第七章螺旋體

1、第七章第七章 螺旋體螺旋體 (Spirocha)夏夏 春春 教授教授中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室本章重點(diǎn)本章重點(diǎn)l以豬痢疾密螺旋體、鉤端螺旋體為以豬痢疾密螺旋體、鉤端螺旋體為主要內(nèi)容，病原體的觀察方法、培主要內(nèi)容，病原體的觀察方法、培養(yǎng)特性及診斷方法。養(yǎng)特性及診斷方法。概概 述述l螺旋體是一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、螺旋體是一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、能活潑運(yùn)動(dòng)的原核單細(xì)胞微生物。能活潑運(yùn)動(dòng)的原核單細(xì)胞微生物。l基本結(jié)構(gòu)與細(xì)菌類似，有細(xì)胞壁、核質(zhì)、以二分裂繁殖和對(duì)抗生素敏感。l根據(jù)螺旋數(shù)目、大小與規(guī)則程度，以及兩螺旋間距離，分為分為5 5個(gè)屬

2、。個(gè)屬。l其中不少是非致病性的。 螺旋體細(xì)胞呈螺旋狀圓柱形，具有多個(gè)完整的螺旋體細(xì)胞呈螺旋狀圓柱形，具有多個(gè)完整的 螺旋。長(zhǎng)可為螺旋。長(zhǎng)可為5-250um5-250um，寬可為，寬可為0.1-3um0.1-3um。l某些可通過細(xì)菌濾器。某些可通過細(xì)菌濾器。l細(xì)胞的螺數(shù)、螺間及弧幅各不相同，在分類上有細(xì)胞的螺數(shù)、螺間及弧幅各不相同，在分類上有意義。意義。l軸絲軸絲 螺旋體的細(xì)胞中心為原生質(zhì)柱，外有螺旋體的細(xì)胞中心為原生質(zhì)柱，外有2-1002-100根以上的根以上的軸絲，又稱軸鞭毛或內(nèi)鞭毛，現(xiàn)亦簡(jiǎn)稱軸絲，又稱軸鞭毛或內(nèi)鞭毛，現(xiàn)亦簡(jiǎn)稱為鞭毛，沿原生質(zhì)柱的長(zhǎng)軸纏繞其上。為鞭毛，沿原生質(zhì)柱的長(zhǎng)軸纏繞其上

3、。l軸絲夾在細(xì)胞壁外鞘和細(xì)胞膜之間。軸絲夾在細(xì)胞壁外鞘和細(xì)胞膜之間。形態(tài)與結(jié)構(gòu)形態(tài)與結(jié)構(gòu)l對(duì)人和動(dòng)物有致病性的有三個(gè)屬：對(duì)人和動(dòng)物有致病性的有三個(gè)屬：l疏螺旋體屬疏螺旋體屬(Borrelia) l 3-10個(gè)稀疏而不規(guī)則的螺旋，呈波狀。l密螺旋體屬密螺旋體屬(Treponema) l 有細(xì)密而規(guī)則的螺旋，數(shù)目較多，兩端尖。l鉤端螺旋體屬鉤端螺旋體屬(Leptospira) l 螺旋較密螺旋體更細(xì)密而規(guī)則，一端或兩端彎曲成鉤狀，故名。其中許多群和型能引起人和動(dòng)物鉤端螺旋體病?！懊范久范尽钡谝还?jié)第一節(jié) 蛇形螺旋體屬（蛇形螺旋體屬（Serpulina）l蛇形螺旋體屬是一個(gè)新屬，包括豬痢蛇形螺旋豬痢蛇

4、形螺旋體體和無害蛇形螺旋體。l細(xì)胞呈疏松、規(guī)則的螺旋形，呈屈曲和蛇形運(yùn)動(dòng)或移位運(yùn)動(dòng)。l有機(jī)營養(yǎng),厭氧生長(zhǎng)。l可呈現(xiàn)微弱或強(qiáng)可呈現(xiàn)微弱或強(qiáng)溶血。溶血。豬痢蛇形螺旋體豬痢蛇形螺旋體一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性l1.1.形態(tài)結(jié)構(gòu)及染色特性形態(tài)結(jié)構(gòu)及染色特性本螺旋體形態(tài)結(jié)構(gòu)與其屬的描述一致，菌體多為2-4個(gè)彎曲，兩端尖銳。 革蘭氏陰性，姬姆薩氏和鍍銀法均能使其較好著色。2. 2. 培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l嚴(yán)格厭氧，嚴(yán)格厭氧，一般厭氧環(huán)境不易培養(yǎng)成功，必須使用預(yù)先還原的培養(yǎng)基，并置于含的H2(或N2)和CO2(二者比例為80：20)混合氣體混合氣體以及以冷鈀為觸媒的環(huán)境中才能生長(zhǎng)。l對(duì)培養(yǎng)基要求苛刻，通常使用

