ISO標(biāo)準(zhǔn)參考譯文沙門氏菌檢驗(yàn)基準(zhǔn)方法

1、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO6579食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué)沙門氏菌檢測(cè)的基準(zhǔn)方法內(nèi)容1范圍2參考標(biāo)準(zhǔn)3定義4原理4.1概要4.2前增菌一一非選擇性液體培養(yǎng)基4.3增菌一一選擇性液體培養(yǎng)基4.4劃平板和鑒定4.5確認(rèn)5培養(yǎng)基、試劑和血清1概要1培養(yǎng)基和試劑1血清6設(shè)備和玻璃器皿7采樣8檢驗(yàn)樣品的制備9程序試驗(yàn)樣品和原始懸浮液非選擇性前增菌選擇性增菌劃平板和鑒定確認(rèn)10結(jié)果表示11檢驗(yàn)報(bào)告12質(zhì)量保證附錄A（標(biāo)準(zhǔn)化）程序圖表附錄B（標(biāo)準(zhǔn)化）培養(yǎng)基和試劑的成份及準(zhǔn)備附錄C（非標(biāo)準(zhǔn)化）實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn)結(jié)果參考書目前言ISO（國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織）是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化團(tuán)體的全世界同盟。通常由ISO技術(shù)委員會(huì)來執(zhí)行國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的制訂工作（

2、ISO成員體）。通常由ISO技術(shù)委員會(huì)來完成國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)備工作。在委員會(huì)中，若對(duì)建立的技術(shù)委員會(huì)有興趣的話，每個(gè)成員體有權(quán)作為代表。國(guó)際組織、政府或非政府組織，通過ISO聯(lián)系，也可以參加這項(xiàng)工作。在所有電工標(biāo)準(zhǔn)方面，ISO與國(guó)際電工委員會(huì)（IEC）緊密合作。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)按照ISO/IEC指南第三章所列的規(guī)則草擬。技術(shù)委員會(huì)的主要任務(wù)是準(zhǔn)備國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。被技術(shù)委員會(huì)采用的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)草案以投票方式在成員體內(nèi)運(yùn)行。至少要75城員體的投票贊成，才能作為一個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布。要引起注意的可能性是：本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的一些要素可能是專利權(quán)主體。ISO不應(yīng)承擔(dān)鑒定部分或全部的這種專利權(quán)。ISO6579是由食品ISO/TC34技術(shù)

3、委員會(huì)、微生物SC盼委員會(huì)所準(zhǔn)備的。第四版刪除或更換了第三版（ISO6579:1993）,并已作了技術(shù)性修訂。附錄A和附錄B形成了本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化部分。附錄C僅為資料。介紹因?yàn)橛写罅康牟煌N類的食品和飼料產(chǎn)品， 本基準(zhǔn)方法可能對(duì)某些產(chǎn)品并不完全適用，而另一些產(chǎn)品可能得用到其他方法。既然這樣，如果為論證技術(shù)上的原因而絕對(duì)需要時(shí)，那么就可使用這些產(chǎn)品指定的不同方法。不過，應(yīng)盡可能地使用本基準(zhǔn)方法。在下一次審查這個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)時(shí)， 我們會(huì)考慮所有有用關(guān)于這些指標(biāo)所涉及的范圍內(nèi)以及個(gè)別產(chǎn)品不遵照這些指標(biāo)的原因的信息。（產(chǎn)品的）檢測(cè)方法無法在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到統(tǒng)一，而且，對(duì)于某些產(chǎn)品，可能已經(jīng)有與本基準(zhǔn)方法不符

4、的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)/或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)存在。但是我們希望，在以后審查這些標(biāo)準(zhǔn)時(shí)能進(jìn)行修改，使其同本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)保持一致，以保證除了因技術(shù)原因確實(shí)需要外不會(huì)發(fā)生背離本基準(zhǔn)方法的情況.微生物學(xué)一一檢測(cè)沙門氏菌方法的通用指南警告一一為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員的身體健康，在適當(dāng)裝備的實(shí)驗(yàn)室、在熟練的微生物學(xué)家的控制下檢測(cè)沙門氏菌、特別是傷寒沙門氏菌、副傷寒沙門氏菌，這是非常關(guān)鍵的。另外最要關(guān)注的是所有培養(yǎng)物的處置。1范圍本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)詳述了沙門氏菌的基準(zhǔn)方法，包括傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌。在緒論中受討論的局限性，本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)適用于一一供人類消費(fèi)或動(dòng)物飼養(yǎng)所使用的產(chǎn)品。一一在食物生產(chǎn)和處理范圍內(nèi)的環(huán)境樣品。警告一一本方法并不包括

