護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用研究(一)

1、護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用研究(一)    作者：李萬平， 黃愛萍， 謝碧桃， 王永安， 孫同郊 【關(guān)鍵詞】 護肝解毒沖劑,；,大鼠,；,肝損傷摘要：目的觀察護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用。方法用D半乳糖胺（DGaLN）復制急性肝損傷模型；采用四氯化碳（CCl4）誘導慢性肝損傷模型。實驗結(jié)束時分別取血測ALT，AST活性和總蛋白（TP），白蛋白（ALB），白/球比例（A/G），透明質(zhì)酸（HA），同時均取肝組織做病理檢查。結(jié)果急性肝損傷時，護肝解毒沖劑能降低ALT，AST活性及減輕肝細胞壞死及炎細胞浸潤；慢性肝損傷時， 其能降低ALT，AST和HA，升高TP，

2、ALB和A/G，并減輕肝細胞變性，減少纖維組織增生。結(jié)論護肝解毒沖劑對大鼠DGaLN 所致急性肝損傷和CCl4所致慢性肝損傷均具有保護作用。關(guān)鍵詞：護肝解毒沖劑 ； 大鼠 ； 肝損傷Study on the Effect of Huganjiedu Granule against Liver DamageAbstract：ObjectiveTo study the effect of Huganjiedu Granule on protecting liver and debasing transaminase.MethodsAcute liver injury model was induc

3、ed by Daminogalaclose (DGaLN).Chronic liver injury model was made by carbon tetrachloride (CCl4).At the end of the experimen the levels of ALT,AST and TP，ALB，A/G，HA were determined.At the same time liver organ was taken to observe the histopathological changes.ResultsWhen livers were acutely injured

4、, Huganjiedu Granule could decrease the levels of ALT and AST and lighten liver cell denaturalizating and inflammation cell infiltrating. When livers were chronically injured, Huganjiedu granule could decrease the levels of ALT,AST and HA, increase the levels of TP,ALB and A/G, and reduce denaturing

5、 liver cell and liver fibrosis. ConclusionHuganjiedu granule has effect of protecting liver against both acute liver injury induced by DGaLN and chronic liver injury induced by CCl4.Key words：Huganjiedu granule ; Rats; Liver Damage 護肝解毒沖劑是由茵陳、梔子、大黃（制）、白術(shù)、云苓、白花蛇舌草、金錢草、蚤休、赤芍、丹參、郁金等組成,具有清熱解毒退黃、涼血活血及健脾作

6、用，是治療慢性活動性乙型肝炎的純中藥制劑，為我國“八五”攻關(guān)研究第三類新藥，為了觀察護肝解毒沖劑的主要藥效，本實驗研究其對DGaLN 所致急性肝損傷和CCl4所致慢性肝損傷的作用?，F(xiàn)報道如下.1 材料與方法1.1 材料1.1.1 藥品護肝解毒沖劑（HGCJ），10 g/包，含原生藥18.3 g,由瀘州醫(yī)學院HGCJ課題組、瀘州醫(yī)學院藥物研究所共同研制，批號930405。復肝康沖劑（FGK）：10 g/包，批號930513，遼寧省中醫(yī)藥研究所制藥廠生產(chǎn)。實驗時均用蒸餾水配成所需濃度口服液。DGaLN：批號940504。由重慶醫(yī)科大學生物化學教研室提供，使用時用0.9%生理鹽水配成10%溶液。CC

7、l4，由重慶化學試劑總廠生產(chǎn)，批號920512，臨用時溶于植物油中，配成10%的CCl4溶液。1.1.2 動物SD雄性大鼠140只，體重150180 g，一級標準，川實動管第85號1993合格，由華西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。1.2 方法1.2.1 方法急性肝損傷實驗是將80只大鼠隨機分成6組，即空白對照組、模型組、HGCJ大、中、小劑量組（HGCJ，HGCJ，HGCJ）,復肝康陽性對照組（FGK）。HGCJ，HGCJ，HGCJ組分別以44，22，11 g（生藥）?kg1?d1(相當于臨床用量的13.36，6.68，3.34倍)灌胃1次，復肝康陽性對照組同時以復肝康沖劑3.51g（生藥）?kg