5、含10胎牛(或犢?；蛲?血清或血液的TSB或BHIB培養(yǎng)基。l在TSB血液瓊脂上，3848-96min可形成扁平、半透明、針尖狀、強(qiáng)溶血性菌落。3.3.抗原與免疫性抗原與免疫性l豬痢疾密螺旋體有兩種抗原成分：l 脂多糖、蛋白質(zhì)（特異性）。l該菌有8個(gè)血清型。l自然發(fā)病豬康復(fù)后，可產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，具有一定的保護(hù)力。4. 4. 致病性致病性l常發(fā)生于8-14周齡幼豬，引起豬痢疾引起豬痢疾l （血痢、黑痢、出血性痢疾、粘膜出血性?。﹍主要癥狀是嚴(yán)重粘膜出血性下痢和迅速減重。l特征病變?yōu)榇竽c粘膜發(fā)生部液滲出性 (卡他性)、出血性和壞死性炎癥。l經(jīng)口傳染，病原傳播迅速，發(fā)病率較高(約75)而致死率較低(

6、5-20) 。5. 微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查直接鏡檢直接鏡檢 ( (3種方法)l染色鏡檢：染色鏡檢：l以病豬的新鮮糞便粘液，或病變結(jié)腸粘膜刮取物制成薄涂片，染色鏡檢。多用姬姆薩氏法染色法。多用姬姆薩氏法染色法。也可用印度墨汁作負(fù)染或鍍銀染色法染色鏡檢。l相差或暗視野顯微鏡活體檢查：相差或暗視野顯微鏡活體檢查：l待檢樣品與適量生理鹽水混合后制成壓滴標(biāo)本片，用相差或暗視野顯微鏡下鏡檢。若每個(gè)高倍視野中見有每個(gè)高倍視野中見有2-32-3個(gè)或更多個(gè)蛇樣運(yùn)動(dòng)的較大螺旋體即可確診。個(gè)或更多個(gè)蛇樣運(yùn)動(dòng)的較大螺旋體即可確診。l染色組織切片檢查染色組織切片檢查：l將采集的病變腸組織先用10甲醛緩沖液固定后切片，

7、再用維多利亞藍(lán)染色法染色。鏡檢時(shí)可見螺旋體大量存在組織表面及粘液囊腔內(nèi)，有時(shí)數(shù)量多到堆積成網(wǎng)狀。分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)：l過濾培養(yǎng)法：過濾培養(yǎng)法：l將樣品作5-10倍稀釋，輕度離心，上清用0.8um和0.45um濾膜依次過濾過濾。取濾液直接涂布接種于鮮血瓊脂取濾液直接涂布接種于鮮血瓊脂平板上，厭氧培養(yǎng)平板上，厭氧培養(yǎng)37-3837-38培養(yǎng)培養(yǎng)3-6d3-6d，每隔，每隔2d2d檢查檢查1 1次，次，當(dāng)觀察到平板上出現(xiàn)當(dāng)觀察到平板上出現(xiàn)溶血現(xiàn)象時(shí)，即可挑取可疑菌落，溶血現(xiàn)象時(shí)，即可挑取可疑菌落，作成懸滴或壓滴標(biāo)本，用暗視野顯微鏡檢查。作成懸滴或壓滴標(biāo)本，用暗視野顯微鏡檢查。鉤端螺旋體（暗視野映光法

8、）鉤端螺旋體（暗視野映光法）6. 6. 防防 治治l對(duì)豬痢目前尚無可靠或?qū)嵱玫拿庖咧苿┮怨╊A(yù)防之用。l普遍采用抗生素和化學(xué)藥物控制此病普遍采用抗生素和化學(xué)藥物控制此病.l培育SPF豬，凈化豬群是防治本病的主要手段。第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)螺旋體屬細(xì)螺旋體屬 (Leptospira)l細(xì)螺旋體屬成員是一大類纖細(xì)、螺旋致細(xì)螺旋體屬成員是一大類纖細(xì)、螺旋致密，一端或兩端彎曲呈鉤狀的螺旋體，密，一端或兩端彎曲呈鉤狀的螺旋體，故常稱鉤端螺旋體，簡(jiǎn)稱鉤體。故常稱鉤端螺旋體，簡(jiǎn)稱鉤體。l大部分營腐生生活，廣泛分布于各種水生環(huán)境中，無致病性。一部分為寄生性和致病性的螺旋體，可引起人和動(dòng)物的細(xì)螺旋體病。一、生物學(xué)性狀一

