)均取肝組織做病理檢查。結(jié)果急性肝損傷時(shí)，護(hù)肝解毒沖劑能降低ALT，AST活性及減輕肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；慢性肝損傷時(shí)， 其能降低ALT，AST和HA，升高TP，

2、ALB和A/G，并減輕肝細(xì)胞變性，減少纖維組織增生。結(jié)論護(hù)肝解毒沖劑對(duì)大鼠DGaLN 所致急性肝損傷和CCl4所致慢性肝損傷均具有保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：護(hù)肝解毒沖劑 ； 大鼠 ； 肝損傷Study on the Effect of Huganjiedu Granule against Liver DamageAbstract：ObjectiveTo study the effect of Huganjiedu Granule on protecting liver and debasing transaminase.MethodsAcute liver injury model was induc

3、ed by Daminogalaclose (DGaLN).Chronic liver injury model was made by carbon tetrachloride (CCl4).At the end of the experimen the levels of ALT,AST and TP，ALB，A/G，HA were determined.At the same time liver organ was taken to observe the histopathological changes.ResultsWhen livers were acutely injured

4、, Huganjiedu Granule could decrease the levels of ALT and AST and lighten liver cell denaturalizating and inflammation cell infiltrating. When livers were chronically injured, Huganjiedu granule could decrease the levels of ALT,AST and HA, increase the levels of TP,ALB and A/G, and reduce denaturing

5、 liver cell and liver fibrosis. ConclusionHuganjiedu granule has effect of protecting liver against both acute liver injury induced by DGaLN and chronic liver injury induced by CCl4.Key words：Huganjiedu granule ; Rats; Liver Damage 護(hù)肝解毒沖劑是由茵陳、梔子、大黃（制）、白術(shù)、云苓、白花蛇舌草、金錢(qián)草、蚤休、赤芍、丹參、郁金等組成,具有清熱解毒退黃、涼血活血及健脾作

6、用，是治療慢性活動(dòng)性乙型肝炎的純中藥制劑，為我國(guó)“八五”攻關(guān)研究第三類(lèi)新藥，為了觀察護(hù)肝解毒沖劑的主要藥效，本實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)DGaLN 所致急性肝損傷和CCl4所致慢性肝損傷的作用?，F(xiàn)報(bào)道如下.1 材料與方法1.1 材料1.1.1 藥品護(hù)肝解毒沖劑（HGCJ），10 g/包，含原生藥18.3 g,由瀘州醫(yī)學(xué)院HGCJ課題組、瀘州醫(yī)學(xué)院藥物研究所共同研制，批號(hào)930405。復(fù)肝康沖劑（FGK）：10 g/包，批號(hào)930513，遼寧省中醫(yī)藥研究所制藥廠生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)均用蒸餾水配成所需濃度口服液。DGaLN：批號(hào)940504。由重慶醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)教研室提供，使用時(shí)用0.9%生理鹽水配成10%溶液。CC

7、l4，由重慶化學(xué)試劑總廠生產(chǎn)，批號(hào)920512，臨用時(shí)溶于植物油中，配成10%的CCl4溶液。1.1.2 動(dòng)物SD雄性大鼠140只，體重150180 g，一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，川實(shí)動(dòng)管第85號(hào)1993合格，由華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2 方法1.2.1 方法急性肝損傷實(shí)驗(yàn)是將80只大鼠隨機(jī)分成6組，即空白對(duì)照組、模型組、HGCJ大、中、小劑量組（HGCJ，HGCJ，HGCJ）,復(fù)肝康陽(yáng)性對(duì)照組（FGK）。HGCJ，HGCJ，HGCJ組分別以44，22，11 g（生藥）?kg1?d1(相當(dāng)于臨床用量的13.36，6.68，3.34倍)灌胃1次，復(fù)肝康陽(yáng)性對(duì)照組同時(shí)以復(fù)肝康沖劑3.51g（生藥）?kg