5、所有的傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌。2標(biāo)準(zhǔn)的參考資料通過本文中的參考目錄，下列標(biāo)準(zhǔn)化文件包含組成本國(guó)際標(biāo)規(guī)定的條款。對(duì)后來更正或修訂的陳舊參考資料，這些條款并不適用。然而，鼓勵(lì)那些基于贊同本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的成員，去調(diào)查下面提到的大多數(shù)新版標(biāo)準(zhǔn)化文件應(yīng)用的可能性。對(duì)更新的參考資料，最新版的標(biāo)準(zhǔn)化文件作了參考應(yīng)用。ISO和IEC的成員保持對(duì)現(xiàn)行有效國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的注冊(cè)。ISO6887-1,食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué)一一微生物檢驗(yàn)中測(cè)試樣品、 原始懸浮液及十倍稀釋液的制備一一第一章：原始懸浮液和十倍稀釋液制備的通用規(guī)則ISO7218:1996,食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué)微生物檢驗(yàn)的通用規(guī)則ISO8261,牛奶及奶制

6、品一一微生物檢驗(yàn)中測(cè)試樣品、原始懸浮液及十倍稀釋液制備的通用指南3術(shù)語和定義應(yīng)用下列定義來表達(dá)本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的用途。沙門氏菌：在選擇性培養(yǎng)基上形成典型或少典型的菌落，當(dāng)依照本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，它們表現(xiàn)出特有的生化反應(yīng)和血清學(xué)特征的微生物。沙門氏菌檢測(cè)：當(dāng)依照本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，在一定重量或體積的產(chǎn)品中，測(cè)定這些沙門氏菌的存在與否。4原理1概要沙門氏菌檢測(cè)需四個(gè)連續(xù)階段（也可以見附錄A）注沙門氏菌可能少量存在，并經(jīng)常伴隨著相當(dāng)數(shù)量的其它腸桿菌屬或其它菌屬。因此，選擇性增菌是必需的；此外，為盡可能地檢測(cè)到受傷沙門氏菌，經(jīng)常需要進(jìn)行前增菌。1警增菌一一非選擇性液體培養(yǎng)基將試驗(yàn)部分接種于緩沖蛋白陳水，

7、在37C1C培養(yǎng)18h土2h0對(duì)于某些食品，則需利用其它的前增菌程序，見9.1.2o數(shù)量比較龐大時(shí)，在接種測(cè)試樣品前應(yīng)將緩沖蛋白陳水加熱到37cTCo1增菌一一選擇性液體培養(yǎng)基將4.2得到的培養(yǎng)物接種到RVS肉湯和MKTT吶湯。RV的湯在41.51C孵育24h3h,MKTT的湯在37土1C孵育24h3hc1劃平板和鑒別從4.3中獲得的培養(yǎng)物接種于兩種選擇性固體培養(yǎng)基上。一一木糖賴氨酸月氧膽鹽瓊脂（XLD脂）增一對(duì)XLD瓊脂的任何其它補(bǔ)充性的選擇性培養(yǎng)基，特別是適合于分離乳糖陽性的沙門氏菌、傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌的培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)室可以選擇使用。XLD瓊脂在371C孵育，在24h3h后檢查結(jié)果

8、。第二種選擇性瓊脂按照廠家說明書進(jìn)行孵育。注作為資料，亮綠瓊脂、亞硫酸鈿瓊脂等，可用作第二種平板劃線培養(yǎng)基。1確認(rèn)挑選可疑沙門氏菌的菌落進(jìn)行次培養(yǎng)，再按4.4所描述的劃線分離，通過適當(dāng)?shù)纳囼?yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)加以證實(shí)。5培養(yǎng)基、試劑和血清概要供常規(guī)實(shí)驗(yàn)室使用，見ISO7218。培養(yǎng)基和試劑注由于培養(yǎng)基和試劑的數(shù)量龐大，為了表述清晰，我們認(rèn)為將它們的組成和配制在附錄B中列出更適當(dāng)。非選擇性前增菌液：緩沖蛋白陳水見B.1第一種選擇性增菌液：RVS肉湯見B.2第二種選擇性增菌液：MKTT舷）湯見B.3固體選擇性平板培養(yǎng)基第一種培養(yǎng)基：木糖賴氨酸去氧膽酸鹽瓊脂（XLD脂）見B.4第二種培養(yǎng)基第二種培養(yǎng)基

