上海交通大學遺傳學課件基因工程與基因組學匯總剖析

1、誕生：誕生：分離應(yīng)用：應(yīng)用：宿主細胞中自我復(fù)制 兩種片斷放在一起，適宜條件下，通過堿基互補雙鏈DNA分子（通過氫鍵） DNA連接酶，形成磷酸二脂鍵，連接成重組的DNA分子切割后產(chǎn)生平齊切割后產(chǎn)生平齊單鏈單鏈切割后產(chǎn)生平齊切割后產(chǎn)生平齊末端末端， DNA連接酶，連接成重組的連接酶，連接成重組的DNA分子分子酶切重組的DNA分子1000個1個復(fù)制后復(fù)制后宿主細胞宿主細胞轉(zhuǎn)化時轉(zhuǎn)化時菌落成藍色菌落成藍色陽性克隆陽性克隆攜帶外源攜帶外源DNA沒有外源沒有外源DNA2/3的序列為中間基因的序列為中間基因族族DNA左臂左臂DNA右臂右臂可以被外源可以被外源DNA片斷取代片斷取代不影響噬菌體感染細菌、形成噬

2、菌斑（central gene cluster）導入限制性酶切點導入限制性酶切點DNA右臂右臂DNA左臂左臂DNA左臂左臂 可以被外源可以被外源DNA片斷取代片斷取代 DNA右臂右臂噬菌體蛋白噬菌體蛋白包裝提取物包裝提取物轉(zhuǎn)導感染轉(zhuǎn)導感染宿主菌株宿主菌株在宿主細胞內(nèi)繁殖、擴增在宿主細胞內(nèi)繁殖、擴增噬菌斑噬菌斑鑒鑒定陽性克定陽性克隆隆兩個抗性基因序列內(nèi)，有可供兩個抗性基因序列內(nèi)，有可供克隆外源克隆外源DNADNA片斷的酶切的位點片斷的酶切的位點外源基因插入失活外源基因插入失活轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化URA3 3- - 酵母菌酵母菌選擇陽性克隆選擇陽性克隆基因工程改良基因工程改良BAC載體載體大多數(shù)雙子葉植物大多

3、數(shù)雙子葉植物產(chǎn)生冠癭瘤冠癭瘤獨立獨立不受控制生長不受控制生長感染感染受傷受傷部位部位冠癭堿冠癭堿碳源碳源氮源氮源T-DNA整合宿整合宿主細胞染色體主細胞染色體200-500克克kb，環(huán)狀環(huán)狀DNA分子分子很難用作很難用作DNA克隆載體進行操作克隆載體進行操作的的毒性基因是T-DNA轉(zhuǎn)移所必需的，以順反兩種方式調(diào)控T-DNA的轉(zhuǎn)移致瘤基因，與轉(zhuǎn)移無關(guān)誘導根瘤細胞根瘤細胞不能再生植株T-DNA卸甲抗性基因、外源基因重組T-DNALB+RB轉(zhuǎn)移、整合植物染色體再生轉(zhuǎn)基因植株直接參與轉(zhuǎn)移、整合LB,RB:T-DNA:Vir區(qū)區(qū)全部DNA+=酶切核基因庫感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞我的一條染色體+=酶切核基因庫感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞感染寄主細胞3AAAAA5mRNA引物TTTTTcDNA基因組的部分序列絕大多數(shù)真核生物噬菌體寄主細胞1個噬菌斑1個克隆DNA左臂左臂可以被外源可以被外源DNA片斷取代片斷取代DNA右臂右臂噬菌體蛋白噬菌體蛋白包裝提取物包裝提取物轉(zhuǎn)導感染轉(zhuǎn)導感染宿主菌株宿主菌株在宿主細胞內(nèi)在宿