8、1?d1 (相當(dāng)于臨床用量的3.34倍) 灌胃1次,正常對(duì)照組和模型組定時(shí)以等容積生理鹽水灌胃1次。連續(xù)給藥7 d，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物正常飲水，以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)。在第5天下午，對(duì)HGCJ治療各組、模型組和陽(yáng)性對(duì)照組給予DGaLN 600 mg?kg1腹腔注射1次1，正常對(duì)照組用生理鹽水腹腔注射1次，注射前禁食12 h，注射后觀察動(dòng)物的一般情況并繼續(xù)禁食。于48 h后每組取10只大鼠處死，取血檢查ALT，AST，并取肝組織作病理切片檢查。慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)2是將60大鼠隨機(jī)分成4組，即正常對(duì)照組、模型組、HGCJ大、小劑量（HGCJ、HGCJ）組。HGCJ，HGCJ分別為44 ，11 g（生藥）?kg1

9、?d1(相當(dāng)于臨床用量的13.36，3.34倍)。按常規(guī)飼養(yǎng)。模型組及HGCJ，HGCJ組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)即皮下注射10% CCl4油劑5 ml?kg1，2次/周，連續(xù)3個(gè)月。于皮下注射10% CCl4 第2個(gè)月起用HGCJ灌胃給藥，同時(shí)正常對(duì)照組和模型組給予等容量的生理鹽水灌胃，均為1次/d，連續(xù)2個(gè)月，其間觀察動(dòng)物的一般狀況，于末次給藥24 h后每組取10只大鼠斷頸取血，測(cè)ALT，AST，TP，ALB，A/G和HA。每只大鼠取同一部位的肝臟一塊固定于10%福爾馬林溶液做病理切片。1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理資料的統(tǒng)計(jì)分析采用 ±s表示，組間差異進(jìn)行t檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1 一般狀況注射DGa

10、LN 8 h后，模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，被毛蓬松，治療組情況稍好。皮下注射10% CCl4，模型組大鼠于第7周開(kāi)始出現(xiàn)精神萎靡、背躬、被毛蓬松，并開(kāi)始出現(xiàn)死亡，解剖可見(jiàn)腹腔積液，早期死亡者可見(jiàn)肝臟花斑樣改變，晚期死亡者肝色蒼白、質(zhì)硬，死前肛周潮濕，體形消瘦。治療組癥狀有所改善，死亡動(dòng)物數(shù)減少。2.2 HGCJ對(duì)DGaLN急性肝損傷大鼠血清中ALT，AST水平的影響結(jié)果見(jiàn)表1。表1 HGCJ對(duì)大鼠急性肝損傷ACT，AST的影響（略）與對(duì)照組比較,1）P0.01;與模型組比較,2）P0.05,3）P0.01, n=102.3 HGCJ對(duì)四氯化碳慢性肝損傷肝生化指標(biāo)和血清肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸HA的影

11、響結(jié)果見(jiàn)表2。表2 HGCJ對(duì)慢性肝損傷對(duì)肝生化指標(biāo)和透明質(zhì)酸HA的影響（略）與對(duì)照組比較,1）P0.01,* P0.05；與模型組比較，2）P0.01,n=102.4 肝臟病理改變按毒理病理要求，對(duì)各組大鼠肝臟進(jìn)行13項(xiàng)指標(biāo)即肝細(xì)胞胞漿疏松化、濁腫、脂肪變、水變性、嗜酸性變、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、枯否氏細(xì)胞增生、淤血、出血、肝細(xì)胞增生、結(jié)締組織增生、早期假小葉形成等全面觀察。急性肝損傷實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)清楚，肝細(xì)胞無(wú)變性、壞死、出血。模型組全部大鼠均有肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且均較其余實(shí)驗(yàn)組重。復(fù)肝康組肝細(xì)胞胞漿疏松化、脂肪變性、水變性比HGCJ各劑量組重，HGCJ大劑量組肝細(xì)胞胞漿疏松

12、化比中、小劑量組少，且無(wú)脂肪變性。慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M肝臟肉眼觀呈淺灰色、質(zhì)地變硬，鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞變性如胞漿疏松化、脂肪變、水變性等嚴(yán)重，74%病例結(jié)締組織增生，有早期肝硬變傾向；二劑量組肝細(xì)胞變性比模型組明顯減輕，只有11%15%病例有結(jié)締組織增生，未見(jiàn)有早期肝硬變改變，大劑量組病變更輕。3 討論DGaLN是肝細(xì)胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，與臨床上病毒性肝炎的肝臟病理變化相似。當(dāng)DGaLN進(jìn)入體內(nèi)后與磷酸尿苷UDP結(jié)合形成UDPD半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴(lài)其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)合成受抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，使肝細(xì)胞受損13。本實(shí)驗(yàn)