9、的選擇是留給檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室自定。在它的準(zhǔn)備使用時(shí)應(yīng)準(zhǔn)備按廠家說明書準(zhǔn)確執(zhí)行。營(yíng)養(yǎng)瓊脂見B.5三糖/鐵瓊脂（TSI瓊脂）見B.6尿素瓊脂（Christensen）見B.7L-賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基見B.8B-半乳糖甘酶檢測(cè)試劑（或依照廠商說明書使用的比色盤）見B.9V-P反應(yīng)試劑見B.10呷咪反應(yīng)試劑見B.11半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂見B.125.2.13生理鹽水溶液見B.135.3血清含有一種或多種O抗原的多價(jià)血清型可由商品化獲得，也就是包含一個(gè)或更多個(gè)O群抗血清（稱單價(jià)或多價(jià)抗O血清），抗Vi血清和含有一個(gè)或多個(gè)H因子的抗血清（稱單價(jià)或多價(jià)抗菌素H血清）。應(yīng)確保所用的抗血清足以檢測(cè)所有的沙門氏菌血清型。6設(shè)備

10、和玻璃器皿如果操作規(guī)范，對(duì)于可重復(fù)使用的玻璃器皿，重復(fù)使用是可以接受的。通?；蛱厥馇闆r下微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)備（見ISO7218）如下：干滅菌（烘箱）或濕滅菌（高壓滅菌器）設(shè)備見ISO7218干燥柜或烘箱，通過對(duì)流通風(fēng)，能在37c土1C和55c土1C之間調(diào)節(jié)溫度。培養(yǎng)箱，能調(diào)節(jié)溫度至351或371C。水浴，能調(diào)節(jié)溫度至41.5C1C,或孵育，能調(diào)節(jié)溫度至41.5C1CO水浴，能在44C-47c問調(diào)節(jié)溫度。水浴，能調(diào)節(jié)溫度至37C1C。由于沙門氏菌的低傳染性，推薦使用含有抗菌劑的水浴鍋（6.4、6.5和6.6）滅菌環(huán)，直徑約為3mn口斤是0TSI瓊脂（5.2.6）先在TSL瓊脂斜面上劃線，再于底層穿刺

11、。在37C土1C孵育24h3h。在培養(yǎng)基上顏色變化的解釋如下：a）底部黃色葡萄糖陽性（葡萄糖被利用）紅色或未變葡萄糖陰性（葡萄糖未被利用）黑色硫化氫形成氣泡或裂縫葡萄糖產(chǎn)氣b）斜面黃色乳糖和/或蔗糖陽性（乳糖和/或蔗糖被利用）紅色或不變色乳糖和/或蔗糖陰性（乳糖和蔗糖均不被利用）典型的沙門氏菌培養(yǎng)物顯示堿性（紅色）斜面和酸性（黃色）底部，伴隨著產(chǎn)氣（氣泡）和（約90%情況下）硫化氫產(chǎn)生（瓊脂變黑）（9.5.3.8）。當(dāng)分離到乳糖陽性的沙門氏菌時(shí)，TSI的斜面是黃色的。因此，沙門氏菌培養(yǎng)物的初步確認(rèn)并不能僅僅根據(jù)TSI瓊脂試驗(yàn)的結(jié)果。尿素瓊脂（5.2.7）在瓊脂斜面上劃線。在371C孵育24h3

12、h,間隔一定時(shí)間檢查。如果反應(yīng)是陽性，尿素裂解釋放氨，其顏色由酚紅變成玫瑰紅，最后變成深櫻紅色。反應(yīng)通常在2h-4h后可見。L-賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基（5.2.8）接種于液體培養(yǎng)基表面以下，在37c1C孵育24h土3h0培養(yǎng)后出現(xiàn)混濁及出現(xiàn)紫色表明為陽性反應(yīng)。黃色表明陰性反應(yīng)。B-牛乳糖試驗(yàn)取滿環(huán)可疑菌落放于含有0.25ml生理鹽水的試管中。加1滴甲笨并搖勻。把試管放入37c水?。?.6）,保持幾分鐘（約5分鐘）。加0.25ml檢測(cè)B-牛乳糖的試劑，混勻。再將試管放入37c水浴，保持24h3h,間隔一定時(shí)間檢查試管。黃色表明為陽性反應(yīng)。反應(yīng)通常在20分鐘后可見。如果用準(zhǔn)備好的紙片（5.2.9）,則