9、、生物學(xué)性狀1.形態(tài)與染色形態(tài)與染色l螺旋細(xì)密、規(guī)則，形似細(xì)螺旋細(xì)密、規(guī)則，形似細(xì)小珍珠排列的細(xì)鏈。一端小珍珠排列的細(xì)鏈。一端或兩端呈鉤狀。運(yùn)動(dòng)活潑或兩端呈鉤狀。運(yùn)動(dòng)活潑 ,常使菌體呈常使菌體呈C、S或或8字型字型l革蘭染色陰性，不易著染革蘭染色陰性，不易著染染染成棕褐色成棕褐色l運(yùn)動(dòng)活潑運(yùn)動(dòng)活潑2.2.培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l在致病性螺旋體中鉤體比較容易在人工培養(yǎng)生長(zhǎng)。但在血液瓊脂和其他常規(guī)瓊脂上不生長(zhǎng)。l常用Korthof 培養(yǎng)基含蛋白胨和10%的兔血清。大多數(shù)為液體或半固體（0.1%瓊脂）。l專性需氧，最佳生長(zhǎng)溫度為專性需氧，最佳生長(zhǎng)溫度為28-30。在需氧，pH7.4, 28左右培育1-2周

10、，可見液體培養(yǎng)基半透明云霧狀生長(zhǎng)。l鉤體的生化反應(yīng)不活潑，不分解糖類和蛋白質(zhì)。能產(chǎn)生過氧化氫酶，有些株能產(chǎn)生溶血素。3. 3. 抵抗力抵抗力l熱抵抗力弱，熱抵抗力弱，601min即死亡。即死亡。l0.2%來蘇、來蘇、1:2000升汞、升汞、1%石炭酸經(jīng)石炭酸經(jīng)1030min被殺滅。被殺滅。l對(duì)青霉素、金霉素、四環(huán)素等抗生素和各種化對(duì)青霉素、金霉素、四環(huán)素等抗生素和各種化學(xué)消毒劑敏感性。學(xué)消毒劑敏感性。l在濕土或水中可存活數(shù)月。在濕土或水中可存活數(shù)月。4. 抗原結(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)按抗原結(jié)構(gòu)分類按抗原結(jié)構(gòu)分類 致病性鉤體致病性鉤體具有表面抗原和內(nèi)部抗原兩種。具有表面抗原和內(nèi)部抗原兩種。表面抗原為糖蛋白復(fù)

11、合物，具有型特異性，是表面抗原為糖蛋白復(fù)合物，具有型特異性，是鉤體分型的依據(jù)。后者為類脂多糖復(fù)合物，具鉤體分型的依據(jù)。后者為類脂多糖復(fù)合物，具有屬特異性，為鉤體分群的依據(jù)。有屬特異性，為鉤體分群的依據(jù)。 全世界已發(fā)現(xiàn)全世界已發(fā)現(xiàn)2525個(gè)血清群，共個(gè)血清群，共200200多個(gè)血清型。多個(gè)血清型。l按按DNADNA同源性分類同源性分類 5.5.致病物質(zhì)致病物質(zhì)l致病物質(zhì) 溶血素、溶血素、 細(xì)胞毒因子、內(nèi)毒素樣物質(zhì)細(xì)胞毒因子、內(nèi)毒素樣物質(zhì)l所致疾病 l人畜共患傳染病。 我國已從50多種動(dòng)物中檢出鉤體，其中以鼠類和豬為主要傳染源和儲(chǔ)存宿主，帶菌率很高，且排毒期長(zhǎng)。l牛的鉤體病是全球性的，不同地區(qū)感染

12、的血清型有所不同，但以波摩那型和哈勒焦型鉤體感染最多見，我國從牛分離的有巴達(dá)維亞型。l豬鉤體病在我國較多見，大小豬均可感染發(fā)病或長(zhǎng)期帶菌，在許多地區(qū)豬是人鉤體病的主要傳染源。波摩那最常見，其次為犬群。l馬、驢及騾在我國主要由波摩那群、流感傷寒群、澳洲群和犬群鉤體引起。l羊鉤體病在我國也有發(fā)生。l犬鉤體病較常見，有些地區(qū)血清流行病學(xué)調(diào)查，20-80%的犬曾經(jīng)感染鉤體，許多犬長(zhǎng)期從尿排出活的致病性鉤體。6. 微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查l病原體檢測(cè)病原體檢測(cè)l發(fā)病10天內(nèi)取血液; 1周后取尿液;有腦膜刺激者取腦脊液.l直接鏡檢l分離與鑒定 接種至Korthof 培養(yǎng)基，置28孵育。l陽性標(biāo)本在2周內(nèi)可見培養(yǎng)液呈輕度混濁暗視野顯微鏡檢查有則用已知診斷血清鑒定其血清群和血清型。l陰性標(biāo)本:分離培養(yǎng)應(yīng)連續(xù)觀察4個(gè)月，仍無生長(zhǎng)者。動(dòng)物接種動(dòng)物接種l動(dòng)物接種 l是分離鉤體的敏感方法。尤其適合檢查有雜菌污染的標(biāo)本。常用幼齡豚鼠