13、模型組ALT，AST明顯增高，與空白對(duì)照組比較P0.01。由于ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，AST存在于肝細(xì)胞胞漿和線(xiàn)粒體中，肝細(xì)胞細(xì)胞膜通透性增加或破損，胞漿內(nèi)ALT，AST釋放入血，使血清中二者均升高；血清ALT水平的高低可靈敏反映肝細(xì)胞變性、壞死的程度，因其大部分存在于胞漿中。說(shuō)明模型復(fù)制是成功的。HGCJ中、大劑量治療組的ALT，AST與模型組比較明顯降低（P0.01），且病理檢查的結(jié)果顯示，HGCJ各治療組能減輕病理?yè)p傷如肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，表明HGCJ能減輕DGaLN的肝損傷作用。CCl4為常用的肝纖維化動(dòng)物模型化學(xué)誘生劑，其所致肝纖維化改變與人類(lèi)肝纖維化的形態(tài)特征相似，比較適合

14、于肝纖維化特別是有活動(dòng)性病變的慢性肝病所致肝纖維化的防治作用及其作用機(jī)制的研究。CCl4對(duì)肝毒性損傷主要是由于經(jīng)肝細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素代謝裂解成三氯甲基自由基（CCl3），CCl3可進(jìn)一步氧化反應(yīng)形成具有更強(qiáng)反應(yīng)活性的基團(tuán)，從而產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用，破壞肝細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)4，5。此損傷不斷反復(fù)，繼之有肝細(xì)胞壞死、炎癥激活肝臟內(nèi)Kupffer細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等，使其釋放各種細(xì)胞因子，細(xì)胞因子進(jìn)一步激活靜息狀態(tài)的星狀細(xì)胞（HSC），使之轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞（MFBLC），MFBLC過(guò)度增殖，同時(shí)大量合成各種細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），ECM過(guò)度沉積而導(dǎo)致肝纖維化6。由于此模型的死亡率高，故于造模開(kāi)始時(shí)的動(dòng)物數(shù)應(yīng)

15、多增加些。CCl4所致慢性肝損傷時(shí)ALT，AST，HA均升高，TP，ALB，A/G均降低。肝纖維化時(shí)，肝間質(zhì)成纖維細(xì)胞增生，合成HA增加，肝內(nèi)細(xì)胞受損，對(duì)血液中HA的攝取及降解障礙，導(dǎo)致HA升高。而肝細(xì)胞是合成蛋白質(zhì)場(chǎng)所，肝細(xì)胞受損時(shí)合成蛋白質(zhì)功能降低，血中白蛋白降低，但肝細(xì)胞同時(shí)激活肝免疫系統(tǒng)，使球蛋白合成增加，故A/G降低。HGCJ兩個(gè)劑量組能降低ALT，AST，HA，同時(shí)升高TP，ALB，A/G比例，且能減輕肝細(xì)胞變性，減少結(jié)締組織的形成，提示HGCJ能減輕CCl4對(duì)肝臟的慢性損傷，對(duì)肝纖維化的形成有防治作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HGCJ具有保護(hù)肝細(xì)胞膜，降低ALT，AST活性,從而保護(hù)肝臟；

16、能減少HA的含量，減輕細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度沉積，從而對(duì)肝纖維化產(chǎn)生防治作用。參考文獻(xiàn)：1 Xu P,Liu F P. Usual Animal Model for Acute Liver InjuryJ.Chinese Journal of Pathophysiology(中國(guó)病理生理雜志)，1995，11（4）：447.2 Zhang J T. Mordern Pharmacological Experimental Methods(現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法)M.Beijing Medical University And Union Medical University United Publishing House,1998.3 DeckerK,JoneRK,PopeIM,et al.Progressive Liver DiseaseJ.Hepatology,1997,42:18.4 Lu Y R,CHu Y J. Effects of Spirulina in Prevention of Liver Fibrosis in RatsJ.Chin J New Drugs Clin Rem(中國(guó)新藥與臨床雜志)，2001，20（3）：198.5 ZhongM,Yu S M,Huang L,