13、按照生產(chǎn)廠商的說明書操作。V-P反應(yīng)培養(yǎng)基取滿環(huán)可疑菌落放于含有3mlVP培養(yǎng)基的滅菌試管中。在371C孵育24h3h。孵育后，加入2滴肌氨酸溶液，3滴1-蔡酚-乙醇液，隨后加入2滴氫氧化鉀溶液；每種試劑加完后要搖勻。15分鐘內(nèi)顏色由粉紅變?yōu)轷r紅表明陽性反應(yīng)。呷咪反應(yīng)培養(yǎng)基將可疑菌落接種于含有5ml的胰蛋白陳/色氨酸培養(yǎng)基的試管中。在371C孵育24h3h0孵育后，加1mlKovacs試齊上出現(xiàn)紅色環(huán)表明陽性反應(yīng)。黃褐色環(huán)表明陰性反應(yīng)。生化試驗(yàn)的解釋常見沙門氏菌出現(xiàn)的反應(yīng)結(jié)果見表1。血清學(xué)確認(rèn)和血清型概要在消除自凝現(xiàn)象后，用適當(dāng)?shù)难逋ㄟ^玻片凝集試驗(yàn)對(duì)純菌落（9.5.2）檢測(cè)沙門氏菌O抗原、V

14、i抗原和H抗原的存在。如果與以下描述有差異的話，則按照產(chǎn)品說明書使用抗血清。自凝現(xiàn)象的消除放一滴生理鹽水（5.2.13）于仔細(xì)清潔過的玻片上。用接種環(huán)挑取部分被測(cè)菌落并將水滴打散，以獲得均一混濁的懸浮液。注將部分被測(cè)菌在一滴水打散，然后用一滴生理鹽水（5.2.13）與它混勻，這也是可能的。輕輕搖動(dòng)玻片30s-60s。在暗背景下觀察結(jié)果，用放大鏡更好。如果細(xì)菌凝集成或多或少的明顯塊狀，則可認(rèn)為是自凝集，那么按照下列方法進(jìn)行沙門氏菌的抗原測(cè)定是不可行的。O-抗原測(cè)定用一個(gè)無自凝集的純菌落，用一滴抗。血清（5.3）代替生理鹽水（5.2.13）,按9.5.4.2步驟操作。如果出現(xiàn)凝集，則認(rèn)為該反應(yīng)為陽

15、性。用多價(jià)和單位血清接連凝集。Vi-抗原測(cè)定按9.5.4.2步驟操作，但用一滴抗Vi血清代替生理鹽水。如果出現(xiàn)凝集，則認(rèn)為該反應(yīng)為陽性。試驗(yàn),沙門氏菌屬（9.5.329.5.7）傷寒沙門氏菌A型副傷寒沙門氏菌B型副傷寒沙門氏菌C型副傷寒沙門氏菌其它菌屬反應(yīng)%反應(yīng)%b反應(yīng)%反應(yīng)%c反應(yīng)%bTSI 葡萄糖產(chǎn)酸+100+100+100TSI 葡萄糖產(chǎn)氣d-0+100+92TSI 乳糖產(chǎn)酸-2-100-1TSI 庶糖產(chǎn)酸-0-0-1TSI 硫化氫產(chǎn)生+97-10+92尿素水解-0-0-1賴氨酸脫竣酶+98-0+950-牛乳糖反應(yīng)-0-0-2eV-P 反應(yīng)-0-0-0口引噪反應(yīng)-0-0-1a 來源于參考

16、資料5b 這些百分率表明并不是所有分離到的沙門氏菌血清型都會(huì)顯示出+或-的反應(yīng)結(jié)果。在食物中毒不同部位間或食物中毒里面所分離出的沙門氏菌血清型，其百分率是可以變化的。c 這些百分率不能從現(xiàn)有的文獻(xiàn)中獲得。d 傷寒沙門氏菌不產(chǎn)氣。e 亞利桑那亞型腸炎沙門氏菌為乳糖陽性或陰性反應(yīng)，但通常 0-牛乳糖為陽性反應(yīng)。為便于這些菌屬的研究，執(zhí)行補(bǔ)充試驗(yàn)可能很有用處。表1生化試驗(yàn)的解釋H-抗原測(cè)定將純的無自凝集的菌落接種于半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂。在37c1C孵育24h3h用此培養(yǎng)物來檢測(cè)H-抗原，按9.5.4.2步驟操作，但用一滴抗H血清代替生理鹽水。如果出現(xiàn)凝集，則認(rèn)為該反應(yīng)為陽性。生化和血清學(xué)反應(yīng)的解釋表2給出