8、1?d1 (相當于臨床用量的3.34倍) 灌胃1次,正常對照組和模型組定時以等容積生理鹽水灌胃1次。連續(xù)給藥7 d，實驗期間動物正常飲水，以標準顆粒飼料喂養(yǎng)。在第5天下午，對HGCJ治療各組、模型組和陽性對照組給予DGaLN 600 mg?kg1腹腔注射1次1，正常對照組用生理鹽水腹腔注射1次，注射前禁食12 h，注射后觀察動物的一般情況并繼續(xù)禁食。于48 h后每組取10只大鼠處死，取血檢查ALT，AST，并取肝組織作病理切片檢查。慢性肝損傷實驗2是將60大鼠隨機分成4組，即正常對照組、模型組、HGCJ大、小劑量（HGCJ、HGCJ）組。HGCJ，HGCJ分別為44 ，11 g（生藥）?kg1

9、?d1(相當于臨床用量的13.36，3.34倍)。按常規(guī)飼養(yǎng)。模型組及HGCJ，HGCJ組于實驗開始時即皮下注射10% CCl4油劑5 ml?kg1，2次/周，連續(xù)3個月。于皮下注射10% CCl4 第2個月起用HGCJ灌胃給藥，同時正常對照組和模型組給予等容量的生理鹽水灌胃，均為1次/d，連續(xù)2個月，其間觀察動物的一般狀況，于末次給藥24 h后每組取10只大鼠斷頸取血，測ALT，AST，TP，ALB，A/G和HA。每只大鼠取同一部位的肝臟一塊固定于10%福爾馬林溶液做病理切片。1.2.2 統(tǒng)計學處理資料的統(tǒng)計分析采用 ±s表示，組間差異進行t檢驗。2 結(jié)果2.1 一般狀況注射DGa

10、LN 8 h后，模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，被毛蓬松，治療組情況稍好。皮下注射10% CCl4，模型組大鼠于第7周開始出現(xiàn)精神萎靡、背躬、被毛蓬松，并開始出現(xiàn)死亡，解剖可見腹腔積液，早期死亡者可見肝臟花斑樣改變，晚期死亡者肝色蒼白、質(zhì)硬，死前肛周潮濕，體形消瘦。治療組癥狀有所改善，死亡動物數(shù)減少。2.2 HGCJ對DGaLN急性肝損傷大鼠血清中ALT，AST水平的影響結(jié)果見表1。表1 HGCJ對大鼠急性肝損傷ACT，AST的影響（略）與對照組比較,1）P0.01;與模型組比較,2）P0.05,3）P0.01, n=102.3 HGCJ對四氯化碳慢性肝損傷肝生化指標和血清肝纖維化指標透明質(zhì)酸HA的影

11、響結(jié)果見表2。表2 HGCJ對慢性肝損傷對肝生化指標和透明質(zhì)酸HA的影響（略）與對照組比較,1）P0.01,* P0.05；與模型組比較，2）P0.01,n=102.4 肝臟病理改變按毒理病理要求，對各組大鼠肝臟進行13項指標即肝細胞胞漿疏松化、濁腫、脂肪變、水變性、嗜酸性變、壞死、炎細胞浸潤、枯否氏細胞增生、淤血、出血、肝細胞增生、結(jié)締組織增生、早期假小葉形成等全面觀察。急性肝損傷實驗中空白對照組肝組織結(jié)構(gòu)清楚，肝細胞無變性、壞死、出血。模型組全部大鼠均有肝細胞壞死及炎細胞浸潤，且均較其余實驗組重。復肝康組肝細胞胞漿疏松化、脂肪變性、水變性比HGCJ各劑量組重，HGCJ大劑量組肝細胞胞漿疏松

12、化比中、小劑量組少，且無脂肪變性。慢性肝損傷實驗?zāi)Ｐ徒M肝臟肉眼觀呈淺灰色、質(zhì)地變硬，鏡下見肝細胞變性如胞漿疏松化、脂肪變、水變性等嚴重，74%病例結(jié)締組織增生，有早期肝硬變傾向；二劑量組肝細胞變性比模型組明顯減輕，只有11%15%病例有結(jié)締組織增生，未見有早期肝硬變改變，大劑量組病變更輕。3 討論DGaLN是肝細胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，與臨床上病毒性肝炎的肝臟病理變化相似。當DGaLN進入體內(nèi)后與磷酸尿苷UDP結(jié)合形成UDPD半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)合成受抑制，限制了細胞器及酶的生成和補充，使肝細胞受損13。本實驗

