PCR凈化試驗室整體規(guī)劃

1、PCR凈化實驗室設(shè)計整體規(guī)劃1 1PCRPCR 實驗室平面布局PCRPCR 擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行， 即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū)。2 2 實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制PCRPCR 實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求.2.1PCR2.1PCR 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)該實驗

2、區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、 試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域.試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。2 2。2PCR2PCR 標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸（RNARNA、DNADNA）提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定 DNADNA 的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。2 2。3 3 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)該

3、區(qū)域主要進行的操作為 DNADNA 擴增。止匕外，已制備的 DNADNA 模板（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出.為避免氣溶膠所致的污染， 應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。 個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。2.4T2.4T 增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。3 3 污染的預(yù)防與控制PCRPCR 實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染

4、。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組 DNADNA 的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除。3 3。1 1 工作區(qū)域的嚴格劃分(1)(1)各個實驗區(qū)域設(shè)置合理；(2)(2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆. .3 3。2 2 合理的系統(tǒng)設(shè)置(1)(1)合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排

5、的空調(diào)系統(tǒng)；(2)(2)嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。3.3.硼范的操作(1)(1)擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；(2)(2)在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。止匕外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；(3)(3)清潔工作及時、正確.實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔. .除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外， 對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。3 3.儼格的管理(1)(1)嚴格控制進出實驗室的人員.與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；(2)(2)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。(3)(3)擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；(4)(4)擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗人員