17、的是所用菌落（9.5.2）完成確認(rèn)試驗(yàn)（9.5.3和9.5.4）的解釋。表2確認(rèn)試驗(yàn)的解釋生化反應(yīng)自凝集血清學(xué)反應(yīng)解釋典型的無O-,Vi-或H-抗原陽性考慮是沙門氏菌典型的無所有反應(yīng)為陰性典型的有未做（見9.5.4.2）可能是沙門氏菌不典型反應(yīng)無/有O-,Vi-或H-抗原陽性不典型反應(yīng)無/有所有反應(yīng)為陰性排除沙門氏菌最后確認(rèn)被考慮為沙門氏菌，或可能是沙門氏菌（見表2）的菌落，應(yīng)送公認(rèn)的沙門氏菌參比中心做最后的血清型確認(rèn)。送確認(rèn)時(shí)應(yīng)同時(shí)附上關(guān)于此菌的所有盡可能多的信息，以及是一次爆發(fā)流行還是在食物中10結(jié)果表達(dá)與解釋的結(jié)果相一致，揭示Xg或Xml測(cè)試樣品中是否存在沙門氏菌。多實(shí)驗(yàn)室間的試驗(yàn)所獲得

18、的精密數(shù)據(jù)見附錄C。11測(cè)試報(bào)告測(cè)試報(bào)告應(yīng)詳細(xì)說明：制樣方法，如果知道的話；試驗(yàn)過程中任何增菌液或孵育條件的偏離；所有非本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)指定的操作條件，或者被認(rèn)為可選擇的、和可能影響結(jié)果的任何事件的細(xì)節(jié)；得到的結(jié)果；測(cè)試報(bào)告也應(yīng)該聲明得到的陽性結(jié)果是僅用了劃線培養(yǎng)基（5.2.4）而不是本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)指定的方法。12質(zhì)量保證為檢查實(shí)驗(yàn)室用本國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)描述的方法和培養(yǎng)基來檢測(cè)沙門氏菌的能力，提出參考樣品加入含前增菌液的質(zhì)控瓶中。對(duì)質(zhì)控瓶的檢測(cè)過程與測(cè)試樣品培養(yǎng)相一致。附錄A（標(biāo)準(zhǔn)化）檢測(cè)程序圖室溫下緩沖蛋白月東水37c士1C孵育（9.2）18h2h在溫度下的蛋白月東水緩沖溶液前增菌選擇性增菌0.1ml培養(yǎng)物+

19、10mlRVS肉湯（9.3.1）41.5C土1C孵育24h士3h1ml培養(yǎng)物+10mlMKTTn肉湯（9.3.1）37C士1C孵育24h3hXLD培養(yǎng)基和選擇第二種瓊脂（9.4.1）37C士1C孵育24h3h劃平板從每塊平板上檢測(cè)一個(gè)特征菌落，如果陰性，檢測(cè)所有明顯的菌落（9.5.2）營(yíng)養(yǎng)瓊脂，37C1C孵育24h3h（9.5.2）確認(rèn)生化確認(rèn)（9.5.3）血清學(xué)確認(rèn)（9.5.4）結(jié)果表示（條款10）（標(biāo)準(zhǔn)化）培養(yǎng)基和試劑的組織和制備B.1緩沖蛋白月東水B.1.1成份酷蛋白消化酶10.0gNaCl5.0gNa2HPO4?12H2O9.0gKH2PO41.5g水1000mlB.1.2制備將上述成

20、分溶解于水，如需要可以加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH值，以便在消毒后25c下pH值為7.00.2。分裝培養(yǎng)基于適當(dāng)容量的燒瓶中，以便滿足實(shí)驗(yàn)的需要。置于高壓滅菌鍋中121c滅菌15分鐘。B.2RVS肉湯B.2.1溶齊1JAB.2.1.1成份大豆消化酶5.0gNaCl8.0gKH2PO41.4gK2HPO40.2g水1000mlB.2.1.2制備將上述成分溶解于水，如需要可以加熱到70c左右。溶液在完全RVS培養(yǎng)基制備時(shí)應(yīng)已經(jīng)準(zhǔn)備就緒。B.2.2溶劑BB.2.2.1成份MgCl2?12H2O水B.2.2.2制備將氯化鎂溶于水中。由于氯化鎂容易吸濕，依據(jù)相關(guān)公式，可取整個(gè)的MgCl.6H2O溶解于新開的容