13、模型組ALT，AST明顯增高，與空白對照組比較P0.01。由于ALT主要存在于肝細胞漿中，AST存在于肝細胞胞漿和線粒體中，肝細胞細胞膜通透性增加或破損，胞漿內(nèi)ALT，AST釋放入血，使血清中二者均升高；血清ALT水平的高低可靈敏反映肝細胞變性、壞死的程度，因其大部分存在于胞漿中。說明模型復制是成功的。HGCJ中、大劑量治療組的ALT，AST與模型組比較明顯降低（P0.01），且病理檢查的結(jié)果顯示，HGCJ各治療組能減輕病理損傷如肝細胞壞死及炎細胞浸潤，表明HGCJ能減輕DGaLN的肝損傷作用。CCl4為常用的肝纖維化動物模型化學誘生劑，其所致肝纖維化改變與人類肝纖維化的形態(tài)特征相似，比較適合

14、于肝纖維化特別是有活動性病變的慢性肝病所致肝纖維化的防治作用及其作用機制的研究。CCl4對肝毒性損傷主要是由于經(jīng)肝細胞微粒體細胞色素代謝裂解成三氯甲基自由基（CCl3），CCl3可進一步氧化反應(yīng)形成具有更強反應(yīng)活性的基團，從而產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化作用，破壞肝細胞的膜性結(jié)構(gòu)4，5。此損傷不斷反復，繼之有肝細胞壞死、炎癥激活肝臟內(nèi)Kupffer細胞、內(nèi)皮細胞等，使其釋放各種細胞因子，細胞因子進一步激活靜息狀態(tài)的星狀細胞（HSC），使之轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細胞（MFBLC），MFBLC過度增殖，同時大量合成各種細胞外基質(zhì)（ECM），ECM過度沉積而導致肝纖維化6。由于此模型的死亡率高，故于造模開始時的動物數(shù)應(yīng)

15、多增加些。CCl4所致慢性肝損傷時ALT，AST，HA均升高，TP，ALB，A/G均降低。肝纖維化時，肝間質(zhì)成纖維細胞增生，合成HA增加，肝內(nèi)細胞受損，對血液中HA的攝取及降解障礙，導致HA升高。而肝細胞是合成蛋白質(zhì)場所，肝細胞受損時合成蛋白質(zhì)功能降低，血中白蛋白降低，但肝細胞同時激活肝免疫系統(tǒng)，使球蛋白合成增加，故A/G降低。HGCJ兩個劑量組能降低ALT，AST，HA，同時升高TP，ALB，A/G比例，且能減輕肝細胞變性，減少結(jié)締組織的形成，提示HGCJ能減輕CCl4對肝臟的慢性損傷，對肝纖維化的形成有防治作用。實驗結(jié)果表明，HGCJ具有保護肝細胞膜，降低ALT，AST活性,從而保護肝臟；

16、能減少HA的含量，減輕細胞外基質(zhì)的過度沉積，從而對肝纖維化產(chǎn)生防治作用。參考文獻：1 Xu P,Liu F P. Usual Animal Model for Acute Liver InjuryJ.Chinese Journal of Pathophysiology(中國病理生理雜志)，1995，11（4）：447.2 Zhang J T. Mordern Pharmacological Experimental Methods(現(xiàn)代藥理實驗方法)M.Beijing Medical University And Union Medical University United Publishing House,1998.3 DeckerK,JoneRK,PopeIM,et al.Progressive Liver DiseaseJ.Hepatology,1997,42:18.4 Lu Y R,CHu Y J. Effects of Spirulina in Prevention of Liver Fibrosis in RatsJ.Chin J New Drugs Clin Rem(中國新藥與臨床雜志)，2001，20（3）：198.5 ZhongM,Yu S M,Huang L,