21、器內(nèi)250gMgCl.6H2O加入625ml的水，得到一個(gè)總體積為788ml的溶液，MgCl.6H2O度約為31.7g/100ml。B.2.3溶齊1JCB.2.3.1成份400.0g1000ml。例如,的重量濃徹底混勻培養(yǎng)基該基礎(chǔ)培養(yǎng)基于B.3.2口引喋溶液B.3.2.1成份碘碘化鉀(KI)水B.3.2.2制備孔雀綠草酸鹽水0.4g100mlB.2.3.2制備將孔雀綠草酸鹽溶于水中。溶液置于棕色瓶中，室溫保存至少8個(gè)月。B.2.4完全培養(yǎng)基成份溶液A(B.2.1)1000ml溶液B(B.2.2)100ml溶液C(B.2.3)10ml制備加入1000ml溶液A、100ml溶液B、10ml溶液C。

22、如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后pH值為5.20.2。使用前，用10ml量分裝試管。置高壓滅菌鍋中115c滅菌15分鐘。已配好的培養(yǎng)基于3C2C保存。隔天使用該培養(yǎng)基。注最終培養(yǎng)基成分是：大豆消化酶，4.5g/l;氯化鈉，7.2g/l;磷酸二氫鉀(KH2PO4+K2HPO4),1.44g/l;MgCl2,13.4g/l或MgCl212H2O28.6g/l;孔雀綠草酸鹽，0.036g/l。B.3MKTTn肉湯7基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.3.1.1成份肉浸膏酷蛋白消化酶NaClCaCO3Na2s2O3?12H2O4.3g8.6g2.6g38.7g47.8g細(xì)菌學(xué)使用的牛膽汁亮綠水47.8g9.6g1000mlB

23、.3.1.2制備將脫水的基礎(chǔ)成份或基礎(chǔ)完全培養(yǎng)基溶解于水中，并煮沸5分鐘。如需要，調(diào)節(jié)pH,使其25c時(shí)值為8.20.2。3c2C可保存4周。20.0g25.0g100ml將碘化鉀完全溶于10ml水中，再加入碘，然后加入100ml水稀釋。不需加熱。在室溫下將配制好的溶液置于密閉容器，暗處保存。新生霉素溶液成份新生霉素鈉鹽水制備將新生霉素鈉鹽溶于水中，過濾滅菌。32c保存4周以上。完全培養(yǎng)基成份基礎(chǔ)培養(yǎng)基（B.3.1）1000ml碘-化鉀溶液（B.3.2）20ml新生霉素溶液（B.3.35ml制備無菌條件下，將5ml新生霉素溶液（B.3.3）加入到1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)（B.3.1）中。混勻,然后

24、加入20ml碘-碘化鉀溶液（B.3.2）?；靹?。在無菌條件下，按實(shí)驗(yàn)需要量將培養(yǎng)基分裝于滅菌好的燒瓶中。完全培養(yǎng)基應(yīng)隔天使用。木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂7基礎(chǔ)培養(yǎng)基成份酵母浸粉3.0gNaCl5.0g木糖3.75g孚L糖7.5g蔗糖7.5gL-鹽酸賴氨酸5.0gNa2SO36.8g檸檬酸鐵（出）俊0.8g苯酚紅0.08g脫氧膽酸鈉1.0g瓊脂9g-18g1）水1000ml制備將脫水的基礎(chǔ)成份或基礎(chǔ)完全培養(yǎng)基溶解于水中，加熱，不停地?cái)嚢?，直至培養(yǎng)基開始沸騰。避免溫度過高。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為7.40.2。將此培養(yǎng)基適量倒入燒瓶中。加熱并不斷攪拌，直到培養(yǎng)基沸騰，

25、瓊脂溶解。不要溫度過高。1）依靠瓊脂的凝膠強(qiáng)度。瓊脂板的制備0.04g5ml立即從44C-47c的水?。?.5）取出，攪拌并燒平板。直到凝固。使用前，在35C到55C的烘箱里小心干燥瓊脂板，直到瓊脂表面干燥。（若把蓋子拿掉或瓊脂面朝下效果更好）。燒好的平板在3C2C保存5天以上。營(yíng)養(yǎng)瓊脂成份肉浸膏3.0g蛋白陳5.0g瓊脂9g-18g1）水1000ml制備將相應(yīng)組份或脫水完全培養(yǎng)基溶于水，如需要可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為7.00.2。將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到適當(dāng)容量的試管或瓶中。高壓滅菌鍋（6.1）125c滅菌15分鐘。營(yíng)養(yǎng)瓊脂板的制備將約15ml融化的培養(yǎng)基移到滅菌皮氏培養(yǎng)

26、皿中，按B4.2進(jìn)行操作。三糖鐵瓊脂（TSI瓊脂）成份肉浸膏3.0g酵母浸液3.0g蛋白月東20.0gNaCl5.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖1.0g檸檬酸鐵（出）0.3gNa2SO30.3g苯酚紅0.024g瓊脂9g-18g1)水1000ml制備將相應(yīng)組份或脫水完全培養(yǎng)基溶于水，如需要可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌在25c時(shí)pH值為7.40.2。將10ml培養(yǎng)基分裝于試管或平板中。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。置于一個(gè)傾斜的位置，使底部的深度2.5cm到約5cmo尿素瓊脂（Christensen）基礎(chǔ)培養(yǎng)基成份蛋白月東1.0g葡萄糖1.0gNaCl5.0gKH2P

27、O42.0g苯酚紅0.012g瓊脂9g-18g1)水1000ml制備將相應(yīng)組份或脫水完全培養(yǎng)基溶于水，如需要可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌在25c時(shí)pH值為6.80.2。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。尿素溶液成份尿素400g水，最后定容1000ml將尿素溶于水中，過濾滅菌并確認(rèn)無菌。見ISO7218:1996,7.3.2。完全培養(yǎng)基成份基礎(chǔ)培養(yǎng)基（B.7.1）950ml尿素溶液（B.7.2）50ml在無菌條件下，將尿素溶液加入到先前融化并已冷卻到44C-47C的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。將10ml完全培養(yǎng)基分裝于滅菌管內(nèi)。要求傾斜放置。L-賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基成份L-一鹽酸賴氨酸5.0g酵

28、母浸液3.0g葡萄糖1.0g澳甲酚紫0.015g水1000ml制備將上述成分溶于水中，需要時(shí)可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為6.80.2。將2ml-5ml培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到具螺旋帽的精密培養(yǎng)管（6.9）中。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。3-半乳糖甘酶檢測(cè)試劑緩沖溶液成份制備將NaH2PO4溶于約450ml水的容量瓶中。用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.00.2（25C）。加水至50ml。ONPG溶液成份“-硝基苯基-aD-口比喃半乳糖甘（ONPG）0.08g水15ml制備在50c左右將ONP箭于水中。冷卻溶液。完全培養(yǎng)基成份緩沖溶液（B.9.1）5mlONPG溶液（B.

29、9.2）15ml制備將緩沖溶液加入到ONPG溶液中。V-P反應(yīng)試劑VP培養(yǎng)基成份蛋白月東7.0g葡萄糖5.0gK2HPO45.0g水1000mlB.10.1.2制備將上述成分溶于水中，如需要可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為6.90.2。將3ml培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到試管中（6.9）。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。B.10.2肌氨酸溶液（N-氨基肌氨酸）B.10.2.1成份B.10.2.2制備將肌氨酸一水化物溶于水中。B.10.31-奈酚乙醇溶液B.10.3.1成份1-泰酚6g96%乙醇（體積比）100mlB.10.3.2制備將1-奈酚溶于乙醇溶液。B.10.4氫氧化鉀溶

30、液B.10.4.1成份氫氧化鉀40g水100mlB.10.4.2制備將氫氧化鉀溶于水中?？谝┓磻?yīng)試劑胰蛋白月東/色氨酸培養(yǎng)基成份胰蛋白月東10gNaCl5gDL-色氨酸1g水1000ml制備將上述成分溶于沸騰的水中。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為7.50.2。每管加5ml培養(yǎng)基，進(jìn)行分裝。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。Kovacs試劑成份4-二甲氨基苯甲醛5g鹽酸，p=1.18g/ml1.19g/ml25ml2-甲基正丁醛-2-ol75mlB.11.2.2制備混合上述成分。B.12半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂B.12.1成份肉浸膏3.0g蛋白月東5.0g瓊脂4g9g1)水100

31、0mlB.12.2制備將上述成分溶于水中，需要時(shí)可加熱。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為7.00.2。將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到適量的燒瓶中。高壓滅菌鍋（6.1）121c滅菌15分鐘。B.12.3瓊脂板的制備B.13生理鹽水溶液B.13.1成份8.5g1000mlB.13.2制備將氯化鈉溶于水中。如需要，調(diào)節(jié)pH,以便在滅菌后25c時(shí)pH值為7.00.2。分裝上述溶液于燒瓶或試管 （6.9）中， 使得它們滅菌后的體積為高壓滅菌鍋 （6.1）121c滅菌15分鐘。NaCl水90ml-100ml。（非標(biāo)準(zhǔn)化）多個(gè)實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果2000年，在歐洲計(jì)劃SMTCT9620986的框架下，歐洲AFSSA

32、Ploufragan和美國(guó)生化控制系統(tǒng)組織了一次國(guó)際協(xié)作的測(cè)試。這次測(cè)試包含了歐洲9個(gè)國(guó)家的11個(gè)實(shí)驗(yàn)室和美國(guó)的10個(gè)實(shí)驗(yàn)室，選用新鮮干酪凝塊干酪凝塊、干蛋粉、生禽肉和一個(gè)參考物質(zhì)進(jìn)行。每測(cè)試食品樣本含有兩個(gè)不同污染水平，并有一個(gè)陰性質(zhì)控品。從表C.1到C.4中，顯示出從這些協(xié)作中得到每種類型樣品的工作特性的價(jià)值。僅以清晰識(shí)別技術(shù)原因 （偏離協(xié)議） 為基礎(chǔ)， 仔細(xì)分析， 一些實(shí)驗(yàn)室所得數(shù)據(jù)被排除在外。表C.1新鮮干酪凝塊樣本得到的數(shù)據(jù)分析結(jié)果新鮮干酪凝塊（空白）新鮮干酪凝塊（低水平污染）新鮮干酪凝塊（高水平污染）反饋結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室數(shù)232323每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的樣本數(shù)555拒絕接受的實(shí)驗(yàn)室數(shù)222排隊(duì)

33、后留下的實(shí)驗(yàn)室數(shù)212121接受樣本數(shù)105105105準(zhǔn)確性（特異性），100準(zhǔn)確性（敏感性）74.383.8一B性，10083.895.2和諧性，10060.571.7表C.2干蛋粉樣本得到的數(shù)據(jù)分析結(jié)果新鮮干酪凝塊（空白）新鮮干酪凝塊（低水平污染）新鮮干酪凝塊（高水平污染）反饋結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室數(shù)262626每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的樣本數(shù)555拒絕接受的實(shí)驗(yàn)室數(shù)555排隊(duì)后留下的實(shí)驗(yàn)室數(shù)212121接受樣本數(shù)105105105準(zhǔn)確性（特異性），100準(zhǔn)確性（敏感性）98.199一B性，10096.298.1和諧性，10096.298.1表C.2生禽肉樣本得到的數(shù)據(jù)分析結(jié)果新鮮干酪凝塊（空白）新鮮干酪凝塊（

34、低水平污染）新鮮干酪凝塊（高水平污染）反饋結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室數(shù)252525每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的樣本數(shù)555拒絕接受的實(shí)驗(yàn)室數(shù)555排隊(duì)后留下的實(shí)驗(yàn)室數(shù)202020接受樣本數(shù)10099100準(zhǔn)確性（特異性），%100準(zhǔn)確性（敏感性）98100一B性，%10096.9100和諧性，%10096100表C.2參考物質(zhì)得到的數(shù)據(jù)分析結(jié)果參考物質(zhì)（每瓶含5cfu的腸炎沙門氏菌）反饋結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室數(shù)26每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的樣本數(shù)5拒絕接受的實(shí)驗(yàn)室數(shù)1排隊(duì)后留下的實(shí)驗(yàn)室數(shù)25接受樣本數(shù)125準(zhǔn)確性（特異性），%準(zhǔn)確性（敏感性）94.4一B性，%88.8和諧性，%89.1參考書目ISO6887-2,MicrobiologyoffoodandanimalfeedingstuffsPreparationoftestsampies,initialsuspensionanddecimaldilutionsformicrobiologicalexaminationPart